API细菌鉴定系统

API微生物鉴定系统,全球金标准,细菌鉴定的重要性-疾病的评估-找出食物变质的原因，从而制定预防的步骤-确保用药治疗洽当-环境控制-流行病学的基础,常规鉴定所遇的困难-分类学复杂及进化-涉及很多生化项目-工业微生物容易出现变异-结果处理及计算麻烦,所引用的分类学方法国际认可-InternationalJournalofSystematicBacteriology资料库整个系统的心脏,API系统,API系统,美国FDA的细菌鉴定标准欧洲药典的细菌鉴定标准国标,-标准化，简易化-在制造过程中，进行质控-FDA标准-用户可用ATCC菌种进行质控-系统化-操作简易-快速报告-30多年的经验，拥有菌种资料25000，鉴定系统的发源生化测试750-1500多篇使用文献,API的优点,API鉴定原理,生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。,API微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易、方便、快捷、科学的鉴定程序。,微生物鉴定,完整的鉴定谱,球菌,杆菌,接触酶,革兰氏,氧化酶,革兰氏,杆菌,球菌,庞大资料库15种试条600种细菌可被鉴定研究用试条：乳酸杆菌，芽胞菌，弯曲菌,API鉴定范围,API试剂类别,API20E/RapiD20E革兰氏阴性杆菌鉴定API20NE非发酵菌鉴定APISTAPH葡萄球菌及微球菌APISTREP链球菌鉴定API20CAUX酵母菌API20A厌氧菌APILISTERIA李斯特菌APICAMPY弯曲菌属APICORYNE棒状杆菌APICH芽胞杆菌/乳酸杆菌,API系统-构成:试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读,API套件,API试剂盒及其配套试剂,培养盒保持潮湿环境,石腊油(容量:125ml)覆盖在指定小孔上,悬浮液(容量:5ml)用於调菌液,附加试条加进指定的生化孔内,API试条每个小孔载有风乾的底物,PSIpettes接种管挑菌落，混匀及接种,安培架,操作步骤1(API20E),分离单个菌落挑单个可疑菌落尽量避免使用高度选择性培养基,调制菌液,悬浮液(容量:5ml),操作步骤2(API20E),将菌液接种到小管或小管及小杯(CIT,VP和GEL),将试条放进培养盒内,将5ml无菌水放进培养盒里,利用石腊油覆盖指定的生化孔(有划线的孔)ADHODCH2SURE,把培养盖盖上,操作步骤3(API20E),把试条放进孵育箱内，利用指定温度及时间API20E:35-37oC，18-24小时,按操作说明书规定，将附加试剂加进适当小孔内,api20E试剂,18-24小时後,API试剂条,24小时出结果,阅读结果,利用编码手册或APILABPLUS软件进出分析,根据说明书上，或彩图的指示，记录结果於报告单上。,全Windows操作界面，多种语言。,API结果原理：-生化结果组合跟资料库內的典型条目(Taxa)作出比较-经计算後，鉴定百比率（%Id）机会率，指示出不同菌类的比较T值（Tindex）=指示出在同一个菌类的相似程度,API结果跟据T值及%Id的组合，作出评语：(i)极好的鉴定结果%Id99.9及T0.75(ii)很好的鉴定结果%Id99.0及T0.50(iii)好的鉴定结果%Id90.0及T0.25(iv)可以接受的鉴定结果%Id80.0及T0(v)可疑的生化谱,不断更新的数据库：-分类学的进化-新的菌种发现-生化反应的演进-鉴定菌种需要的改变,API与日俱进,定向试验,-在细菌学里最普遍的染色方法,革兰氏染色液,步骤,G(),G(),-染色前，所有细胞是透明的,-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合,-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫,-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色,革兰氏染色,原理:检查细菌细胞壁的渗透性,单层厚钛聚糖细胞壁,不紧密外壁层(透乙醇)+薄内壁层钛聚糖,革兰氏阳性革兰氏阴性,革兰氏染色液2(ColorGram2),-特性稳定化的碘液PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质，同时也增强了媒染效果。更容易分别G()及G(-)菌高质量的结晶紫和番红，无沉淀。,接触酶试验,接触酶试验,用于分辨葡萄球菌及链球菌,葡萄球菌,革兰氏阳性球菌,链球菌,接触酶,接触酶,H2O2H2O+O2,接触酶试验,传统方法:,=接触酶(+),+,=接触酶(+),+,原理:,试管法,玻片法,H2O2,O2,菌落,接触酶显色剂,玻片法,试管法,IDColorCatalase接触酶试剂,容许於平板(包括血平板)上作直接检测,组成:-增稠剂:高粘度集中所产生的气泡,防止试剂扩散-Evans兰:兰色使结果更容易阅读,-玻片法-直接在平板上测试,IDCOLORCATALASE接触酶试剂,玻片法:将待检菌落乳化於一滴试剂中直接平板测试:将一滴试剂直接滴於平板上的菌落,步骤:,或,即时产生气泡(5秒内)代表阳性结果。,鉴定用接触酶显色剂,接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱阳性结果，这个试验没有得到充分应用。,IDColorCatalase,产品规格,氧化酶试验,氧化酶试验,用于分辨肠道杆菌及非发酶菌,氧化酶试验,-原理:,TMPD,氧化TMPD,氧化酶,(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺),(深紫色),(透明),氧化酶纸片法,液体API氧化酶试剂,试剂方法:-用2个试管载1-2ml无菌水-第一管为阴性对照:加一滴OX试剂-第二管为测试管:加可疑菌落然後再加二滴OX试剂-比较二支管的颜色:阴性对照:透明,浅紫色结果:OX(-):透明,浅紫色OX(+):紫色,深紫色,(+),结果阅读:,菌落,等待10到30秒钟,阳性:紫色,深紫色,OXIDASE氧化酶试剂,原理:对葡萄糖(Glucose)的发酵(F)或氧化(O)代谢的产酸试验.显色剂会把培养基从绿色转为黄色,OF培养基,操作规程:步骤1:接种前把OF培养基在沸水浴溶解.步骤2:在室温冷却后,每试验分装2个安培的固体OF培养基.步骤3:利用接种针挑单个菌落,穿刺到OF培养基(深度约1cm.)步骤4:把其中一个已接种好的安培(OF.F),用石爉油覆盖1cm.把两个安培盖上朔料帽,培养35-37C,2448小时.,OF培养基,结果阅读:,O+F+,O+F-,O-F-,oil,发酵菌,非发酵菌,低活性,OF培养基,原理:使用半固体培养基(含低瓊脂+明胶)让高活力的微生物在穿刺线周围扩散生长.,操作规程:步骤1:接种前把M培养基在沸水浴中溶解(最长5分钟).步骤2:在室温冷却后,利用挑单个菌落,穿刺M培养基.步骤3:培养35-37C,244小时(部分细菌孵育22-25C).,M培养基,结果阅读:,有动力+无动力-,M培养基,用于分辨,Staphaureus(金葡球菌)Staphhyicus(猪葡萄菌)Staphintermedius(中间).,COAGULASECOAGULASEPOSITIVE(凝固酶+)NEGATIVE(凝固酶-),其他葡萄球菌,凝固酶实验,革兰氏阴性杆菌分类,氧化酶+,非发酵菌鉴定API20NE,肠道杆菌鉴定API20E,API20E及API20NE,革兰氏阴性杆菌例子(大肠杆菌x1000),革兰氏阴性弧菌例子(x1000),革兰氏阳性杆菌分类,触酶-,触酶+,短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration(granulations),短球杆菌,延长状杆菌,细小不透光菌落,20-25C有动力37C无动力,李斯特菌鉴定APIListeria,乳酸菌鉴定API50CHL,棒状杆菌鉴定APICoryne,大体积产芽孢杆菌,芽孢菌鉴定API50CHB,APIListeria及API50CHB,革兰氏阳性产芽孢杆菌例子(炭疽