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离子交换色谱,运用与分析,主讲：许先融编辑：谢晓敏资料搜集：刘佳娜李春凤甘权贤资料整理：李扬帆刘雁08中药分析与鉴定（1）班,基本原理：,离子交换色谱（ionexchangechromatography，IEC）以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。,主要用于分离离子或可离解的化合物，包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各种生物大分子。,离子交换色谱的运用：,分离纯化生物大分子,Po+ZDo=Pb+ZDb,重视,Po:流动相中溶质的浓度；Pb:填料表面上被吸附的溶质浓度;Do:流动相中洗脱剂的浓度；Db:填料表面上洗脱剂的浓度；Z:蛋白质在吸附过程中从填料表面上被置换的洗脱剂的数目；,以离子交换色谱快速纯化8一淀粉酶为例,研究探讨离子交换色谱,本研究利用合成的强阴离子交换柱很好地分离了a-淀粉酶粗品,其活性回收率高达96%,比活性达388ug/mg蛋白质纯度提高30倍。此法的研究成功为大规模制备高纯度a-淀粉酶提供了一个新工艺路线。,高纯度的8一淀粉酶可作为酶试剂,研究生物作用的特性、酶反应机理,测定生化反应的平衡常数。,1.0摘要：,2.0实验部分,2.1标准酶液配制用微量天平准确称取5mg高纯度的a-淀粉酶试剂,于小离心试管中,准确加1.0ml水,溶解后,在1300r/min的高速离心机上离心5min,小心转移上部清液于另一离心试管中,此液相当于1062u/ml活力.,3.0结果与讨论,3.1洗脱剂为获得高的洗脱效率,本实验选用0.02mol/LTris-2mol/LNacl(PH6.0)体系作为洗脱剂.（Tris-指三羟甲基氨基甲烷）,由图2可知,在2.0mol/L以下,随盐浓度的增加,洗脱能力增大,活性回收率提高。洗脱液中离子强度对洗脱效率的影响可归结为离子交换平衡的移动,这种色谱行为表明该固定相具有典型的阴离子交换特性,符合离子交换色谱的洗脱规律。但在2.0mol/L以上,随盐浓度增加洗脱能力下降。这种反常现象,可能是由于离子交换柱的多功能特性引起。,实验证明,离子交换柱不仅有离子交换的作用,而且还表现一定的疏水作用的。并且这种疏水作用,随溶液离子强度发生变化。当洗脱剂浓度大于2.0mol/L时,由于溶液的表面张力过大,离子交换剂的疏水作用变得明显,对蛋白质疏水缔合作用增强,故被吸附的蛋白质难以洗脱,因而活性回收率下降。所以选择抓Nacl浓度为2.0mol/L.,3.3PH对活性回收率的影响,总结,凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用于无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、
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