实验4 杀虫剂毒力测定

。杀虫剂毒性测定，农药科学部农药毒理学和害虫抗药性监测研究组，吴顺凡，电子邮件：WUF ；办公室：科学楼B828，2014年4月18日，实验4。基本概念，杀虫剂的生物测定：这是一种杀虫剂的生物测定方法，用来测量杀虫剂对昆虫和螨虫的影响。从广义上讲，这是一种通过利用生物(昆虫、螨虫)对农药的反应来鉴定某种农药或化合物的生物活性的基本方法。农药毒性测定的主要内容有：一是初步毒性测定；二是精确的毒性测定；初步毒性试验一般只判断药物是否具有杀虫活性，不能确定化合物的毒性，也不能区分中毒方式。精确毒性测量是指在特定条件下，测量某些农药对某些昆虫的毒性程度的一种动作方式。测定方法的选择，不同杀虫剂对不同种类害虫的毒性程度不同，而且毒性作用方式也不同，所以测定方法也不同。农药的主要作用方式有：触杀、胃毒、内吸、熏蒸、驱避、引诱、拒食、生长调节等。一般来说，测试方法通常限于杀虫作用模式的一个方面，因此测定方法的选择也应根据农药的作用模式来设计。主要内容，触摸杀毒力测量；胃毒性的测定；熏蒸毒性的测定；内部药物滥用的确定。接触毒性试验表明，杀虫剂的接触毒性是杀虫剂通过昆虫表皮、感觉器官和爪垫进入人体时产生的毒性效应。在确定杀虫剂的接触杀灭效果时，有必要设法防止药剂通过口、阀和其他方式进入体内。由于目前使用的大多数农药都具有很强的触杀作用，因此测定农药的触杀力非常普遍。接触消毒力的大小通常用LD50、LC50或KT50表示。测定方法可分为整体处理法和局部处理法。常用的方法有点滴法、浸渍法、药膜法、喷雾法、粉末喷雾法和铜丝环法。点滴法是最常见的方法，因为它的应用率准确，易于操作。然而，静脉滴注法通常需要测试大量的昆虫。另外，静脉滴注部位和各虫体的药液静脉滴注量和分布面积相同，否则会有明显的影响。喷涂法和粉末喷涂法最接近现场情况，但喷涂(粉末)过程中的压力是影响药物喷涂均匀性的一个重要原因。此外，胃毒性的可能性有时不能完全消除。药膜法比较接近实际防控情况，操作方便。它通常用于比较接触致死率和测量药物的击倒效果。击倒50%受试昆虫(KT50)所需的时间(分钟)用于表达或测量杀虫剂对蠕虫非常小的昆虫(如蓟马、赤眼蜂等)的毒性。)；浸泡法是最简单的方法，但它容易产生胃毒性，适用于水生昆虫，如摇摆器和水蚤。Topicalapplication是毛细管微滴管结构的示意图。滴药方法是用毛细管微滴器在每个虫体的一定部位滴加一定浓度和一定量的药液。它适用于较小的昆虫，如鳞翅目幼虫和蚜虫。手动微滴/自动微滴，毛细管微滴、橡胶头、支撑和固定部件、毛细管、毛细管微滴由毛细管和1mL移液枪头组成。毛细管是一种薄钢管，内径约为80微米，长度为0.5厘米。毛细管由1毫升移液管枪的头部固定。枪头的另一端装有橡胶头，顶部有一个小孔，用于压出或吹出药液。毛细管体积可通过同位素稀释法或快速薄层扫描仪(CS-920)测量。静脉滴注的剂量通常是几微升。滴法实验步骤，初步试验：t同时，对50只昆虫注射丙酮溶液进行空白对照试验。根据初步试验的结果，配制一系列梯度浓度(等比系列)的药液，包括从最低浓度(活虫组剂量)开始到最高浓度(死亡组剂量)。用半人工饲料将标准试验幼虫挑入培养皿(直径：5厘米)，用丙酮将每个培养皿中的5或6种试剂配制成等比系列浓度。用0.04升毛细管滴管将药液滴在幼虫胸部的背面。滴加法被操作。每个浓度点为10个，重复3次，共30只幼虫。以丙酮为对照，处理幼虫的饲养条件：温度271，光照时间16: 8 (L: D) h，点滴法操作，处理后，分别喂养幼虫，并分别记录处理剂量。根据治疗剂量和毛细管滴注器的体积，计算每只幼虫的剂量(微克/头)。(字幕配音，放置培养箱的视频)核对测试结果，并计算药物对受试昆虫的半数致死剂量(LD50)。数据测量和分析，(2)喷雾法和粉末喷雾法，用波特喷雾塔直接喷洒昆虫也是测量接触毒性的常用方法。波特喷雾塔的结构为文丘里管，两端大中间薄，雾点直接向下喷雾。采用文丘里管的目的是保持沉降雾点的压力一致，使喷洒物表面沉积的药液量更加均匀。喷管下方有一个平台，用于放置喷洒的物质。可以上下调节平台，使喷管下边缘与平台保持适当的距离(如果距离太大，大部分液滴会散开；距离太小，导致空气回流)。整个装置放置在一个大玻璃柜中，以保持喷雾出口的温度和雾点不受外部气流的影响。喷雾采用带雾化器的喷头(气流雾化)。在一定的压力下，喷雾点可以相当均匀和稳定。波特喷雾塔喷雾步骤，取18组培养皿，每组含有10只相同年龄和大小的棉铃虫幼虫，共3龄。用吸管准确吸取2mL配制好的一定浓度的药液，放入小瓶中。将含有棉铃虫的培养皿放在喷淋台玻璃盖的中央。启动电机，使药液在规定时间内(约30秒)喷出药瓶中的所有药液(试验前将压缩泵的压力调节至1kg/cm2，并在每次喷射时保持压力一致)。立即将喷洒后的棉铃虫放入干净的培养皿中，用人工饲料喂养，记录2小时、24小时和48小时后棉铃虫的死亡情况。胃毒农药生物测定是指受试昆虫因食入药物引起消化道中毒死亡的反应，对胃毒农药进行的生物测定。确定杀虫剂对昆虫的胃毒性的方法因目标昆虫的类型和杀虫剂的剂型而异。根据目标昆虫摄食量和习性的不同，可分为无限投饵法和定量投饵法。无限投喂法：饲料混合投喂法、培养基混合投喂法、土壤混合投喂法：叶中毒法、液斑投喂法、口腔注射法、有毒饲料投喂法等。将称量好的药粉与谷物等饲料混合均匀，或将药物溶于有机溶剂(如丙酮)中，然后将一定量的药液与食物混合均匀，待溶剂挥发后进行测试。准入标准是一致的，每次处理20至50只昆虫。然后在适合供试昆虫生长的条件下(26 30)培养5天或7天，检查死亡昆虫的数量。用POLO-Plus软件计算毒性回归曲线的B值及其标准误差、LC50值和95%置信限。数据处理-概率值分析和概率值分析是传统农药生物测定统计最重要的基本方法。在人群中，死亡率和剂量或浓度接近正态分布，即稍微偏离曲线2.死亡率被转换成概率值：(1)首先，使用5-7个剂量个死亡率点来确定“S”曲线，并且可以绘制许多适用于这5-7个点的曲线；(2)S曲线的特点是两端平缓，中段陡峭。因此，当死亡率接近50%时，剂量对数变化很小。该图显示了剂量对数-死亡率概率指标。写Y=bx一条直线，从概率值为5的直线的横坐标和回归线的交点做一个平行的对数值，对照这个数进行检查，就是致死中值。农药室内生物测定统计分析步骤：POLO使用，第一步在文本文档