亲和层析实验相关操作示图.ppt

亲和层析实验相关操作示图,生物教研室-朱超锋-2013/4/8,物品介绍,蠕动泵,硅胶管,层析柱,推杆,筛板,铁丝,筛板的装入,筛板的作用层析柱进行使用时，需使用两块筛板层析柱的底部放置一块，作用是：截留填料，而溶液能通过筛板流出。填料的上方再放置一块筛板，作用是：防止填料上方加入的溶液直接冲击填料床面（柱床），避免将床面冲散。填料被封装在两块筛板之间。（注意：上筛板和填料的上端刚好相接触，但不挤压填料）,下筛板,填料,上筛板,缓冲液,筛板的装入,1.用纯水润湿筛板,2.筛板放置于推杆上,3.将推杆推入柱子内,4.完成下筛板的装入,下筛板,蠕动泵卡片的装卸,卡片的作用卡片将硅胶管固定并挤压在泵头上，泵头转动从而对硅胶管产生一个规律的脉冲性挤压，控制硅胶管内溶液的流动蠕动泵泵头上有两个卡片，一个卡片可固定一根硅胶管，因此蠕动泵最多可同时驱动两根硅胶管溶液的流动。（注意：当只驱动一根硅胶管时，需将固定有硅胶管的卡片放置在泵头朝内侧；空卡片放置在泵头外侧）卡片右上角有调节棘轮：调节软管与滚轴的紧密程度。棘轮上提，压紧硅胶管；下放，则放松。（注意：紧密度应适中，太松则硅胶管漏液，太紧则对硅胶管造成损坏）,调节棘轮,扳机,泵头,外侧,内侧,卡片,蠕动泵卡片的装卸,1.卸前状态,2.大拇指往下压扳机,3.另一只手扶住卡片顶端防止卡片弹射出去,4.完成卡片的卸出,蠕动泵卡片的装卸,1.将硅胶管上的管卡卡在卡片上,2.将管套入内部,3.将卡片U口放入固定柱,4.U口卡入固定柱,固定柱,卡片U口,蠕动泵卡片的装卸,5.用力往下压卡片,6.卡片装入泵头,7.将硅胶管连接到层析柱,8.层析柱垂直固定好,调节棘轮-试漏（泵未开启！）,1.往柱子内装纯水,2.未调节棘轮,3.将棘轮往上提1卡,4.继续往上提棘轮,泵未开启，因为管未被调节棘轮挤压，水会因重力作用，从另一端流出,管虽受挤压，但还有缝隙，水依然会因重力作用，从另一端流出,直至挤压合适时，缝隙被封闭，水不再流出（3分钟内）,调节蠕动泵转向,泵面板显示数值为泵头转速，非管内溶液流速。流速需手动接水测定。,泵开启，转头逆时针转动时，水流方向是从右到左,水流方向不对时，请按面板的转向按钮，改变泵头转动方向,填料装柱,1.装平衡液,2.装填料,3.将上筛板放入,把准备好的填料，转入柱子。填料自然沉降。直至沉降完成（床面需平整，不平整可用玻璃棒搅拌填料让其重新沉降）,用玻璃棒将上筛板倾斜或垂直放入置于平衡液液面下方,再用玻璃棒将上筛板方向转至大概水平,调整好蠕动泵后，关闭蠕动泵，往柱子内约1/4高度的亲和柱平衡液,4.将上筛板放入,填料装柱,将筛板推至刚好与填料上表面接触（不要挤压填料！）,用推杆将上筛板往下推（筛板下方应该没有气泡，若有请用玻璃将筛板弄至垂直赶走气泡后，再重复以上操作）,5,6,上样示意图（示意图两筛板间没装填料，仅为示意图）,用移液管将粗酶液加入（移液管尖端靠近筛板，并在筛板中间）,平衡好后并调节好流速，上样前，需将上筛板以上的平衡液排空至液面刚好和筛板相切，关闭蠕动泵（可用泵抽走，若量较多，可用移液管从上方吸走）,1.上样前排液,2,上样后，开启蠕动泵，并进行收集。当粗酶全部进入填料后（粗酶液面和筛板相切），关闭蠕动泵，往柱子内加入一定量平衡液后，再开启蠕动泵，继续收集,卸出筛板（实验结束后）,1,2,3,倒去填料后，将柱子下端接到水龙头的橡胶管上