意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A和D3含量的比较VIP

2009年第12期蜜蜂杂志月刊JOUALOFBEEMONTHLY意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A和D3含量的比较龚蜜，林发旺，叶聿瑞，荆战星福建农林大学蜂学学院，福建福州350002摘要采用高效液相色谱法测定了意蜂雄蜂前蛹卵起第11日和蛹卵起第22日的维生素A和D含量。结果显示意蜂雄蜂前蛹和蛹的维生素A含量分别为44536GG和43106GG；维生素D3含量分别为1399056LGLG和1320613LGG；雄蜂前蛹和蛹维生素A和D，的含量差异均不显著P005。关键词意大利蜜蜂；雄蜂蛹；维生素A；维生素D。中图分类号8933文献标识码A文章编号10039139200912000604STUDYONCONTENTOFVITAMINAANDDINPREPUPAANDPUPAOFITALIANHONEYBEEDRONEBYHPLCGONGMI，LINGFAWANG，YEYURUI，JINGZHANGXINGCOLLEGEOFBEESCIENCE。FUJIANAGRICULTUREANDFORESTRYUNIVERSITY，FUZHOU350002ABSTRACTTHECONTENTSOFVITAMINAANDDINITALIANHONEYBEEDRONEPREPUPA1LDAYSAFTEREGGLAYINGANDPUPA22DAYSAFTEREGGLAYINGWEREDETERMINEDBYHPLCTHERESULTSSHOWEDTHATTHECONTENTOFVITAMINAOFPREPUPAANDPUPAWERE44536LGLGAND43106LGGRESPECTIVELY；THEVITAMIND3WERE1399056GAND1320613GG；RESPECTIVELYTHEREISIQ0SIGNIFICANTDIFFERENCEINBOTHCONTENTOFVITAMINAANDDP005BETWEENTHEDRONEPREPUPAANDPUPAKEYWORDSAPISMELLIFERALIGUSTICA；DRONEPUPA；VITAMINA；VITAMIND蜜蜂属完全变态昆虫，其个体发育经过卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。蜂王产未受精卵于雄蜂房中，经3日孵化成幼虫，经10日进入封盖期，经24日羽化出房。2022日龄的雄蜂蛹体表几丁质硬化，韧性增大，容易采收，口感最好，营养价值高、保健功效显著，早已受青睐成为蜂产品家族中的一员，即商品雄蜂蛹。雄蛑蛹营养威重要的特色之提目当高的缩芝素A和D，曾被描述为雄蜂蛹中维生素A的含量超过鱼肝油6000IU，MD、蛋黄0500IUNOO莉奶80IU100，维生素D的量是鱼盱油2000IUROD的近L0倍。收稿日期20091112另据古丽萍1996报道雄蜂蛹维生素D含量为61307430IU、张海生2006报道22日龄意蜂雄蜂蛹维生素A含量为17242U100G，维生素D含量为17140IUIO061。维生素A在天然食物中只在动物性食品中存在。维生素D在天然食物中以维生素D麦角钙化醇及维生素D，胆钙化醇最为常见，维生素D是由酵母菌或麦角中的麦角固醇经日光或紫外光照射后形成的产物，维生素D是由储存于皮下的胆固醇的衍生物7一脱氢胆固醇，在紫外光照射下转变而成【7J。通常维生素D，的理化性质要比维生素D稳定。11日龄的意蜂雄蜂封盖子为前蛹，据邵有全报道其主要营养成分如粗蛋白、粗脂肪和碳水化合物的含量均高于2022日龄的蛹。出于对意蜂雄蜂蛹维生素A、D的含量及其与日龄关系的不明确性，本研究采用高效液相色谱法HPLC对商品意蜂雄蜂蛹22日龄和前蛹11日龄的维生素A、D进行分析。考虑到前蛹和蛹自身的含水量将影响维生素A和D含量的比较，因此同时测定了前蛹和蛹的含水量以及体重。1材料FF方法11材料111实验蜂群实验蜂群为饲养在福建农林大学内蜂学学院教学蜂场的意大利蜜蜂。112试验药品与溶液维生素A标准品，SIGMA公司产，990；维生素D，标准品，BBI公司产，980；焦性没食子酸、95乙醇、氢氧化钾及石油醚3060C，均为上海实验试剂有限公司生产，均为分析纯；甲醇，德国MERCK集团有限公司产，色谱纯；水、去离子水、超纯水。15GL焦性没食子酸乙醇溶液称取15O0G焦性没食子酸溶于L000ML95乙醇中，现用现配。500L氢氧化钾溶液称取500OOG氢氧化钾溶于1000ML去离子水中。113主要仪器岛津LC一20A高效液相色谱仪、冰箱、BS224S电子分析天平、电热恒温水浴锅、索氏抽提器、真空薄膜浓缩器及真空恒温干燥箱。67蜜蜂杂志【月刊JOURNALOFBEEMONTHLYNO122009DEC12方法121意蜂雄蜂前蛹和蛹的培育2009年4月27日午时，在产雄蜂卵的意蜂群中插入预先造好的雄蜂空脾，次日午时抽脾检查，标识产卵后将脾移入隔工板隔离的无王区继续培养。分别于5月8日和5月19日午时取雄蜂脾，挑开封盖，挑L叶J前蛹或蛹，体表完好的即为L1日龄和22日龄的意蜂雄蜂前蛹和蛹样品，样品个体问日龄差异在24H之内。逐个称重后，一对一地人指形管，密封，一18冰箱存放。122意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A、D的测定F1221样品前处理1杂质皂化取数只相同日龄的意蜂雄蜂蛹或前蛹，置研钵中，碾磨成匀浆。准确称取2G精确至00001G于250ML磨口平底烧瓶中，加15GL焦性没食子酸乙醇溶液100ML，摇匀，再加入500GLK0H溶液50ML，摇匀，在沸水浴上回流30RAIN，迅速冷却至室温。2杂质去除皂化液转入500ML分液漏斗中，用100ML去离子水冲洗回流系统，洗液并人分液漏斗中，用100ML石油醚萃取。水层再分别用100、50ML石油醚萃取二次。合并石油醚层，用去离子水洗至中性酚酞指示剂检验，立即用真空薄膜浓缩器浓缩干，迅速加甲醇溶解残渣并定容至25ML，甲醇溶液经045LLM滤膜过滤，供HPLC测定。1222色谱条件色谱柱，WATERS碳18柱39300ITLM；柱温，25C；流动佰，甲醇水982；流速，10MLMIN；进样量，20IXL；检测器，UV3000HR紫外可见光检测器；检测波长，维生素A一325NM，维生素D一265NM1223维生素A和D标准工作曲线绘制分别称取维生素A和D标准品各00500G，分别加甲醇溶解并定容配制成LMGML标准贮备液，用甲醇稀释为01MGML的标准_丁作溶液，经045LLM滤膜过滤，分别以1、2、6、10、15L和20L准确进样，HPLC测定。均以维生素A和D标准工作溶液进样量MGML为横坐标、相应峰面积为纵坐标绘制标准下作曲线。1224维生素A、D回收率的测定准确移取维生素A标准丁作溶液10ML和1标准作溶液50ML，取代样品，按照样品前处理的方法，完成杂质皂化和杂质去除步骤后，供HPLC测定123意蜂雄蜂前蛹和蛹体重的测定从封盖子中挑出的体表完好的意蜂雄蜂前蛹和蛹，立即用电子分析天平逐个称量，记录数据。】24意蜂雄蜂前蛹和蛹含水量的测定真空于燥法IQ125数据处理所有数据采用SPSS150软件处理。2结果与分析21意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A、D。的含量1维生素A、D标准工作曲线维生素A和D标准溶液色谱图、标准LR作曲线、线性方程和线性相关系数见图1、图2、网3和图4。由图可知，维生素A、D1都能够分别在31RAIN左右出峰，线性范围均为10100XG,ML，线性相关系数，分别为09994和09985。表明方法定量准确且灵敏度高。图1维生素A标准溶液色谱图图2维生素D标准溶液色谱图0L01；000600400峙FL织图3维生素A标准曲线02E10TL1RTTII1F18FJ雌I图4维生素D标准曲线2维生素A、D回收率的测定维生素A、D回收率测定结果见表1。由表可知在空白中添加维生素A、D标准T作溶液10ML和50ML，二者浓度分别为4TXGML和20IXGML时，维生素A、D的回收率分别为7916和8043。结果表明前处理方法回收良好，可以用来进行定量计算。2009年第12期蜜蜂杂志月刊JOURNALOFBEEMONTHLY表1维生素A和D。的回收率3意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A、D的色谱和含量二者的色谱和含量见图5、图6、网7、图8和表2。由图可知，样品中的维生素A、D都能够在34MIN左右出峰，虽然测定时维生素A在22MIN和26MIN之间、维生素D在21MIN和29MIN之间会有杂峰；现，但对样品中维生素A、D，的定性和定量都没有干扰。由表可知，20LLL样液注入HPLC的测定结果，意蜂雄蜂J1日龄前蛹和22日龄蛹维生素A的含量分别为445360072G，G和431062640GG，维生素D3的含量分别为1399065435136IXGG和1320614155TXGG；维生素A、D的含量，意蜂雄蜂前蛹与蛹的差异均不显著JP005。叠217,，。誊11。J00。3R460图5雄蜂前蛹维生素A色谱图SIC,；，I2；图6雄蜂蛹维生素A色谱图125MJ1175IIA自。曼慧皇图7雄蜂前蛹维生素D色谱图；LI曼S00D035C5A6D70I图84T蜂蛹维生素D色谱图表2意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A和D。含量IGG样本数N前蛹4SD蛹SDP维生素A1344536072443106264006271OO5维素D13139906535136132061415505L111300522意蜂雄蜂前蛹和蛹的体重意蜂雄蜂前蛹和蛹体重的测定结果显示，蛹体重极显著地轻于前蛹尸005，详见表4。冈本次试验测定含水量的样本数偏少，二者差异是否不屁著尚值得进一步研究。表4意蜂雄蜂蛹和前蛹的含水量3讨论1本试验采用HPLC同时测定了意蜂雄蜂前蛹和蛹中的维生素A、D，试验结果发现目前作为商品的22日龄意蜂雄蜂蛹中的维生素A、D的含量与11日龄前蛹的相似，没有统计学上的差异，其中雄蜂蛹维生素D的含量与古丽萍报道的接近，但22日龄意蜂雄蜂蛹的维生素A、D远高L叶J张海生的报道注1IU维生素A03G维生素A，1G维生素D40IU维生素D，表明不同的测定方法及其影响因素还有待于进一步研究和探讨。2本次试验不仅尝试了采用HPLC同时测定意蜂雄蜂前蛹和蛹维生素A、D的可行性，同时进一步了解和丰富了意蜂雄蜂封盖子期间体内部分营养成分的变化，从中又得到了新的启示122日龄的意蜂雄蜂蛹之所以被选作为商品雄蜂蛹，贵在于它的体表因为几丁质的形成，致食品色、香、味、彤的特征可以得到充分的体现。222日龄与11日龄意蜂雄蜂蛹和前蛹，虽然维生素A、D的含量没有差异，甚至22日龄蛹的体重比11日龄前蛹减轻，但在蛹期睾丸得到了发育，发生了质的变化。22日龄意蜂雄蜂蛹具有11日龄雄蜂前蛹所不具备的益气补阳功能LL2J。311日龄意蜂雄蜂前蛹的营养成分含量较高，体重较重，具有不同于22日龄雄蜂蛹开发的意义和89蜜蜂杂志月刊JOURNALOFBEEMONTHLYNO122009DEC利用的价值。参考文献1陈亢川，主编福建省食物营养成分表H福州福建科学技术出版社，19912李幸阳雄蜂幼虫蛹的特殊营养及利用价值J养蜂科技，Z005，530313陈盛禄，主编中国蜜蜂学H北京中国农业出版社，20014葛凤晨，主编蜂王浆蜂花粉蜂蛹虫疗法H长春吉林科学技术出版社，ZOO05古丽萍蜂王幼虫、雄蜂蛹的食用性及其开发利用J食品研究与开发，1996，1763334E6张海生，陈锦屏蜂蛹营养成分分析J3河北农业大学学报，2006，29691947孙长颢，主编营养与食品卫生学第6版M北京人民卫生出版社，2007【8贺利民，吕岱竹。吴莉宇高效液相色谱法同时测定无骨海鱼中的维生素A、D和EJ分析实验室，2004，57779EGJ苏德森，陈涵贞林虬，等高效液相色谱法同时测定鱼油中维生素A、13和EJ福建农业学报，2005，20428929110GBT95972002，蜂王浆S11王金庸，主编中医蜂疗学H沈阳沈阳出版社，199712陈明胜浅谈蜂蛹的药用价值J中国养蜂，1996，221如何使春繁工作尽可能做到利大于弊，这是我们养蜂员应认真考虑和权衡的问题。1开繁紧脾框数我地开繁以4框蜂为宜，松框前暖区应达到3张子脾。如从省时省力的角度来考虑，开繁时暖区应放3张半蜜脾供蜂王产谈蜂群春繁工作朱秉忠的利和弊江苏省建湖县上冈镇坍圩村老六组，江苏建湖224731子，但当蜂王产子20天后，各群蜂数下降不一，少数群不足3框蜂，无护整脾能力。此时如欲抽出，则脾上有子，于心不忍，决心难下；如不抽出，蜂少脾多，轻则寒流来时子易冻伤，重则长期委靡不振，群势有减无增，形成春衰。如果以单脾或双脾开繁，就可避免此类情况的出现。当需插第3张脾时，视冷区蜜脾上的蜂量，能加则加，不能加则罢，进退自如。因此，单或双脾开繁利大于弊。2春繁前治螨笔者认为春繁前治螨只能作为一项补救措施，不必作为必做之工作。通常春繁开始前正处严寒季节，治螨工作难以展开。按理，治螨工作应放在越冬前，予以治疗彻底，如确因诸多原因在越冬前未能彻底治螨，春繁前则必需补治。春繁前治螨由于气温低，蜂团散开少，如过于心切，在蜂团外表喷治螨药，而蜂团内工蜂仍未喷到，不仅治螨不彻底，还会造成蜂团外表的工蜂药液中毒，其表现治螨后710天群势大为下降，为春繁工作带来难度。目前治螨药名目繁多、鱼龙混杂，使用时应谨慎J,，药液的浓度及喷洒量的多少更应慎之又慎，不可随意。3保温保温工作应根据各地小气候灵活掌握，使暖区有适宜的温度育虫，冷区虽冷又不冻僵工蜂，并最大限度地减少工蜂外飞，保存蜂群有生实力。笔者拙见箱内暖区加覆布，保温板外侧加小草帘即可，冷区不保温；箱外通常不保温