GB30615-2014食品安全国家标准食品添加剂 竹叶抗氧化物

中华人民共和国国家标准GB30615201420140429发布20141101实施食品安全国家标准食品添加剂竹叶抗氧化物GB3061520141食品安全国家标准食品添加剂竹叶抗氧化物1范围本标准适用于以刚竹属PHYLLOSTACHYSSIETETZUCC竹种的叶为原料，经提取、精制而成的食品添加剂竹叶抗氧化物。注用于生产食品添加剂竹叶抗氧化物的竹叶原料为被子植物门（ANGIOSPERMAE）、单子叶植物纲（MONOCOTYLEDONAE）、禾本目（GRAMINALES）、禾本科（GRAMINAE）、竹亚科（BAMBUSOIDEAE）、刚竹属（PHYLLOSTACHYS）品种12年生的叶子。2分类竹叶抗氧化物根据其溶解性分为水溶性产品和脂溶性产品。其水溶性产品的主要有效成分为竹叶碳苷黄酮（异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷）和对香豆酸、绿原酸等；脂溶性产品的主要有效成分为对香豆酸、阿魏酸、苜蓿素以及竹叶黄酮的酯化产物等。3主要成分的化学名称、结构式、分子式和相对分子质量31异荭草苷311化学名称5,7,3,4四羟基黄酮6C葡萄糖苷312分子式C21H20O11313结构式314相对分子质量44838（按2007年国际相对原子质量）32对香豆酸GB3061520142321化学名称3（4羟基苯基）2丙烯酸322分子式C9H8O3323结构式324相对分子质量16416（按2007年国际相对原子质量）4技术要求41感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽黄色至黄棕色或黄褐色，吸湿时色渐变深取适量试样置于50ML烧杯中，在自然光下观察色泽和状态，嗅其气味气味水溶性产品具有典型的竹叶清香；脂溶性产品清香淡、略带酯味状态粉末状，允许有少量颗粒42理化指标应符合表2的规定。表2理化指标项目指标检验方法水溶性脂溶性总酚,W/400200附录A中A4异荭草苷,W/20附录A中A5对香豆酸,W/05附录A中A6水溶解度（25）/G/100G60附录A中A7乙酸乙酯溶解度（25）,G/100G30附录A中A8灼烧残渣,W/5030附录A中A9干燥减量,W/80GB50093总砷以AS计/（MG/KG）30GB/T500911或GB/T500976铅（PB）/（MG/KG）20GB500912或GB/T500975注水溶性产品可用糊精稀释。GB3061520143附录A检验方法A1安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风柜中进行。A2一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A3鉴别试验A31化学试剂鉴别A311试剂和材料A3111乙醇水溶液（955）。A3112三氯化铁乙醇溶液10G/L。A3113三氯化铝乙醇溶液10G/L。A312鉴别方法A3121称取约05G试样溶于100ML乙醇中，取此溶液1ML滴加23滴三氯化铁乙醇溶液，溶液显深蓝色或蓝紫色。A3122称取约05G试样溶于100ML乙醇中，取此溶液1ML滴加23滴三氯化铝乙醇溶液，溶液显鲜黄色。A32光谱学鉴别A321红外透射光谱鉴别采用溴化钾压片法，按照GB/T6040的规定进行试验，试样的红外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录B）。A322紫外吸收光谱鉴别称取约15MG试样溶于100ML色谱纯甲醇中，在200NM600NM波长范围内进行紫外扫描，试样的紫外光谱应与对照图谱一致（对照图谱见附录C）。A33有效成分分析及其指纹图谱A331方法提要GB3061520144试样用色谱纯甲醇溶解，以乙腈乙酸水溶液（199）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二级管阵列检测器，用含异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸等八个对照品的标准图谱和试样图谱进行对照，确定竹叶抗氧化物产品的有效成分及类别差异。A332试剂和材料A3321乙腈（色谱纯）。A3322甲醇（色谱纯）。A3323冰乙酸（优级纯）。A3324水（超纯水）。A3325异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸标准品纯度980。A3326混标溶液分别称取上述8个对照品（A3325）各5MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至10ML，混匀，置冰箱中保存，此溶液为八个对照品的混标溶液。A333仪器和设备A3331高效液相色谱仪。A3332紫外光检测器可变波长。A3333数据处理系统色谱工作站或数据处理机。A334参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A1，竹叶抗氧化物指纹图谱测定典型高效液相色谱图见附录D中D1和D2。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长250MM，内径46MM，内装C18填充物，粒径5M或是相当者柱温/OC40流动相A乙腈；B乙酸水溶液（199）梯度洗脱条件0MIN15MIN，A15，B85；15MIN25MIN，A1540，B8560；25MIN34MIN，A40，B60；34MIN40MIN，A4015，B6085流动速度/（ML/MIN）1检测器检测波长/NM330进样量/L10A335分析步骤A3351试样处理准确称取试样100MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至100ML，经微孔滤膜（045M）过滤，即得试样溶液。A3352试样测定准确吸取试样溶液10L，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性。试样的高效液相色谱图应与对照图谱一致（对照图谱见附录D）。A4总酚测定A41方法提要GB3061520145福林（FOLIN）试剂在碱性条件下极不稳定，可使酚类化合物还原而呈蓝色反应。在对羟基苯甲酸浓度00005MG/ML0016MG/ML范围内，其浓度与吸光度符合比尔定律，可用对羟基苯甲酸为对照品进行定量比色测定得试样的总酚含量。A42试剂和材料A421乙醇水溶液（37）。A422乙醇水溶液（91）。A423碳酸钠溶液200G/L。A424对羟基苯甲酸标准品纯度980。A425对羟基苯甲酸标准溶液0250MG/ML，称取干燥至恒重的对羟基苯甲酸标准品250MG，用乙醇水溶液（A421）溶解并定容至100ML。A426福林试剂（自行配制或外购）于2000ML磨口烧瓶中放入100G钨酸钠（NA2WO42H2O）、25G钼酸钠（NA2MOO42H2O）、700ML水、50ML85磷酸（H3PO4）、100ML盐酸，小火沸腾回流10H，去除冷凝器后，加入50G硫酸锂（LI2SO4）、50ML水和数滴溴水（99），摇匀，在通风柜内进行，再煮沸15MIN以去除过量的溴，冷却后加水定容至1000ML，混合均匀，过滤。试剂呈金黄色，储存于棕色瓶内，使用时以1份原液于2份水稀释均匀。A43仪器和设备A431分光光度计。A432万分之一电子天平感量00001G。A433移液枪（或移液管）。A434容量瓶。A44测定步骤A441试样处理准确称取竹叶抗氧化物试样100MG（精确至00001G），水溶性产品用乙醇水溶液（A421）溶解并定容至100ML，脂溶性产品用少量乙醇水溶液（A422）溶解后、再用乙醇水溶液（A421）定容至100ML；用定性滤纸过滤，即得试样溶液。A442标准曲线的绘制准确吸取对羟基苯甲酸标准溶液0ML、005ML、010ML、020ML、040ML、080ML、120ML，相当于对羟基苯甲酸0MG、00125MG、0025MG、0050MG、010MG、020MG、030MG移入25ML具塞试管中，分别用水稀释至100ML；各加入10ML福林试剂和20ML20碳酸钠溶液，试管在501的恒温水浴中加热30MIN，然后用水冷却并稀释至25ML。室温放置30MIN，用1CM比色杯测定745NM的吸光度。以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线或求取线性回归方程。A443试样测定准确吸取试样溶液1ML，按上述标准曲线制作中的操作步骤（A442）于745NM处进行吸光度测定。根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的对羟基苯甲酸含量。A45结果计算总酚（以对羟基苯甲酸计）的质量分数W1按公式（A1）计算GB30615201461001221VMVMW1（A1）式中M1依据标准曲线计算出的待测液中总酚含量的数值，单位为毫克（MG）；V2待测液总体积的数值，单位为毫升（ML）；M2供试样取样质量的数值，单位为毫克（MG）；V1待测液分取体积的数值，单位为毫升（ML）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过50。A5异荭草苷测定A51方法提要试样经甲醇溶解，以乙腈乙酸水溶液（199）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二极管阵列检测器，对试样中的异荭草苷进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。A52试剂和材料A521乙腈（色谱纯）。A522甲醇（色谱纯）。A523冰乙酸（优级纯）。A524水（超纯水）。A525异荭草苷标准品纯度980。A526异荭草苷标准溶液准确称取异荭草苷标准品5MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至10ML，混匀，置冰箱中保存。此溶液1ML含异荭草苷05MG。A53仪器和设备A531高效液相色谱仪。A532紫外光检测器可变波长。A533数据处理系统色谱工作站或数据处理机。A54参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A2，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A2色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长250MM，内径46MM，内装C18填充物，粒径5M或是相当者柱温/OC40流动相A乙腈；B乙酸水溶液（199）梯度洗脱条件0MIN15MIN，A15，B85；15MIN25MIN，A1540，B8560；25MIN34MIN，A40，B60；34MIN40MIN，A4015，B6085流动速度/（ML/MIN）1检测器检测波长/NM330进样量/L10GB3061520147A55分析步骤A551试样处理准确称取竹叶抗氧化物试样100MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至100ML，经微孔滤膜（045M）过滤，即得试样溶液。A552标准曲线的绘制准确吸取一定量的异荭草苷标准溶液，分别稀释4、8、10、16、20和40倍，进样10L，在规定色谱条件下，进行色谱分析。根据异荭草苷标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、异荭草苷浓度为横坐标，绘制标准曲线。A553试样测定准确吸取试样溶液10L，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A56结果计算异荭草苷的质量分数W2按公式（A2）计算100331MVCW2（A2）式中C1依据标准曲线计算出的待测液中的异荭草苷浓度的数值，单位为毫克每毫升（MG/ML）；V3供试样定容体积的数值，单位为毫升（ML）；M3供试样取样质量的数值，单位为毫克（MG）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过25。A6对香豆酸测定A61方法提要试样经甲醇溶解，以乙腈乙酸水溶液（199）为流动相，用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器或二极管阵列检测器，对试样中的对香豆酸进行反相高效液相色谱分离和测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。A62试剂和材料A621乙腈（色谱纯）。A622甲醇（色谱纯）。A623冰乙酸（优级纯）。A624水（超纯水）。A625对香豆酸标准品纯度980。A626对香豆酸标准溶液准确称取对香豆酸标准品10MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至10ML，混匀，置冰箱中保存。此溶液1ML含对香豆酸10MG。A63仪器和设备A631高效液相色谱仪。GB3061520148A632紫外光检测器可变波长。A633数据处理系统色谱工作站或数据处理机。A64参考色谱条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A3，其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A3色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱C18ODS柱，柱长250MM，内径46MM，内装C18填充物，粒径5M或是相当者柱温/OC40流动相A乙腈；B乙酸水溶液（199）梯度洗脱条件0MIN15MIN，A15，B85；15MIN25MIN，A1540，B8560；25MIN34MIN，A40，B60；34MIN40MIN，A4015，B6085流动速度/（ML/MIN）1检测器检测波长/NM310进样量/L10A65分析步骤A651试样处理准确称取竹叶抗氧化物试样100MG（精确至00001G），用甲醇溶解并定容至100ML，经微孔滤膜（045M）过滤，即得试样溶液。A652标准曲线的绘制准确吸取一定量的对香豆酸标准溶液，分别稀释8、10、16、32、64、128和256倍，进样10L，在规定色谱条件下，进行色谱分析，根据对香豆酸标准溶液的不同进样量及相应谱峰面积，以色谱峰面积为纵坐标、对香豆酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。A653试样测定准确吸取试样溶液10L，在规定色谱条件下，进行色谱分析，以保留时间定性，峰面积外标法定量。A66结果计算对香豆酸的质量分数W3按公式（A3）计算1004423MVCW（A3）式中C2依据标准曲线计算出的待测液中对香豆酸浓度的数值，单位为毫克每毫升（MG/ML）；V4供试样定容体积的数值，单位为毫升（ML）；M4供试样取样质量的数值，单位为毫克（MG）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过25。A7水溶解度测定A71仪器和设备GB3061520149A711电热恒温干燥箱。A712百分之一电子天平感量001G。A72分析步骤取200ML的具塞锥形瓶，干燥至恒重（M5）后，准确称取100G蒸馏水（精确至001G），然后加入6G10G水溶性竹叶抗氧化物（精确至001G），在25条件下边加边搅拌，在5MIN内使其充分溶解，静置10MIN，倒出上清液，瓶及残渣干燥至恒重（M7），根据减轻的质量计算水溶解度。A73结果计算水溶解度以W4表示，其数值以克每百克（G/100G）表示，按公式（A4）计算7654MMMW（A4）式中M5干燥后锥形瓶质量的数值，单位为克（G）；M6供试样取样量的数值，单位为克（G）；M7干燥后锥形瓶和残渣质量的数值，单位为克（G）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过50。A8乙酸乙酯溶解度测定A81试剂和材料乙酸乙酯。A82仪器和设备A821电热恒温干燥箱。A822百分之一电子天平感量001G。A83分析步骤取200ML的具塞锥形瓶，干燥至恒重（M8）后，准确称取100G乙酸乙酯（精确至001G），然后加入5G10G脂溶性竹叶抗氧化物（精确至001G），在25条件下边加边搅拌，在5MIN内使其充分溶解，静置10MIN，倒出上清液，瓶及残渣干燥至恒重（M10），根据减轻的质量计算乙酸乙酯溶解度。A84结果计算乙酸乙酯溶解度以W5表示，其数值以克每百克（G/100G）表示，按公式（A5）计算10985MMMW（A5）式中M8干燥后锥形瓶质量的数值，单位为克（G）；M9供试样取样量的数值，单位为克（G）；M10干燥后锥形瓶和残渣质量的数值，单位为克（G）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过50。GB30615201410A9灼烧残渣测定A91分析步骤称取约2G试样（精确至00001G），置于预先恒重的坩埚内，先用小火缓缓加热至完全炭化，然后小心移入高温炉内于60025灼烧至恒重。A92结果计算灼烧残渣的质量分数W6按公式（A6）计算100121312116MMMMW（A6）式中M11坩埚和灼烧残渣质量的数值，单位为克（G）；M12坩埚质量的数值，单位为克（G）；M13坩埚和供试样质量的数值，单位为克（G）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对差值不超过50。GB30615201411附录B竹叶抗氧化物红外透射光谱图B1水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图见图B1。图B1水溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图B2脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图见图B2。图B2脂溶性竹叶抗氧化物红外透射光谱示意图注水溶性竹叶抗氧化物在3400CM1、2930CM1、1610CM1、1075CM1等附近有特征性吸收，分别示酚羟基、苯环上碳氢键、苯环骨架及羰基的伸缩振动；脂溶性竹叶抗氧化物在3400CM1左右的酚羟基峰大大减