(五)、血型、交叉配血---

实验五一、ABO血型鉴定,1.正向定型2.反向定型,二、交叉配血,ABO血型鉴定实验原理,正定型根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A、抗B血清室温下与被检红细胞在盐水中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有血型抗体相对应的抗原，来判断和鉴定被检者的血型。,反定型用已知标准A，B，O型红细胞分别与被检血清反应，若出现凝集，证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。根据血清中存在的血型抗体和Landsteiner定律判断和鉴定被检者血型。,试剂器材,试剂标准抗A、抗B血型定型试剂5%（体积比）A，B，型标准红细胞生理盐水悬液。生理盐水器材试管、试管架、记号笔、吸管、离心机、玻片、显微镜标本5%被检红细胞生理盐水悬液，血清或血浆,操作步骤正定型,试管法：1：标记试管取试管两支，分别标记抗A，抗B。2：加定型试剂将抗A、抗B试剂各1滴分别加入抗A，抗B试管中。3：加入红细胞悬液各加5%被检者红细胞生理盐水悬液1滴于试管中，混匀，以1000r/min离心1min。4：观察结果先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。,5：判断结果凝集判断标准：完全凝集者，上层液无色清亮，底部有红细胞凝块，呈花边状，轻弹试管凝块不散开。完全不凝集的试管，上层液无色清亮，血细胞均匀沉积管底，边缘整齐，重悬细胞后成均匀的红色悬液。,试管法：1：标记试管取试管3支，分别标记A，B，O。2：加入样本血清或血浆血样经2500r/min离心3min分离出血浆或血清，在A，B，O试管中分别加1滴血浆或血清，3：加标准红细胞悬液再分别加入5%A型、B型、型标准红细胞生理盐水悬液各1滴，混匀，以1000r/min离心1min。4：观察结果先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。,反定型,红细胞的ABO正反定型结果判断,正向定型反向定型抗A抗B抗A,BA细胞B细胞O细胞-+-O+-+-+-A-+-B+-AB,判断结果,注意事项：,1.严格标记，器材干燥洁净，防止溶血，避免交叉污染。2.试管法出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并有补体激活。3.46个月以内婴儿反定型可能不凝集或凝集很弱，年老体弱者抗原较弱，最好用试管法鉴定血型。4.亚型红细胞抗原较弱，凝集较弱。5.防止冷凝集素的干扰。6.某些疾病可能使红细胞定型困难：严重的肠道细菌感染出现类B抗原；血清中存在病理性冷凝集素；部分高球蛋白与异常球蛋白症患者。,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤1采血部位成人以左手无名指内侧为宜,6月以下婴幼儿通常选拇指内侧或足跟两侧采血。2轻轻按摩采血部位。3用棉签蘸取消毒液消毒局部皮肤、待干。,4紧捏刺血部位,使其自然充血。5用无菌刺针穿刺,动作应迅速,深度23mm,稍加挤压以血液流出为宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完毕,用干棉球压住伤口,止血3min。,标本要求,1除特殊情况外，不在耳垂采血。采血应避开冻疮、炎症、损伤、水肿等部位。2采血后轻轻挤压血液顺畅流出，避免过度挤压，混入组织液易致凝固。3进行多项检验时,采血次序为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、涂片等。出血时间、凝血时间用APTT、PT和PLT计数联合取代。,二、交叉配血实验,分类1.“主侧”配血2.“次侧”配血,献血者受血者红细胞红细胞血清血清,主侧,次侧,供血者红细胞与受血者血清反应（主侧交叉配血）受血者红细胞与供血者血清反应（次侧交叉配血）其目的是检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。,交叉配血实验技术,1.盐水介质法2.酶介质法3.抗人球蛋白介质法4.凝聚胺法5.微柱凝胶免疫技术,实验原理,盐水介质法（Immediatespin，IS）是利用天然IgM类血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反应，通过离心观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者血清之间有无凝集现象，判断供血者与受血者之间有无ABO血型不合的情况。,酶技术,利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应主要用于一些不完全抗体的检测,凝聚胺技术,利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，形成可逆凝集，加入解聚液仅可使非特异性聚集分散，而发生抗原抗体特异性反应凝集不会散开。,凝胶卡式检测法的工作原理,将红细胞悬液和血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在微柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性游离的红细胞，挤过装有过滤介质的微柱到达底部，证明未发生凝集，判断凝集反应阴性,试剂器材,1：试剂生理盐水2：器材试管，试管架、记号笔、一次性塑料吸管，玻片、离心机，显微镜，3：标本患者、献血员静脉血,操作步骤,1：患者标本准备分离血清，标记为PS（patientserum）配制5患者红细胞生理盐水悬液，标记为PC（patientcell）：献血员标本准备分离血清，标记为DS（donorserum）配制5献血员红细胞生理盐水悬液，标记为DC（donorcell）,交叉配血,1.取两支试管，分别标明主，次，即主侧配血管和次侧配血管。2.在主侧配血管中加PS1滴，滴，3.在次侧配血管中加DS1滴，滴，4.混匀，1000r/min离心1min。5.观察结果先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻摇动，观察管底反应物有无凝集，重悬液在低倍镜下观察有无红细胞凝集。,判断结果：,凝集结果判断：判断标准同正定型试管法配血是否相合判断标准：ABO同型配血，主侧，次侧均无溶血及凝集，血型相合，