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文档简介

.,实验七、线粒体的活体染色和观察盛军庆南昌大学生命科学与食品工程学院,.,实验七、线粒体的活体染色和观察一、实验目的：了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。二、实验原理：健纳绿B（JanusGreenB）对线粒体具有专一性染色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色，在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。,.,三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞四、步骤及方法1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液的培养皿内，洗去血液。2、将1/5000JanusGreenB染液倒入另一培养皿中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样，细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝绿色即可）。,.,3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和组织块分离。4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央的Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片，液体不要太多。5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋，使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料总得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非常清楚。,.,6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布得特别多。1、Ringer氏溶液的配方：NaCl8.5/6.5克CaCl20.12克重碳酸钠0.2克氯化钾0.14克磷酸氢二钠0.01克葡萄糖2.0克水1000ml,.,2、1%1/5000浓度的健那绿B染液称取0.5克JanusGreenB溶于50mlRinger氏溶液中，微热（30-40）使之很快溶解。用滤纸过滤后即为1%原液。取1%原
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