紫花地丁多糖提取(1).ppt

紫花地丁多糖提取,微波、超声波、水提多糖工艺筛选,背景及意义,紫花地丁性寒，味微苦，有清热解毒，凉血消肿的功效。主治用于痈肿疔疮、乳痈肠痈、丹毒肿痛、毒蛇咬伤等症。现代药理学发现其具有抑菌、调节免疫的作用。近年来的研究还表明，紫花地丁所含的磺化聚糖能抑制艾滋病活性，在低于毒性剂量的浓度下，可完全抑制艾滋病毒（HIV）的生长，紫花地丁的二甲亚砜提取物具有很强的体外抑制HIV的活性，在防治艾滋病方面有较好的前景。,背景及意义,多糖广泛分布于动物、植物和微生物中，是一类结构复杂的天然高分子化合物，对动植物的生命至关重要。大量的药理和临床研究表明，多糖具有广泛的药理及生物活性，如免疫促进、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂、抗衰老等，在保肝、保护神经元等方面也具有一定的作用。,背景及意义,紫花地丁的取材方便，且其发展前景可观。但鲜有其多糖提取工艺的有关文献，现做最优工艺筛选（超声、微波、水提）实验，以求得到最佳提取工艺，以便后续研究。,研究目标,本实验通过对三种紫花地丁多糖提取工艺（超声、微波、水提）的筛选，来选出最优的多糖提取工艺方法，以便后续对紫花地丁的药理、化学性质和药用价值的后续研究，充分发挥其临床作用，开发新的药理活性。,研究内容,通过平行试验，进行紫花地丁多糖提取的最佳工艺筛选，观察三种工艺（超声、微波、水提）的提取效果，并测所提的多糖含量，采用硫酸-苯酚法对提取后样品的含糖量进行初步比较，得出最佳的提取方法。,研究方法,进行三种提取工艺（超声、微波、水提）筛选；硫酸-苯酚法测定多糖含量,具体措施,1.原料预处理：挑选新鲜的紫花地丁，用真空冷冻干燥制成风干样品，经粉碎，过筛备用。,2.多糖测定方法：测定方法采用苯酚-硫酸法。紫花地丁多糖测定标准曲线绘制：精密称取干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.0020g于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.00、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60ml，各以水补至2.0ml，然后加入6苯酚2.0ml及浓硫酸7.0ml，混匀，置沸水浴中15min，取出，放入冷水中冷却至室温，于490nm测定吸光度A值。计算：多糖含量=（C*V）/M*100式中：C为提取离心后溶液中多糖的浓度，（g/ml）；V为溶液体积，ml；M为提取所用紫花地丁质量，g。,具体措施,3.超声波法提取紫花地丁多糖正交试验设计：通过单因素试验确定出以：超声功率、超声波作用时间、液料比、温度为正交试验的四因素，分别取3个水平，做L9（34）正交试验的4因素。取干燥样品50g若干份，加入一定量的蒸馏水，利用超声波进行处理，以多糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多糖含量，确定最佳的超声波法提取工艺条件。,具体措施,4.微波法提取紫花地丁多糖正交试验设计：通过单因素试验确定出以：微波功率、微波时间、液料比、温度为正交试验的四因素，分别取3个水平，做L9（34）正交试验的4因素。取干燥样品50g若干份，加入一定量的蒸馏水，利用微波进行处理，以多糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多糖含量，确定最佳的微波波法提取工艺条件。,具体措施,5.水提法提取紫花地丁多糖正交试验设计：通过单因素试验确定出以：提取时间、液料比、温度为正交试验的三因素，分别取3个水平，做L9（33）正交试验的3因素。取干燥样品50g若干份，加入一定量的蒸馏水，利用热水浸煮进行处理，以多糖含量为指标，用苯酚-硫酸法测定多糖含量，确定最佳的水提法提取工艺条件。,具体措施,6.结果分析：通过对三种方法到底结果进行分析，对三种提取方法进行比较，得出最佳提取工艺。,可行性、创新点,可行性实验材料易得，方法简便可行，根据现有实验室设施可以进行。,创新点首次对多种多糖提取工艺进行筛选比较。,文献,1.刘湘新，刘进辉，刘自逵，等.紫花地丁的有效成分分析及抗菌作用研究J.中兽医医药杂志，2004，（3）：16-18.2.李定刚，张武刚，宋毓民，等.紫花地丁抗菌活性成分研究J.西北农林科技大学学报（自然科学版），2006,34（4）：87-90.3.NganFung,ChangRS,TabbaHD,etal.Isolation,purificationandpartialcharacterizationofanactiveanti-HIVcompoundfromtheChinesemedicinalherbviolayedoensisJ.AntiviralRes,1988,10(1-3):107-116.4.庞春红.多糖药理作用研究进展J.浙江中医药大学学报，2011,35（4）:639-640.5.谷绒.超声波和微波法对木耳多糖提取量的比较J.食品研究与开发，2010，（3）.,进度安排,2012年5月：整理文献资料，确定实验操作具体过程；2012年8月2012年12月：三种提取工艺的实施和多糖含量测