高考生物一轮总复习第2讲　微生物的培养与应用

第2讲微生物的培养与应用考纲要求核心素养1.微生物的分离和培养2培养基对微生物的选择作用3某种微生物数量的测定科学探究通过实验探究微生物培养的条件，培养学生针对特定的生物学现象，进行观察、提问、实验设计、方案实施以及对结果的交流与讨论的能力。科学思维通过分析培养基的成分及其作用，比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同，比较鉴别培养基和选择培养基的异同，提高分析与综合的能力。微生物的实验室培养授课提示：对应学生用书第186页基础突破抓基础，自主学习1培养基2无菌技术(1)含义：培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的污染。(3)无菌技术的方法消毒：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法。灭菌：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。3大肠杆菌的纯化培养4菌种的保存方法(1)对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。(2)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。重难突破攻重难，名师点拨1消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器2.纯化培养方法方法平板划线法稀释涂布平板法原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数较复杂，平板不干燥效果不好，需涂布多个平板适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌特别提醒(1)分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。(2)平板划线法只适用于微生物的纯化，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线末端处的菌种最纯，进行平板划线应注意如下操作：每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一块区域不要与第一区域相连。(3)倒平板的温度一般在50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。(4)平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又能防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。题型突破练题型，夯基提能1下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()解析：倒平板时，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，A正确；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，B正确；不同区域内划线，而且每次转换划线角度后再进行划线，让菌种来源于上一次划线末端，C正确；下一次划线没有从上一次划线末端开始，D错误。答案：D2下列有关平板划线的操作中，不正确的是()A将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰D最后将平板倒置，放入恒温箱中培养解析：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧，可以迅速彻底地灭菌，A正确；在平板划线时，要划35条平行线，不是随机的，B错误；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰，C正确；将平板倒置放在恒温箱中培养，D正确。答案：B3用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()都需要用固体培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用菌落数来计数活菌A BC D解析：固体培养基上可以获得大肠杆菌的单菌落，正确；分离纯化大肠杆菌可使用接种环或涂布器进行划线法或涂布平板法接种，错误；在火焰旁会形成一个相对无菌区，在此处进行接种，可以避免杂菌感染，正确；平板划线法只能用来分离纯化获得单菌落，不能用来计数，错误。故答案选B。答案：B4无菌操作是微生物接种技术的关键。传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：(1)消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理？_。皮肤饮用水牛奶注射器培养皿接种环培养基果汁酱油手术刀A BC D以上全部(2)如图是利用_法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：每次划线前要_；冷却后从上一区划线_开始划；首尾区_。(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是_，观察培养基上是否有菌落产生。(4)有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是_。解析：(1)应采用消毒，应采用灭菌，故选A。(2)微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染，题图是采用平板划线法接种，需要注意的是连续划线时，每次划线前要灼烧接种环，同时划线结束首尾不能相连。(3)检测培养基是否被污染，对固体培养基应采用的检测方法是将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间，观察培养基上是否有菌落产生。(4)制作泡菜时，乳酸菌是发酵菌种，发酵失败的原因可能是青霉素杀死了乳酸菌。答案：(1)A(2)平板划线灼烧接种环末端不连接(不重叠)(3)将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间(4)青霉素杀死了乳酸菌图表突破析图表，融会贯通如图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请思考：(1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ _。(3)如图是采用上述接种方法接种后培养的效果，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。答案：(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域(3)图乙微生物的分离与计数授课提示：对应学生用书第188页基础突破抓基础，自主学习1土壤中分解尿素的细菌的分离实验流程土壤取样样品稀释培养与观察细菌的计数分离方法稀释涂布平板法菌种鉴定以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红说明尿素被分解2.分解纤维素的微生物的分离重难突破攻重难，名师点拨1微生物计数的两种方法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数(CV)MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数400104稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大特别提醒“间接计数法选择菌落数在30300的平板”的2个提醒(1)只得到1个菌落数在30300的平板是错误的，原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)得到3个或3个以上菌落数在30300的平板，也不一定正确，原因是如果不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30300”，但由于34与另外两个平板差异较大，应找出原因并重新实验。2微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物3.筛选微生物的3种方法(1)单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物。(2)选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物。(3)鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。题型突破练题型，夯基提能1有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。下列叙述错误的一项是()A在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于选择培养基B无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染C为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈小说明该菌株的降解能力强D通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌解析：欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这类培养基属于选择培养基，A正确；无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染，B正确；为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，C错误；实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)、高压蒸汽灭菌(如培养基)等，D正确。答案：C2(2018湖南师大附中月考)自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中的铵盐，对水体有一定的净化作用，请回答：(1)培养硝化细菌时，将含固体培养基的培养皿倒置的目的是_。培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供_，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于_培养基。(2)硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的_。样液稀释103倍取0.1 mL涂布到四个平板，统计其菌落数分别为251、265、276、348个，可推测原样液中硝化细菌的浓度为_个/mL，该方法测定的硝化细菌的含量和实际值相比，一般_(填“偏大”或“偏小”)。(3)若要探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小，现提供足量含某铵盐的液体培养基及pH分别为5和9的弱酸和弱碱缓冲液，写出你的实验设计思路。(注：物质的具体检查方法不作要求)_。答案：(1)防止冷凝形成水滴污染培养基(或防止培养基表面的水分过快挥发)氮源(或氮源和能量)选择(2)无菌水2.64106偏小(3)将含铵盐的液体培养基均分成三等份，分別加入等量的弱酸、弱碱缓冲液和无菌水(作为对照)使其pH依次调节为5、9、7，培养相同时间后，测定培养基中的铵盐的剩余量来判断硝化细菌对铵盐转化能力的大小3高温淀粉酶在大规模工业生产中是极为重要的酶制剂。研究者从热泉中筛选出了能高效产生高温淀粉酶的嗜热菌。其筛选过程如图所示。(1)进行过程的目的是_嗜热菌培养液；过程所使用的接种方法是_。(2)、号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_；对培养基常用_法进行灭菌。对于空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_，如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，_。(3)部分嗜热菌在号培养基上生长时可释放_分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈_(填“大”或“小”)的菌落，接种到号培养基。解析：(1)分析题图可知，过程是梯度稀释，目的是对样品进行稀释；过程是用稀释涂布平板法进行接种。(2)培养基配制和灭菌时应先调节pH，然后再进行灭菌，如果先灭菌再调节pH，又会污染培养基；紫外线对DNA分子有损伤作用，且能使蛋白质变性，所以常用来对空气灭菌；检测灭菌效果的方法就是将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。(3)能分解淀粉的嗜热菌在号培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，透明圈越大则淀粉酶的活性越强，所以要从中挑出透明圈大的菌落，接种到号培养基上。答案：(1)稀释稀释涂布平板法(2)先调节pH，后灭菌高压蒸汽灭菌损伤DNA的结构观察培养基上是否有菌落产生(3)淀粉酶大随堂巩固达标检测三级训练提速提能授课提示：对应学生用书第189页练小题提速度判断下列说法是否正确1培养基分装到培养皿后进行灭菌。()2从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。()3只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。()4对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。()5分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。()6刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。()7刚果红染色法只能在培养微生物的时候加入刚果红。()练真题明方向命题分析1考查特点：全国卷对本部分内容考查以非选择题的形式考查，高频考点为微生物的实验室培养技术、特定微生物数量的测定方法、培养基对微生物的选择作用等知识点，如2017年全国卷考查筛选分解尿素细菌的原理和过程。2018年全国卷考查培养基的制备和微生物的计数。2命题趋势：以非选择题的形式考查微生物的实验室培养技术，或结合具体实例考查培养基对微生物的选择作用等。也可在实例的情境下考查特定微生物数量的测定方法。1(2018高考全国卷)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是_，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133。乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。解析：(1)链霉素是抗生素，能够抑制细菌生长，为选出真菌，需在M培养基中加入链霉素，该培养基属于选择培养基。(2)培养基中的营养成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐；细胞中含有氮元素的生物大分子有DNA、RNA、蛋白质等，故加入氮源可参与蛋白质和核酸的合成。(3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解成麦芽糖，淀粉遇碘变蓝，在培养基中加入碘液后呈现蓝色，微生物分解淀粉后蓝色消失，菌落周围会出现透明圈，可根据透明圈的大小判断产生淀粉酶的多少。(4)统计菌落数一般选择菌落数在30300的平板计数，乙同学统计的3个平板有1个菌落数为27，和其他2个差距较大，结果的重复性差，应该重新做实验。答案：(1)细菌选择(2)碳源、无机盐核酸、蛋白质(3)碘液淀粉遇碘显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被分解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另外2个差距悬殊，结果的重复性差2(2018高考全国卷)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常要经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。解析：(1)玻璃和金属材质的实验器具可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)与煮沸消毒法相比，巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(3)紫外线消毒是利用适当波长的紫外线能够破坏微生物细胞中的DNA或RNA的分子结构，造成细胞死亡，达到消毒的效果。在照射前适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常要经过氯气消毒。(5)未将锅内冷空气排尽，可能会导致压力虽达到设定要求，而锅内却没有达到相应温度的情况。答案：(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽3(2018高考全国卷)回答下列与酵母菌有关的问题：(1)分离培养酵母菌通常使用_(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或 “麦芽汁琼脂”)培养基，该培养基应采用_灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间可观察到菌落，菌落的含义是_。(2)酵母菌液体培养时，若通入O2可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)；若进行厌氧培养，可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。(3)制作面包时，为使面包松软，通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是_。解析：(1)酵母菌为异养型生物，碳源主要来自有机物，如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等，所以通常使用麦芽汁琼脂培养基；培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌；由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称为菌落。(2)酵母菌为兼性厌氧型生物，有氧条件下繁殖，无氧条件下发酵。(3)酵母菌发酵可产生CO2，使面包松软多孔。答案：(1)麦芽汁琼脂高压蒸汽由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体(2)菌体快速增殖乙醇产生(3)酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软4(2017高考全国卷)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_ _(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_ (填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2 HPO4，其作用有_(答出两点即可)。解析：(1)细菌分解尿素是由于细菌体内能合成脲酶的结果，尿素是有机物，分解尿素的细菌是分解者，而不是生产者，只有生产者才能利用CO2作为碳源合成有机物。葡萄糖通常既可作为碳源，也可作为能源。(2)筛选分解尿素的细菌，通常只能用尿素作为唯一氮源，“NH4NO3”和“尿素NH4NO3”均含有无机氮源，可被不能分解尿素的细菌利用。(3)KH2PO4和Na2HPO4为微生物提供P元素和无机盐离子如K和Na，还可作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH的稳定。答案：(1)脲酶分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物为细胞生物的生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH的稳定填网络串线索填充：灭菌平板划线法选择培养基间接计数法(活菌计数法)课时作业知能提升单独成册单独成册：对应学生用书第313页1(2018江西上饶一模)生物兴趣小组欲寻找土壤中可以降解塑料袋的微生物。(已知塑料袋的主要成分为聚乙烯：CH2CH2)(1)要寻找土壤中能降解塑料袋的微生物，需要在_的环境中采集土样。(2)选择培养过程应制备_的培养基，从物理性质划分，其为_培养基。(3)若需要对所得菌种进行分离计数，应采用_进行接种。(4)为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。(5)在对所得菌种进行大规模工业化培养之前，需要先_。(6)该实验如需对照，对照组应_。解析：(1)要寻找土壤中能降解塑料袋的微生物，需要在富含聚乙烯的环境中采集土样。(2)选择培养过程应制备以聚乙烯为唯一碳源的培养基，从物理性质分，其为固体培养基。(3)若需要对所得菌种进行分离计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。(4)为避免污染，需将培养皿呈倒置状态放置。(5)在对所得菌种进行大规模工业化培养之前，需要先测定菌种分解聚乙烯的能力。(6)该实验如需对照，对照组应配置以聚乙烯为唯一碳源的固体培养基，不接种任何菌种或接种等量的无菌水。答案：(1)富含聚乙烯(2)以聚乙烯为唯一碳源固体(3)稀释涂布平板法(4)倒置(5)测定菌种分解聚乙烯的能力(6)配置以聚乙烯为唯一碳源的固体培养基，不接种任何菌种或接种等量的无菌水2(2018江西新余期末)日前网络传言手机细菌比马桶多。如图为两电视台通过实验展示的调查结果。回答下列相关问题：(1)该实验需制备_(填“固体”或“液体”)培养基。在液体培养基中加入_可配置成固体培养基。(2)据图，两电视台均采用_法接种，接种前需要采用_法对培养基进行灭菌。(3)通过观察菌落的_(答出两点即可)可以初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类群。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是_。(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为100的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为98、100、102，则该手机屏幕的细菌数为_个/平方厘米。该实验对照组要取培养基涂布_进行培养。解析：(1)从图示内容看，菌液在培养基上形成菌落，故为固体培养基，通常固体培养基配制是在液体培养液中加入一定量琼脂。(2)从图示内容看，微生物均匀分布而不呈线状，说明采用的接种方法是稀释涂布平板法，接种前需要采用高压蒸汽法对培养基进行灭菌。(3)通过观察菌落的形态、颜色、形状、大小、隆起程度等可以初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类群，实验结果不同的原因可能是手机的取样和马桶的取样都不相同，也可能是对手机或马桶的处理手段不同。(4)对于微生物计数，通常在不同样方求平均值，该手机屏幕的细菌数为(98100102)/3(55)(100.1)1004104个/平方厘米。对照组通常在培养基中接种等量无菌水。答案：(1)固体琼脂(2)稀释涂布平板高压蒸汽灭菌(3)形状、大小、隆起程度和颜色等手机的取样和马桶的取样都不相同(4)4104 0.1 mL无菌水3利用微生物转化胆固醇在医药生产上有重要作用。实验人员从土壤中筛选胆固醇转化菌株的过程如图所示。请分析回答下列问题：(1)实验人员将土壤样品接种到富集培养液中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡，其主要的作用是_。(2)培养一段时间后，从中取适量培养液转移接种到选择培养液中培养36 h后，再转移到相同的选择培养液中培养。与培养液不同，培养液成分的主要特点是_。在相同的培养液中转移培养主要是为了避免原培养液中_的干扰，同时，又可以_ _。(3)从中取适量的培养液涂布到之前，需要_，涂布前需将涂布器_。(4)根据中菌落的形态特征，选取所需的菌种接种到_培养基中临时保存。解析：(1)分解胆固醇的微生物属于需氧型微生物，所以将土壤样品接种到富集培养液中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡以增加溶解氧。(2)据图分析，培养液的作用是选择培养，筛选胆固醇转化菌株需要使用以胆固醇为唯一碳源的选择培养基。在相同的培养液中转移培养主要是为了避免原培养液中碳源的干扰，又可以筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种。(3)选择培养后的培养液需要进行梯度稀释才能进行涂布培养，涂布前需将涂布器在酒精灯火焰上进行引燃灭菌并冷却。(4)筛选出目的菌种后，将菌种接种到斜面培养基中临时保存。答案：(1)增加溶解氧(2