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文档简介

小鼠肝细胞原代培养消化法,1.处死及消毒：脱颈处死小鼠,浸入75%酒精中1min,沥干。2.取材：剪开腹部皮肤,撕开皮肤,暴露腹膜,打开腹腔,取出肝脏。3.解剖：修剪除去肝门区血管结缔组织,剪取一块蚕豆大小的肝组织。4.剪切：把肝组织剪成12mm小块,用无血清培养液淋洗23次。,1,5.消化：将肝组织块移入小瓶中,加8ml混合消化液,37、40min,每隔510min顺时针摇匀。6.过滤：消化液过100目筛网,收集滤液,移入离心管。7.离心：离心800rpm,5min,吸弃上清液。8.洗涤：用无血清培养液离心洗涤次。9.重悬浮及计数：用RPIM1640培养液(含10%胎牛血清)重悬浮肝细胞,（取样计数）。10.接种及培养：将细胞接种于培养瓶中,密度为106/ml(2105/cm2),37、5%CO2培养。,2,注意事项,根据组织类型选择适当的消化液。控制消化时间，尽量减少细胞损伤。尽快促进细胞贴壁，必要使用生长基质涂抹瓶壁，或先少量细胞悬液接种，培养35h后，补足培养液。适当提高细胞接种密度。,3,
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