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文档简介
ELISA检测乙肝抗体,组员:李家成(1520150102)林其聪(1520150103)付强(1520150104)郑海军(1520150105)管汝(1420151143)分工汇报:林其聪PPT制作:李家成,付强,ELISA检测乙肝抗体,肝表面抗体ELISA检测,实验目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶标仪的使用方法。,免疫标记技术免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原,利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。,细胞1,细胞2,标记物,分类,荧光素,放射免疫技术,放射性核素,免疫荧光技术,酶,免疫酶技术,免疫酶技术,用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可用酶标测定仪测定光密度(OD)来反应抗原或抗体含量,灵敏度可达到ngpg/ml。,细胞1,标记物,DH+HO,D+2H2O,酶具有高效催化性:可加快化学反应的速率;在反应前后没有质和量的改变;微量的酶便可发挥巨大的催化作用,酶免疫技术,酶联免疫吸附试验酶免疫组化法,用于检测可溶性抗原或抗体,用于检测组织或细胞表面的抗原,酶联免疫吸附试验-ELISA,ELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA)。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记:加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物;产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。,酶联免疫吸附实验ELISA,实验原理抗原或抗体吸附到固体相载体表面后,以及抗原抗体与酶连接后,仍保持免疫活性和酶活性,当酶遇到相应第底物时,在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。,ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂:,(1)免疫吸附剂(2)结合物(3)酶反应的底物,ELISA的类型,间接法(测抗体)双抗体夹心发(测大分子抗原)竞争发(测小分子抗原),竞争法,用于抗原和半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液,而另一组加酶标记抗原,再经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可,因此,对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快,因此只有一个保温洗涤过程,但常需用较多的酶标记抗原。,操作步骤,1.从冰箱取出试剂盒,室温平衡30分钟。2.按如下方式加待测血清,每孔1滴。3.每孔加酶结合物1滴(孔上方悬空滴加,无气泡),混匀,空白孔不加,置37度温箱30分钟。4.取出反应板,弃液,拍干。5.每孔注满洗条液,(不要溢出)静置5秒后弃液,拍干,重复洗条5次,拍干。6.
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