GB 5009.245-2016 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定

0161    食品安全国家标准食品中聚葡萄糖的测定1 范围本标准规定了食品中聚葡萄糖的测定方法。本标准适用于食品中添加的聚葡萄糖的测定。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。葡萄糖(n由葡萄糖、山梨糖醇和柠檬酸(或磷酸)按一定比例混合,在高温下加热聚合并精制、干燥而成的多聚体,平均聚合度12。属于可溶性膳食纤维。3 原理食品中聚葡萄糖经热水浸提、超滤离心后,滤液经酶解去除淀粉、果聚糖等干扰物后,再用离子色谱 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的一级水。氧化钠溶液(50%):色谱纯,离子色谱专用。乙酸(水合乙酸钠(水乙酸钠(聚糖酶(2000U/ 淀粉葡糖苷酶(3260U/溶性淀粉);200U/硝基酚淀粉酶(1000U/酸溶液():水稀释至100 乙酸钠溶液():水溶解并稀释至100 乙酸盐缓冲液(将28)与22)0162    合,用水稀释至100 混合酶液:分别吸取68047乙酸盐缓冲液稀释至20合酶液临用现配。动相A(氢氧化钠):0%),用预先脱气的水稀释2L,惰性气体保护。动相B(氢氧化钠,乙酸钠):准确称量4168用流动相匀,气。注:配制流动相时,容后的流动相混匀时倒置混匀56次,不可剧烈振摇。配好的流动相沿储液瓶壁缓缓倒入,考物质聚葡萄糖(n:纯度大于90%,8424:为保证结果的准确性,如能确定添加的聚葡萄糖来源,应选用食品中添加的聚葡聚糖同源的参考物质,并达到考物质储备液(g):已预先称重的100加入约100去离子水,拧紧螺口塞,涡旋振荡30s,将试样瓶置于80水浴10隔5使聚葡萄糖充分溶解,取出试样瓶,冷却至室温,称重(参考物质储备液于4保存,有效期1个月。考物质中间液:g、g、g、g、g、 参考物质工作液:取2量(移至已称重的离心管中,量(振荡混合均匀,于50水浴60水浴10出,冰浴510000r/样分析,得到浓度分别为200g/g、150g/g、100g/g、g、g、样分析。以此6点参考物质工作液上机获得工作曲线,其回归方程的决定系数( 析天平:感量分别为1温水浴箱:控温精度1。速离心机:转速10000r/旋振荡器。量可调移液器:20L200L、200L1000L。筒式过滤器:滤离心设备:100000醚砜膜,力搅拌器:带搅拌子。子色谱仪:配备脉冲安培检测器、梯度泵。0163    6 体试样:研磨、粉碎,分析前密闭保存,避免水分变化。体试样:测定前需混合摇匀。体试样:取100入1粒磁力搅拌子,盖上螺口塞,称量(记为确称取一定量试样(为试样瓶中,加100水,磁力搅拌30s,80水浴105出试样瓶冷却至室温后称量(记为 液体试样(饮料、液态奶等):取100量(记为确吸取一定量试样(为试样瓶中,加100荡混合均匀,称量(记为 0000r/10000r/意观察是否离心完全及离心液的澄清度,如截留膜上方留有样液或离心液混浊,可加大转速、延长离心时间,或增加稀释倍数(F)。2量(记为 量(记为量(记为荡混合均匀,于50水浴60水浴10出,冰浴510000r/样分析。上清液需在72谱参考条件检测条件见附录B。析结果的表述试样中聚葡萄糖含量按式(1)计算:X=Fc00106(1)式中:X 试样中聚葡萄糖的含量,单位为克每百克(g/100g);由标准曲线计算得到的聚葡萄糖的浓度,单位为微克每克(g/g);F稀释倍数;c聚葡萄糖参考物质的纯度,%;离心管、酶解样液、混合酶液的总质量,单位为克(g);空离心管质量,单位为克(g);离心管、用于酶解样液总质量,单位为克(g);加水后试样瓶总质量,单位为克(g);试样瓶总质量,单位为克(g);0164    试样质量,单位为克(g);100将结果表示为百分含量的系数;106微克(g)与克(g)的转换系数。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 其他最小称样量为500g,00g;00g,00g。0165    附 录 度40,底物(蔗果三糖)浓度为10的标准条件下,1 酸():准确吸取12水稀释至1000酸钠溶液():水溶解并稀释至1000酸盐缓冲液(将280)与220)混合,用水稀释至1000氧化钠溶液(2):准确称取80水溶解并稀释至1000,5到500加5拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000于棕色瓶中备用。糖标准液(1mg/准确称取80烘至恒重的分析纯果糖100于小烧杯中,加少量乙酸盐缓冲液溶解后,转移到100乙酸盐缓冲液定容至100匀,4冰箱中保存备用。果三糖溶液(10):乙酸盐缓冲液溶解并稀释至1000 析天平。热恒温水浴锅。见光分光光度计。时器。水浴加入5却至室温,用水定容至25成标准空白样。乙酸盐缓冲液定容至100别加入到25各管摇匀,在沸水浴中准确加热5出,冷却至室温,加水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540吸光度值为纵坐标,果糖含量(0166    为横坐标,绘制标准曲线。测酶溶液的配制称取测试酶样品,用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(0平衡200平衡20入到25匀,0平衡30水浴加热5却至室温,加水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540入到25匀40平衡30匀以终止反应,沸水浴加热5却至室温,用水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540 酶活力计算果聚糖酶的酶活力按式(算:(K+t1000(中:待测酶液的果聚糖酶活力,单位为活力单位每毫升(U/酶反应液的吸光度;酶空白液的吸光度;K标准曲线的斜率;标准曲线的截距;M果糖的摩尔质量,M(t酶解反应的时间,单位为分(1000换算系数。度40,底物(牡蛎糖,度为10mg/葡萄糖计)所需要的酶量为1U。酸盐缓冲液(溶于水,加92醋酸),稀释至1000氧化钠溶液(2):准确称取80水溶解并稀释至1000,5到500加5拌溶解,0167    馏水定容至1000于棕色瓶中备用。萄糖标准液(1mg/称取无水葡萄糖100乙酸盐缓冲液溶解,定容至100蛎糖溶液(10mg/乙酸盐缓冲液溶解并稀释至100 析天平。热恒温水浴锅。光光度计。时器。水浴加入5却至室温,用水定容至25成标准空白样。乙酸盐缓冲液定容至100别加入到25各管摇匀,在沸水浴中准确加热5出,冷却至室温,加水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540吸光度值为纵坐标,葡萄糖含量(横坐标,绘制标准曲线。测酶溶液的配制称取测试酶样品,用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(0平衡200平衡20入到25匀,0平衡30水浴加热5却至室温,加水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540入到25匀40平衡30匀以终止反应,沸水浴加热5却至室温,加水定容至25塞后颠倒混匀,放置30标准空白液为对照调零,在540 酶活力计算异淀粉酶的酶活力按式(算:(K+t1000(0168    式中:待测酶液的异淀粉酶活力,单位为活力单位每毫升(U/酶反应液的吸光度;酶空白液的吸光度;K标准曲线的斜率;标准曲线的截距;M葡萄糖的摩尔质量,M(t酶解反应的时间,单位为分(1000换算系数。可溶性淀粉为底物的酶活力以可溶性淀粉为底物的酶活力测定参照009酶活力的测定方法。度为40,底物(对硝基酚度为10,有过量分钟从对硝基酚需要的酶量为1U。酸():准确吸取12水稀释至1000 乙酸钠溶液():水溶解并稀释至1000 乙酸盐缓冲液(将280)与220)混合,用水稀释至1000 碳酸钠溶液(1):水溶解并稀释至1000 对硝基酚标准液(1mg/称取对硝基酚100乙酸盐缓冲液溶解,定容至100 乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(稀释后的酶液中U/硝基酚0析天平。热恒温水浴锅。光光度计。时器。匀,制成标准空白样。0169    用乙酸盐缓冲液定容至100取对硝基酚标准使用液各1别加入到5标准空白液为对照调零,在400吸光度值为纵坐标,对硝基酚含量(横坐标,绘制标准曲线。测酶溶液的配制称取测试酶样品,用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(稀释后的酶液中U/0平衡200平衡20入到5匀,0平衡10温放置5标准空白液为对照调零,在400入到5匀,40平衡10温放置5标准空白液为对照调零,在400活力计算葡糖苷酶的酶活力按式(算:(K+t1000(中:待测酶液的淀粉葡糖苷酶活力,单位为活力单位每毫升(U/酶反应液的吸光度;酶空白液的吸光度;K标准曲线的斜率;标准曲线的截距;M对硝基酚的摩尔质量,M(t酶解反应的时间,单位为分(1000换算系数。01610   附 录 子色谱条件分析柱:径10m,250保护柱:径10m,50或等效柱。进样量:20L;柱温:30。注:给出分析柱信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可,如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效的产品。动相注:配好的流动相需脱气,并用惰性气体保护。氢氧化钠;氢氧化钠,乙酸钠;流速: 度淋洗程序时间/流动相B/%测器采用四电位波形,测器的波形设置时间/01611   )时间/00子色谱条件分析