革兰氏染色原理.ppt

G菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。,G菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。,革兰氏-染色原理：,第一步：结晶紫使菌体着上紫色第二步：碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。第四步：沙黄复染，增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌。,溶菌酶对细胞壁的作用,可切断NAM和NAG之间的1，4糖苷键，引起细菌裂解。对G菌，在EDTA存在下，受溶菌酶作用。溶菌酶处理后的菌细胞应保存在弱高渗（0.10.2M）蔗糖液中。,青霉素对细菌细胞壁的作用,Penicillium与转肽酶结合，而使该酶失活，抑制了侧链末端的丙氨酸与五肽桥的连接，破坏了细菌细胞壁的完整性（即抑制肽聚糖的合成），因此，Penicillium仅对正在生长着的细菌，且主要是对G+菌有效。,6周质空间（periplasmicspace）,又称壁膜空间。指位于细胞壁与细胞膜之间的狭窄间隙，革兰氏阳性细菌与阴性细菌均有。内中含有多种蛋白质，例如蛋白酶、核酸酶等各种解聚酶，运送某些物质进入细胞的结合蛋白，以及趋化性的受体蛋白等。,Table8.RepresentativeperiplasmicproteinsinE.coli.BindingproteinsForaminoacids(e.g.histadine,arginine)Forsugars(e.g.glucose,maltose)Forvitamins(e.g.thiamine,vitaminB12)Forions(e.g.phosphate,sulfate)BiosyntheticenzymesFormureinassembly(e.g.transglycosylases,carboxypeptidases,transpeptidases)Forfimbrialsubunitsecretionandassembly(e.g.chaperonins)DegradativeenzymesphosphatasesproteasesDetoxifyingenzymesBeta-lactamases(e.g.penicillinase)Aminoglycoside-phosphorylatingenzymes,7细胞壁缺损型细菌,原生质体protoplast球形体spheroplastL型细菌L-form,原生质体的特点：1、无细胞壁，为圆球形2、对环境敏感：渗透压，震荡，离心，易溶菌3、有鞭毛，而不能运动4、不被噬菌体感染（因为失去吸附位点）,二细胞膜(cytoplasticmembrane）,1.概念：细胞膜是紧贴细胞壁内侧包围细胞质的一层柔软，富有弹性的半透明薄膜。,2.观察分离方法：（1)质壁分离(2)选择性染色(3)电镜技术(4)溶菌酶处理,1972年Singer和Nicolson提出的细胞膜液态镶嵌模型,4.细胞膜的结构与化学组成,细胞膜液态镶嵌模型,认为：膜是由球形蛋白与磷脂按照二维排列方式构成的流体镶嵌式，流动的脂类双分子层构成了膜的连续体，而蛋白质象孤岛一样无规则地漂流在磷脂类的海洋当中。,Figure10.Fluidmosaicmodelofabiologicalmembrane.Inaqueousenvironmentsmembranephospholipidsarrangethemselvesinsuchawaythattheyspontaneouslyformafluidbilayer.Membraneproteins,whichmaybestructuralorfunctional,maybepermanentlyortransientlyassociatedwithonesideortheotherofthemembrane,orevenbepermanentlybuiltintothebilayer,whileotherproteinsspanthebilayerandmayformtransportchannelsthroughthemembrane.,5.细胞膜的功能：,a)控制细胞内外物质（营养物质和代谢废物）的运送、交换；b)维持细胞内正常渗透压的渗透屏障作用；c)合成细胞壁各种组分（LPS、肽聚糖、磷壁酸）和荚膜物质等大分子的场所；d)进行氧化磷酸化或光合磷酸化的产能基地；e)参与能量代谢，在细菌中，电子传递链和ATP合成酶均位于细胞膜；f)提供鞭毛的着生点并提供鞭毛运动所需能量。,Table6.Functionsoftheprocaryoticplasmamembrane.1.Osmoticorpermeabilitybarrier2.Locationoftransportsystemsforspecificsolutes(nutrientsandions)3.Energygeneratingfunctions,involvingrespiratoryandphotosyntheticelectrontransportsystems,establishmentofprotonmotiveforce,andtransmembranous,ATP-synthesizingATPase4.Synthesisofmembranelipids(includinglipopolysaccharideinGram-negativecells)5.Synthesisofmurein(cellwallpeptidoglycan)6.Assemblyandsecretionofextracytoplasmicproteins7.CoordinationofDNAreplicationandsegregationwithseptumformationandcelldivision8.Chemotaxis(bothmotilityperseandsensingfu