附录4　常用的消毒灭菌操作方法.pptx

,微生物的实验室培养,-消毒灭菌操作方法,嘉峪关市第一中学刘宗巨,1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？,2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？,3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？,4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。,一、无菌技术,阅读教材P15-P16相关内容，回答以下问题：,1.,一.无菌技术,防止外来杂菌污染,a.目的：,b.方法：,消毒与灭菌,消毒与灭菌的概念和区别？,是指在微生物培养操作过程中，防止一切微生物侵入污染的操作技术。,1.获得纯净培养物的关键是什么？,（）消毒定义：利用较为温和的化学或物理方法杀死物体表面或内部的部分微生物的过程。不包括芽孢和孢子。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,（2）灭菌的定义：,以强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,a.煮沸消毒法:100煮沸5-6minb.巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15minc.化学药剂消毒法:用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源，石炭酸或煤酚皂空气消毒d.紫外线消毒,(1)消毒的方法：,3.常用的消毒与灭菌的方法,a.灼烧灭菌,(2)灭菌的方法：,b.干热灭菌：160-170下加热1-2h。c.高压蒸汽灭菌：100kPa、121下维持15-30min.,(一)干热灭菌的操作方法,1.装入待灭菌的物品,二.常用的消毒灭菌操作方法,2.灭菌,3.降温,4.开箱取物,1.取桶加水,（二）高压蒸汽灭菌的操作方法,2.装入待灭菌的物品,3.加盖,拧紧螺栓,4.加热灭菌,5.降温取物,（三）紫外线灭菌的操作方法,1.只适用于表面灭菌和空气灭菌.2.10m2小型接种室,2m高位置,2只30W紫外灯,开灯照射30min.3.照射前,适量喷施化学抑菌剂.,常见消毒灭菌操作方法比较,相同温度下，干热灭菌法和湿热灭菌法相比较，湿热的灭菌效果较干热好，使用也更普遍。湿热较干热灭菌效果好的原因有：热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱的键，更易使蛋白质变性。蛋白质含水量与其凝固温度成反比。湿热灭菌中的菌体蛋白质吸收水分，因此较同一温度的干热空气中的菌体蛋白质更易凝固。蒸汽存在潜热当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体的温度。因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。,最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。,高压蒸气灭菌的原理是A高压使细菌DNA变性B高压使细菌蛋白质凝固变性C高温烫死细菌D高温使细菌DNA变性,B,关于灭菌和消毒的不正确的理解是A消毒和灭菌实质上是相同的B灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C接种环用烧灼的方法灭菌D常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法,A,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手,答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。,旁栏思考,课后实验安排：全班分为