《血清总胆固醇测定》PPT课件

血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）,组员：田甜龙春燕潘秀珍叶娜娜,胆固醇,英文名称：cholesterol，Ch定义：胆固醇又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲的衍生物。是最早从动物胆石中分离出具有羟基的固醇类化合物，1816年化学家本歇尔将这种具脂类性质的化合物命名为胆固醇。学名：5-胆烯-3-醇。在类固醇核的C-3上连接一羟基，而在C-17位上接有一条八碳或更多碳原子的脂族侧链。是由乙酰辅酶A通过异戊二烯单位的缩合反应而合成。,胆固醇结构式,胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等有机溶剂。在胆汁中它以溶于与胆汁酸、卵磷脂所形成的微胶粒中运载的。任何原因造成胆汁中胆固醇含量增多和或胆汁酸、卵磷脂含量减少，致使胆固醇浓度相对增高，就可使胆固醇从胆汁中析出结晶而形成结石。一般都知道，脂类物质主要分为两大类。脂肪（主要是甘油三酯）是人体内含量最多的脂类，是体内的一种主要能量来源；另一类叫类脂，是生物膜的基本成分，约占体重的5%，除包括磷脂、糖脂外，还有很重要的一种叫胆固醇。胆固醇又分为高密度胆固醇和低密度胆固醇两种，前者对心血管有保护作用，通常称之为“好胆固醇”，后者偏高，冠心病的危险性就会增加，通常称之为“坏胆固醇”。血液中胆固醇含量每单位在140199毫克之间，是比较正常的胆固醇水平。胆固醇是由甾体部分和一条长的侧链组成。人体中胆固醇的总量大约占体重的0.2%，骨质约含10毫克，骨骼肌约含100毫克，内脏多在150250毫克之间，肝脏和皮肤含量稍高，约为300毫克。脑和神经组织中含量最高，每100克组织约含2克，其总量约占全身总量的l4。,胆固醇的作用功能,1.形成胆汁酸胆汁产于肝脏而储存于胆囊内，经释放进入小肠与被消化的脂肪混合。胆汁的功能是将大颗粒的脂肪变成小颗粒，使其易于与小肠中的酶作用。在小肠尾部，85%95%的胆汁被重新吸收入血，肝脏重新吸收胆酸使之不断循环，剩余的胆汁（5%15%）随粪便排出体外。肝脏需产生新的胆酸来弥补这5%15%的损失，此时就需要胆固醇。2.构成细胞膜胆固醇是构成细胞膜的重要组成成分，细胞膜包围在人体每一细胞外，胆固醇为它的基本组成成分，占质膜脂类的20%以上。有人曾发现给动物喂食缺乏胆固醇的食物，结果这些动物的红细胞脆性增加，容易引起细胞的破裂。研究表明，温度高时，胆固醇能阻止双分子层的无序化；温度低时又可干扰其有序化，阻止液晶的形成，保持其流动性。因此，可以想象要是没有胆固醇，细胞就无法维持正常的生理功能，生命也将终止。3.合成激素激素是协调多细胞机体中不同细胞代谢作用的化学信使，参与机体内各种物质的代谢，包括糖、蛋白质、脂肪、水、电解质和矿物质等的代谢，对维持人体正常的生理功能十分重要。人体的肾上腺皮质和性腺所释放的各种激素，如皮质醇、醛固酮、睾丸酮、雌二醇以及维生素D都属于类固醇激素，其前体物质就是胆固醇。,血清总胆固醇,血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分，其中低密度脂蛋白（LDL）中含量最多，其次是高密度脂蛋白（HDL）和极低密度脂蛋白（VLDL），乳糜微粒（CM）中含量最少。测定方法：化学法与酶法。化学法一般包括:抽提，皂化，毛地黄皂苷沉淀纯化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是胆固醇氧化酶法,实验目的：,掌握血清总胆固醇测定方法（酶法）与临床意义,实验原理：,血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下生成4-胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。上述三个酶的催化作用呈连锁反应，实验中把三个酶按比例混合在一起，便于使用。本方法特异性好，灵敏度高，既可用于手工操作，也可进行自动化分析。,胆固醇酯酶胆固醇酯+H2O-胆固醇+脂肪酸胆固醇氧化酶胆固醇+1/2O2+H2O-4-胆甾烯-3-酮+H2O2过氧化物酶2H2O2+4-氨基安替比林+酚-醌亚胺+4H2O,实验试剂：,基础液：100ml0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.7）中含胆酸钠129mg,4-氨基安替比林16mg，苯酚132mg，TritonX-1000.2ml。酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合剂1ml，加基础液30ml混匀即得。胆固醇标准液（5.17mmol/L）：精确称取胆固醇200mg，用纯无水乙醇溶解，用乙醇定容至100ml。分装，4摄氏度保存，临用时取出。,胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性。TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂），它的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。,实验操作：,取试管3支，按下表操作：,混匀后置于37摄氏度水浴中保温15分钟，用空白管调零，在500nm波长处测吸光度。,计算,血清总胆固醇（mmol/L）=A测定/A标准5.17参考值:3.05.20mmol/L;危险阈值：5.206.20mmol/L；高胆固醇血症：=6.20mmol/L,临床意义:,1.TC增高常见于动脉粥样硬化，原发性高脂血症（如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺陷症，多源性高胆固醇血症，混合性高脂蛋白血症等），糖尿病，肾病综合症，总胆管阻塞，甲状腺功能减退，肥大性骨关节炎，老年性白内障和牛皮癣。2.TC降低常见于低脂蛋白血症，贫血，败血症，甲状腺功能亢进，肝疾病，严重感染，营养不良，肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。,注意事项：,1.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。2.血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。,