徐康森 最新2010版药典生化药汇总.ppt

2010版药典生化药总结报告,徐康森,第一部分:生化药的基本概况第二部分:2010年版中国药典生化药归总,第一部分：生化药的基本概况,1、生化药的定义2、生化药的发展,1、生化药的定义,生化药物是我国医药产品的一个大类。生化药主要从动、植物及微生物发酵提取的、化学合成、生物-化学半合成或用现代生物重组技术制得的一类药品尤其对于严重危害人类健康和生命的疾病，如心脑血管病、癌症、糖尿病和病毒疾患等有其独特的治疗效果。深受人民的欢迎和重视。,2、生化药的发展历程,医药行业的发展状况,第二部分：2010年版中国药典生化药归总,为贯彻党的十七大精神，落实科学发展观，建国以来的第九版药典中国药典2010年版，已完成增修订任务，目前已经正式出版发行。,宗旨：,提高药典质量，应用高新技术，解决安全隐患，赶超国际水平。,本届药典生化药修订工作的特点,时间短任务重难度大要求高,中国药典2010版生化药标准品种数汇总,一、氨基酸及其衍生物类,1、基本介绍该类品种是组成蛋白质的基本单位。组成人体蛋白质的氨基酸只有20种左右，均为L-a-氨基酸（除甘氨酸外）。因为是人类健康的基本营养成分，故在救死扶伤中扮演十分重要角色。,临床上除单方使用aa外，其还是复方aa注射液的主要组成成分。临床上常用的氨基酸注射液有3aa、6aa、9aa、11aa、15aa、17aa、18aa（I-II）等。从1985年销售100万瓶，到2008年销售量已经达到2亿万瓶，市场潜力很大，前景美好。,2、2010年版中国药典收载的氨基酸及其衍生物类品种,牛磺酸及其制剂（片、散、颗粒、胶囊、滴眼液）；盐酸精氨酸及其制剂（片、注射液）；色氨酸；谷氨酸（钠）及其制剂（片、注射液、钾注射液）；组氨酸及盐酸组氨酸；脯氨酸；精氨酸；酪氨酸；丝氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；赖氨酸（盐酸、醋酸、苄达）；缬氨酸；门冬酰胺（片）、甘氨酸（冲洗液）、胱氨酸（片、盐酸）、丙氨酸、甲硫氨酸（片）、苏氨酸、苯丙氨酸、谷丙甘氨酸胶囊、乙酰半胱氨酸（滴眼液、颗粒）、乙酰谷氨酸（注射液）、羧甲司坦（口服溶液、片、颗粒）等53个品种。,3、收载的氨基酸及其衍生物类药品基本特点,几乎包含了国内外所有氨基酸类产品方便临床使用，该类产品呈现制剂系列化特点，如固体制剂包括：片、胶囊、颗粒、散、口含片；液体制剂有：口服溶液、滴眼液、注射液等,4、品种增修订情况,增订、修订和统一有关检查项目内容、使得该类标准基本与国外同类标准接轨。,二、核酸及其衍生物类,1、简介：核酸是生命的最基本物质，存在于一切生物细胞内，DNA只要存在细胞的染色体中，RNA主要存在细胞的微粒体中。,2、2010年版药典收载的核酸及其衍生物类药品的品种,三磷酸腺苷二钠、注射用ATP（注射液）、胞磷胆碱钠（注射用、注射液）、肌苷（口服溶液、片、注射液、胶囊、注射用）、环磷腺苷（注射用）、盐酸阿糖胞苷（注射用）、腺苷钴胺（片）、更昔洛韦（注射液、注射用）、利巴韦林原料及其制剂、阿昔洛韦原料及其制剂、泛昔洛韦（片、胶囊）、盐酸伐昔洛韦（片、胶囊）等51个品种。,3、收载的核酸及其衍生物类药品品种的基本特点,临床上治疗病毒疾患为主，部分治疗心血管及脑损伤、缺氧等疾病。如早期阿糖胞苷酸是治疗威胁人类健康的病毒疾患的首创药物；第一代核苷酸类药物利巴韦林，第二代阿昔洛韦、更昔洛韦直至泛昔洛韦等。该类产品大部分是微生物发酵或半合成的，化学结构清楚、成分明白、质量标准较完善。2010年版药典收载的核酸类药物品种较为齐全，尤其制剂，剂型完整，低的2-3种，多的7-8种。如利巴韦林有11种：固体制剂有4种，片、口含片、胶囊、颗粒；液体制剂有7种，滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射剂、氯化钠注射液、葡萄糖注射液、注射用。,4、品种增修订情况,该类药品大部分标准项目比较完善，大部分未增订和修订，少部分进行了增修订。,Chp2010版生化药标准实例介绍,盐酸阿糖胞苷（上海所起草，标准已全面达到或超过国外标准，有代表意义值得借鉴）修订了含量测定为HPLC法，限度达到98%-102%增订项目共6项：氯含量（因盐酸盐）、溶液的澄清度与颜色、有关物质、炽灼残渣、重金属、残留溶剂等。,特别是其中的氯含量测定、有关物质检查、残留溶剂检查等很重要氯含量：电位滴定法测定，回收率100.4%，RSD=0.8%（n=6）；有关物质：对阿糖腺苷、尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷等进行考察，采用2种C18色谱柱进行系统适用性考察，得出相应结果。经天津所和广东所复核，结果一致；残留溶剂：对5个企业的8种溶剂进行考察（聚乙二醇毛细管柱，进行系统适用性、回收率和最低检出限进行考察）。经天津所和广东所复核，结果一致。,盐酸阿糖胞苷质量标准对比,三、酶及其辅酶类,1、简介：酶是生物体内的催化剂，参与一切代谢过程。酶的组成为单纯蛋白质和结合蛋白质。后者为酶蛋白，非蛋白部分为辅酶或辅基。酶又可以按照各种催化反应分类，如氧化还原酶、转移酶、水解酶、异构酶、合成酶等。,2、2010年版药典收载的酶及辅酶类药品品种,胰酶（肠溶片、肠溶胶囊）、胰蛋白酶（注射用）、糜蛋白酶（注射用）、胃蛋白酶（片、颗粒、含糖胃蛋白酶）、玻璃酸酶（注射用）、抑肽酶（注射用）、凝血酶冻干粉、尿激酶（注射用）、门冬酰胺酶、*（注射用）、细胞色素C（注射用、注射液）、乌司他丁*（溶液、注射用）、辅酶Q10（片、注射液、胶囊、软胶囊）、激肽原酶*等34个品种。*为新增品种,3、收载的酶及辅酶类品种的基本特点,国外药典收载的品种，本次药典大部分均已收入。大部分是生物体某些组织中提取、纯化和精制的；另一部分是微生物经发酵、破壁后再从发酵液中提取、纯化和精制而成的。酶是蛋白质，具有生物活性，通常用于提纯和纯化蛋白质的方法都适用于酶。质量指标的制定中注意酶的总活性和比活力纯度的关系。新增订的药品品种仅有3个。,4、增修订情况,溶液的颜色高分子物质检查有关物质异常毒性细菌内毒素微生物限度无菌过敏,Chp2010版生化药标准实例介绍,抑肽酶该品种由上海药检所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收载，本版继续收载，但依据USP作了三个方面的修订。1.检查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有关物质参照USP32采用附录新技术毛细管电法：这是我国第一个用该法上药典的品种。柱：石英毛细管分离柱毛细管温度：30电极液：磷酸二氢钾溶液分离压：12KV波长：214nm结果：去丙aa抑肽酶抑肽酶RT0.99（上海所0.989）去丙aa-去甘aa-抑肽酶抑肽酶RT0.98（上海所0.978）（两相关物分离度1.40，去丙aa-抑肽酶抑肽酶分离度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8）,对照品图,供试品图,Chp2010版生化药标准实例介绍,2.检查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物（参照USP32）色谱柱：TSK-GELIC-Cation-SW柱温：40流动相：磷酸二氢钾缓冲液流速：1.0ml/min梯度洗程序结果：N-焦谷氨酰-抑肽酶抑肽酶RT0.9（分离度2.2，抑肽酶拖尾因子0.92，最低检出量：82ng）,对照品图,供试品图,Chp2010版生化药标准实例介绍,3.检查高分子蛋白（USP32）关键是采用三根串联Gel色谱柱（TSK-G4000SWXL柱）柱温35，流速1.0ml/min,二聚体相对RT0.9，分离度1.4，拖尾因子0.91。以上用新技术的三项检查，有效控制抑肽酶产品的纯度，使产品质量有一个飞跃，使标准的制定达到或超过国外标准。,对照品图,供试品图,抑肽酶国内外质量标准比较,四、多肽、蛋白类,1、简介：肽类是氨基酸相互结合成多肽链。蛋白质就是由多个氨基酸残基组成的多肽链。一般以51个aa残基，分子量为5733的Insulin划分，高于此分子量的称为蛋白，小于的为肽类。,肽键(peptidebond)的形成,2、2010年版药典收载的多肽及蛋白类药品品种,尿促性素、注射用HMg、绒促性素、注射用HCg、醋酸丙氨瑞林、注射用醋酸丙氨瑞林、硫酸鱼精蛋白及其注射液、五肽胃泌素及其注射液、缩宫素注射液、鲑降钙素及其注射液、生长抑素及其注射用、甲状腺素片、醋酸奥曲肽（注射液、注射用）、胸腺法新（注射用）、胰岛素（系列产品）、重组人生长激素（注射用）等30个品种。,3、收载多肽及蛋白类品种的基本特点,本次药典收载的产品中少部分为脏器提取的激素、肽类。安全性无法保障的品种如垂体后叶粉、注射液；缩宫素溶液；甲状腺粉等删除。部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鉴别由化学测定法代替。本次药典收载的合成肽类药品，纯度较高、质量优良，大部分质量标准与国际接轨。,生物测定法修订情况,*暂未修订,4、增修订情况,高分子蛋白有关物质相关蛋白含量测定：HPLC金属离子：吸收光谱细菌内毒素异常毒性微生物限度过敏,Chp2010版生化药标准实例介绍,（一）生长抑素BP09；EP60有收载；ChP和USP均未收载浙江省所参照各国药典，进口标准等进行起草。1、含量限度：同国外使用HPLC法，C18柱，进样量少，等度洗脱。2、鉴别：TLC法，点样量改成10ul，Rf=0.25，展开剂改为冰醋酸。3、有关物质：无中间体、粗品，故进行强制降解试验，最低检测限为0.1ug4、氨基酸组成：经方法学改进采用二硫代二丙酸先与半胱氨酸结合再水解进行测定。5、醋酸：参照国内外合成肽有关方法，用HPLC法进行方法学研究。210nm检测，梯度洗脱，线性10-500ug/ml，回收率101.6%（n=3），检测限2.5ng，定量限7.6ng。6、细菌内毒素：方法学研究包括限值与热原对比，灵敏度、干扰试验、确证试验等。7、残留溶剂：进行了乙腈、甲醇、乙醚、三乙胺、二甲基甲酰胺进行测定,Chp2010版生化药标准实例介绍,（二）胰岛素ChP2010版依据USP33、EP6.0标准，参照2005版分别对来源、性状、鉴别、检查项下含量测定项、活性检查作了修订和补充，（该品种江苏所起草，检定所复核）1.肽图分析：经V8酶水解胰岛素、对其分子碎片中的肽图进行分析，该法能确定不同种属的胰岛素，该法专属性强。,人胰岛素酶解-HPLC肽图,猪胰岛素酶解-HPLC肽图,Chp2010版生化药标准实例介绍,胰岛素2.相关蛋白：参照USP32、EP6.0由SDS-PAGE改为分离度较好的HPLC法，梯度洗脱及系统适用性试验，使A21脱酰胺胰岛素0.5%，其它相关蛋白限值5.0%，而实测样前者0.5%；后者3.94.0%。3.高分子蛋白：将一般柱色谱改为分子排阻色谱，色谱条件和系统实用性试验均与ChP2005重组人胰岛素标准一致。,Chp2010版生化药标准实例介绍,胰岛素4.含量测定：用HPLC法代替生物测定法。ChP2010版考虑到胰岛素生物活性的重要性，故除改用HPLC法外，原料在检查项中再加生物活性测定，参考USP32，动物数减半，生物统计简化，作限度实验，为常规测定用，该法既能省时、省力、省成本，又能有效控制质量。,五、多糖、脂类,1、简介：糖类是自然界中一类重要的含碳化合物，主要生物学功能是在机体代谢中提供能源和碳源，也是组织和细胞结构的主要组成成分。主要分类有单糖（简单的多羟基醛或酮）和聚糖（单糖缩合而成，20个单糖结构以下的为低聚糖，20个以上的为多糖。低聚糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；纯多糖：右旋糖酐、香菇多糖；杂多糖：肝素、硫酸软骨素、透明质酸）,2、2010年版药典收载的糖及脂类品种,硫酸软骨素片、胶囊肝素钠、注射液、乳膏右旋铁、片、注射液右旋糖酐20、氯化钠注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐40、氯化钠注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐70、氯化钠注射液、葡萄糖注射液前列地尔、注射用前列地尔多烯酸乙酯、软胶囊,3、收载的糖及脂类品种的主要特点,采用高科技、新方法，是质量显著提高（如肝素、硫酸软骨素等）脂类，采用新的质控指标是多烯酸乙酯的质量与EP、JP等基本一致。,4、增修订情况,金属离子：吸收光谱有关物质：HPLC比活含量测定：HPLC、GC比旋度残留溶剂甲氧基苯胺值不皂化值细菌内毒素,Chp2010版生化药标准实例介绍,（一）肝素钠（中检所起草）比活：从原150u/mg提高到170u/mg(USP32180，BP2008为150，JP15为130)产品纯度提高比旋度：从原+35到+50（因杂质严控，故该项提高）吸收度：260nm、280nm是核酸和蛋白质吸收峰，因杂质严控，260nm吸收度从原0.20到0.10，280nm吸收度从原0.15到0.10说明杂质减少。Na+：用原子吸收光谱限度9.5-12.5%（同EP）有机残留：甲醇，乙醇，丙酮中国药典规定细菌内毒素：原1单位0.015Eu到1单位0.01Eu以上六项标准均有十分明显的提高,Chp2010版生化药标准实例介绍,（一）肝素钠（中检所起草）有关物质：应用离子色谱HPLC，使杂质硫酸皮肤软骨素5.0%，多硫酸软骨素不得检出。该法USP,EP,BP,JP均没订。美国药典论坛可能要采用该法，因该法能十分清晰分析：肝素，硫酸皮肤素，多硫软骨素，可代替昂贵核磁共振及毛细管电泳。ChP2010的该项目超过国际水平，有十分重要的意义。,Chp2010版生化药标准实例介绍,（二）硫酸软骨素（中检所起草）该品质量指标有显著性提高，从含量原来40%左右直提至90%（口服），直接与国际接轨。除标准中来源猪、红外、吸收度、细内、有机残留增修有提高外，主要含量测定：用专一性很强且灵敏的酶解法分离硫酸软骨素呈A、B、C。再用离子色谱柱法很好分离硫酸软骨素成B、C和A。使硫骨素含量为90%（固）、95%（固）、97%（注、眼）。该法的特点，抵能测猪软骨素（A/C有固定值），因国外来源很杂（牛、猪、禽、海洋动物），灵敏度优于USP和EP的电泳法、EP为滴定时，因无专属性使将其它多糖混杂于方法中，使硫酸软骨素含量偏高。,2010版药典生化药完成情况总结,1、标准和品种完成情况标准完成191个规格，增加36个，增加率（与chp2005年版比较）为22.6%品种完成72个、增加12个新品种，增加率（与chp2005年版比较）为19.6%删除标准共5个,2、附录和指导原则增订情况,（1）蛋白质含量测定（提供六种可选择的方法，适应各有关品种的选择）（2）多肽醋酸含量测法（为合成肽的检查项提供统一的方法）（3）电泳附录中等点聚焦法（电泳附录中增加先进技术及常用方法）（4）氨基酸分析中的衍生法（为考虑各有关单位习惯等）其中的（4）为指导原则中增订,（1）蛋白质含量测定方法,第一法：凯氏定氮法（提供了非蛋白氮供试品制备方法）。灵敏度较低，适用于0.2-2.0mg氮。换算系数因蛋白质所含氨基酸结构差异会稍有区别。第二法：福林酚法（Lowry法）。灵敏度高，测定范围通常可达20-250ug。干扰物质较多（还原物质、酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、甘露醇、糖类、甘油等）第三法：双缩脲法。快速、灵敏度低，测定范围为1-10mg。干扰物质有硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸,第四法：2,2-联喹啉-4,4-二羧酸法（BCA法）。灵敏度较高，测定范围80-400ug。样品中不能有还原剂和铜螯合物。第五法：考马斯亮蓝法（Bradford法）。灵敏度高，可测定1-200ug蛋白量。干扰物质有去污剂、TritonX-100、十二烷基硫酸钠等。样品缓冲液呈强碱性也会影响显色。第六法：紫外分光光度法。干扰因素多，常用于纯化蛋白质的微量测定,（2）合成多肽中的醋酸测定法,采用液相色谱法测定合成多肽中的醋酸或醋酸盐的含量。C18柱、210nm检测、梯度洗脱。醋酸峰的保留时间约为3-4分钟。,（3）增订了电泳法,增订第六法等电聚焦水平板电泳法用于检测蛋白类和肽类供试品的等电点。原理：两性电解质在电泳场中形成一个pH梯度，由于蛋白质为两性化合物，所带电荷与介质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，到达等电点（此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷）时，电流达到最小，不再移动。,（4）氨基酸分析法,第一法：PITC柱前衍生氨基酸分析法第二法：AQC柱前衍生氨基酸分析法第三法：OPA和FMOC柱前衍生氨基酸分析法第四法：DNFB柱前衍生氨基酸分析法第五法：茚三酮柱后衍生氨基酸分析法,3、质量标准水平状况,紧跟国际水平，与国际USP、BP和EP同标准接轨，尽可能就高不就低。Chp2010版药典生化药中氨基酸类、核酸类、多肽、蛋白、酶、辅酶和脂类品种其中大部分或绝大部分产品已赶上或有的项目已超过国外标准。,4、标准方法和技术,应有高新技术使Chp2010版更专属、灵敏和准确。C