MM的实验室检测

多发性骨髓瘤的实验室检测,北京朝阳医院西区 检验科2016.04.14,多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM),MM是一种恶性浆细胞病，其肿瘤细胞起源于骨髓中的浆细胞，而浆细胞是B淋巴细胞发育到最终功能阶段的细胞。发病率占所有肿瘤的12% ，血液肿瘤的10%常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少见)。,临床表现,骨痛、病理性骨折：最常见肾功能受损、肾衰贫血血钙水平异常免疫功能失调，感染心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变,MM的临床表现多样化, 常常因此就诊于骨科、肾脏内科等, 漏诊、误诊可达到70%以上！,多发性骨髓瘤的现状,死亡率 ,骨折预后差增加负担感染发生率高肾脏病变不可逆,重视实验诊断早发现 早治疗,MM的实验室诊断,常规检查生化检查骨髓检查M蛋白鉴定分型诊断免疫分型,浆细胞标记指数染色体测定基因异常检测IL-6检测影像学检查,常规检查,血常规：Wbc 减少、贫血、Plt 减低血沉： 加快 红细胞呈缗钱样排列,血液生化检查,血清钙磷和碱性磷酸酶：增高血清2微球蛋白：增高肾功能：BUN、Cr升高血液流变学检查：血清粘滞度增加CRP：升高高尿酸血症血清总蛋白、白蛋白LDH增高,骨髓检查,骨穿：骨髓原、幼浆细胞（骨髓瘤细胞）明显增多。骨髓瘤 细胞在骨髓内呈弥漫性分布，或灶性、斑片状分布。 需要多次多部位穿刺，以免漏诊数量：国内标准为浆细胞15%,并有异常浆细胞或组织活检证 实。国外最低标准为异常浆细胞10%或组织活检证实 形态：细胞浆呈灰蓝色，可见多核（2-3个核），核仁1-4 个，初浆区消失，胞浆内可有少数嗜苯胺蓝颗粒，偶 见嗜酸性球状包涵体或大小不等的空泡。核染色质疏 松，有时凝集成大块，但不呈车轮状排列,多发性骨髓瘤血象,多发性骨髓瘤骨髓象（浆细胞样骨髓瘤细胞）,多发性骨髓瘤骨髓象,M蛋白是单克隆浆细胞恶性增殖产生的均一蛋白。 MM常为单株浆细胞的前体细胞恶性增生，形成庞大的单克隆浆细胞群，此种浆细胞可分泌大量结构均一的免疫球蛋白或肽链亚单位，临床上称之为单克隆免疫球蛋白（monoclonal proteins, M蛋白）,血清蛋白电泳是检测M蛋白的唯一方法,血清蛋白电泳（SPEP）：M蛋白形成异常浓集带，位于 区内，或 、2 区内可见一窄底的高峰。由于尿液可以浓缩许多倍，因此检查游离轻链时尿蛋白电泳（UPEP）比SPEP灵敏。80%的MM患者可发现M蛋白,琼脂糖凝胶电泳原理,-,+,蛋白加样位置,阴极,阳极,0,+,正常的电泳图谱,出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱,出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白,炎症症状肾病综合征出现游离轻链,出现在 b 区域的单克隆免疫球蛋白,游离轻链病,检测结果阐述,电泳的结果是以%的形式给出的, 但是对于临床诊断, 结果必须要以浓度的形式给出g/L,M蛋白的诊断标准IgG35g/LIgA 20g/LIgM 15g/LIgD 2.0g/LIgE 2.0g/L本-周蛋白阳性1.0g/24h,M蛋白？什么类型？,为什么要做免疫固定电泳,G A M kappa lambda,在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条带的蛋白出现异常增加 电泳结果显示为低免疫球蛋白血症, 或者免疫球蛋白定量结果显示可能是游离轻链病 尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定电泳,什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测?,免疫固定电泳,一种电泳加沉淀反应技术。可用于各种蛋白质的鉴定。将血清直接加于电泳后蛋白质区带表面， 抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的复合物嵌于固相支持物中。,血清免疫固定电泳,ELP 泳道: 固定液G 泳道： 抗 IgG 重链抗血清A 泳道： 抗 IgA 重链抗血清M 泳道： 抗 IgM 重链抗血清K 泳道： 抗 轻链抗血清L 泳道： 抗 轻链抗血清,仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：免疫固定电泳试剂灵敏度：125mg/L,正常血清,确认IgM 型M蛋白,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1）,IF,在区 发现疑似M蛋白,确认IgM + IgM 型 双克隆M蛋白,在区发现疑似双克隆M蛋白,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （2）,IgG Lambda型M蛋白,单克隆M蛋白出现在Alpha2-Beta区带,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （3）,* 纤维蛋白原，严格避免血浆标本,血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （4）,寡克隆免疫球蛋白电泳图谱多条(2)窄的条带，通常比较微弱。由于个别免疫球蛋白克隆增生。,Ig G型寡克隆电泳图谱,IF,血清蛋白免疫固定电泳应用 特殊情况,寡克隆条带在以下情况时常会出现 :,轻链病,血清蛋白免疫固定电泳特殊病例,免疫固定结果显示为单独的 l 成分,免疫固定电泳对骨髓瘤进行分型，敏感性是SPEP的10倍，不能定量,尿蛋白检测,尿常规：蛋白尿、血尿、管型尿尿蛋白：尿液中出现的自由轻链即本-周蛋白,各型MM本周蛋白阳性率,本周氏蛋白,1844年Henry Bence Jones 在一个骨髓瘤患者尿中发现一种具有特殊凝溶性质的蛋白4060发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀轻链二聚体大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白,浆细胞增生症,影响,血液中出现游离轻链,尿液中出现,起因,结果,骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.,肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病,本周氏蛋白,正常免疫球蛋白的合成,18分钟,10分钟,浆细胞,一条重链,一条轻链,组合,一分子免疫球蛋白,过剩轻链,肾小球滤过,10%在肾小管分解代谢80%重吸收10%随尿排出,异常免疫球蛋白的合成,18分钟,10分钟,恶变的浆细胞,一种重链,一种轻链,组合,单克隆免疫球蛋白,大量过剩轻链,肾小球滤过,本周氏蛋白尿,肾毒性、异常沉积,本周氏蛋白阳性患者,多表现为肾脏损害极易误诊为慢性肾炎轻链有3种形式出现在血清或尿中正常的轻链过剩 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病伴随轻链单一轻链,重链,参考泳道,复合轻链,游离轻链,1.是一种检测体内是否存在克隆性浆细胞的高度敏感的方法通过免疫比浊法分别测定出血清中的游