HPLC 常见故障分析及日常保养知识

WatersConnectionsSM,HPLC常见故障分析及日常保养知识马克刚WATERSCAG,HPLC的梯度系统,WatersConnectionsSM,能引起HPLC发生问题的潜在因素:工作环境电源及地线流动相泵进样器保护柱在线过滤器连接管路色谱柱检测器数据处理装置操作,WatersConnectionsSM,逻辑判断及处理问题化学品环境机器*色谱柱/保护柱*电源*泵*溶液*地线*进样器*样品*温度*检测器*湿度*数据处理单元*清洁程度从最简单,容易之处入手:如1.停止流速;2.去掉柱子;,WatersConnectionsSM,系统冲洗-去掉柱子和保护柱1.检查反压-应该为零或者很小;2.进空白-基线应无问题;3.检查基线状况;,WatersConnectionsSM,基线问题分析,WatersConnectionsSM,基线噪声流动相内含有空气-脱气处理检测池内有气泡-冲洗检测池或在检测池出口接一段内径0.009“的管子(此法只适用于UV检测器!)色谱柱内有未洗脱尽的组份-洗脱色谱柱.系统有漏液之处-检漏并处理电噪声-去除噪声源,信号线屏蔽,检查系统接地状况检测器光源灯能量低-更换光源灯检测池污染-冲洗检测池,WatersConnectionsSM,基线周期性噪声绝大多数情况下是来源于泵的问题泵头内有气泡-流动相脱气,泵头排气(注意正确的排气方法)泵进出口阀有问题-更换阀组件柱塞杆有问题-更换柱塞杆及其密封圈溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源,非周期性噪声气泡-流动相脱气检测池内有气泡-流动相脱气,检测池后加适当反压系统有漏液之处-检漏并处理溶剂混合不良-加装混合器电噪声-去除噪声源,WatersConnectionsSM,基线漂移系统未充分平衡梯度系统-溶剂A于溶剂B的ABS值相差大-试用另种溶剂或使用基线扣除法色谱柱有其他组份被洗脱出-冲洗,直至基线稳定溶剂发生变化(如溶入气体或溶剂挥发)-氦气或脱气机脱气,溶剂瓶避光,密封(但要注意防止溶剂瓶内产生负压)系统有漏液之处-检漏并处理环境温度影响(尤其对示差,电导,电化学检测)-室温,柱温,检测池温度控制反压变化-溶剂和样品过滤.注意黏度过大的样品,WatersConnectionsSM,WatersConnectionsSM,基线周期性波动温度影响-环境温度及检测池温度控制.注意空调机的影响溶剂混合不良-加装混合器流动相脱气不良-流动相脱气供电电源的影响泵不良-检修处理,WatersConnectionsSM,基线有无规律的尖峰气泡-溶剂脱气电路接触不良-保证清洁,接线牢固,接点无氧化光源灯不良-检查处理电噪声-去除噪声源,WatersConnectionsSM,脱气方法在线脱气机脱气氦气脱气真空过滤脱气注意:溶剂应每天脱气,WatersConnectionsSM,无样品峰未进样泵未工作漏液流动相或样品的问题柱子或保护柱的问题数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题最简单快捷的检查-泵是否工作,系统是否漏液,进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应,WatersConnectionsSM,负峰组份的ABS值小于溶剂的ABS值气泡通过了检测池对RI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的所有峰都是负峰-可能是检测器输出与数据单元连线极性接反,WatersConnectionsSM,峰形不好-如峰拖尾,峰分叉,出肩膀在线过滤器(INLINEFILTER)污染(通常会伴随有系统压力升高之现象)色谱柱污染系统有不正常的死体积-检查管路连接是否正确-内径,接头保护柱(GUARDCOLUMN)污染溶剂不好或使用不对样品不好色谱柱坏了-*PH8会破坏柱子内的填料*流速变化率太大-操作上应注意,WatersConnectionsSM,系统性能两个要点-峰保留时间(RT)重现性,峰面积重现性RT重现性不好-无规律变化:*流量不稳-气泡,漏液,泵*温度影响有规律的变化,且逐渐趋于稳定:系统未充分平衡RT重现性好,但峰面积重现性不好-*进样量-选用定量管进样时,进样体积应大于3倍定量管容积;*样品,气泡;*样品在流动相各组份中不能充分溶解(通常伴随有柱压逐渐升高且经反冲后,柱压会恢复正常之现象);*基线噪声的影响;*积分处理的影响;,WatersConnectionsSM,工作环境电源-容量稳定性地线-系统统一电源,统一接地清洁-不要轻视灰尘的影响湿度-特别是近海地区温度-空调机的影响,WatersConnectionsSM,某些意想不到的因素或不良的工作习惯会影响您的工作无线装置或于仪器同一供电线路中的高频设备及频繁启动的大功率设备可能会带来噪声干扰载液/气容器不清洁带来干扰质量不良的化学品或使用不当(如滤膜)带来的影响实验前/后的准备和收尾工作.实验器皿和器械的清洁正确的开机/关机操作,WatersConnectionsSM,用户可自己作的日常检查泵耐压检查流量检查-用脱气的甲醇,泵后要有约1000PSI的反压进样器同样进样量的重现性检测器开机自检(CALIBRATION)SE/RE值(UV检测器)定期清洗系统-溶剂过滤头,泵,进样器,检测器清洗方法定期清洁系统-除尘清洁电路时,需注意人身安全及防止静电损坏电路板,510泵示意图,515泵示意图,7725i,717自动进样器,486光路示意图,2487光路示意图,示差检测器流路示意图,WatersConnectionsSM,想一想,看一看:1.HPLC系统中各机器是否开机正常2.溶剂瓶内溶剂是否新鲜且脱气3.泵是否已初始化且工作正常4.系统管路及电路是否连接正常5.检测器是否通过自检且工作正常6.溶剂瓶会不会产生负压7.溶剂的PH值是否合适8.对温度敏感的检测器是否被阳光直射或被空调直吹9.溶剂瓶是否被阳光直射10.停机前是否将系统及柱子中的缓冲液置换干净11.较长时间停机之前是否将柱子摘下,且系统最后用甲醇冲洗过(系统不能在缓冲液或THF下长时间停机)12.样品是否能完好的溶于流动相13.所选用的过滤膜是否正确14.若用7725进样器,所用的进样针是否正确,WatersConnectionsSM,切忌:示差/荧光检测器的出口管堵塞直接用甲醇置换缓冲液进的样品会在流动相中产生沉淀用水溶性滤膜过滤有机溶剂溶剂,特别是缓冲液撒漏在机器内流速变化率太大高温使用下的柱子尚未降下温度就停泵阳光直射溶剂瓶或检测器空调直吹检测器溶剂瓶完全密封THF在不密封情况下长期存放,WatersConnectionsSM,WATERS仪器保险合同(TAP)介绍:(TAP=TotalAssurancePlan)好处:*每年定期保养,保证仪器长期处于良好状况;*大大减少故障停机时间,提高您的工作效率,节省您的时间和化学品的消耗;*延长您的机器寿命;*便于您预先作出每年的仪器维修保养,零件采购经费计划;TAP内容:*每年定期更换机器易损件.如各密封件,光源灯等;*除定期更换的部件外,其他部件若出现故障,包括价格高的部件,维修或更换无需再付