紫外-可见分光光度法——(最终版)PPT演示课件

紫外-可见分光光度法,主讲人：周媛,UltravioletLight(190380nm),+,VisibleLight(380750nm),第一节紫外可见分光光度法基本原理,紫外可见分光光度法（ultravioletandvisiblespectrophotometry；UV-Vis）：是通过被测物质在紫外区或可见光区的特定波长处或一定波长范围的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。,一、紫外可见分光光度法的特点：（1）具有较高的灵敏度（2）有一定的准确度，该方法相对误差为1%3%，可满足对微量组分测定的要求。（3）选择性好，多种组分共存，无需分离直接测定（4）操作简便、快速、仪器设备简单。（5）应用广泛，无机、有机物均可测定。,二、紫外可见分光光度法的基本原理光的基本性质,光的波粒二象性,波动性,粒子性,光的折射,光的衍射,E,光电效应,光的干涉,光的偏振,波动性,光的传播速度:,c真空中光速：3.0108m/s波长：1m=10-6m,1nm=10-9m,1=10-10m频率，单位：赫兹Hz次/秒n折射率，真空中为1=c；波数=1/=/c,微粒性,光是由光子流组成，光子的能量：,h普朗克(Planck)常数6.62610-34Js频率E光量子具有的能量单位：J(焦耳)，eV(电子伏特)1eV=1.6021019J,波粒二象性,结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。,基本概念：,电磁辐射（电磁波，光是其中一种）：以巨大速度通过空间、不需要任何物质作为传播媒介的一种粒子流（能量）。电磁波谱：电磁辐射本质是一样的，区别在于频率不一样。按波长不同排列起来就形成电磁波谱,光谱区间,10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm,0.1nm,射线,x射线,微波,红外光,紫外光,10nm,750nm0.1cm,0.1mm1m,无线电波,1m1000m,可见光,400750nm,远紫外,10nm200nm,200400nm,近紫外,（真空紫外）,基本概念：,吸收光谱：物质由基态跃迁至激发态时，对辐射能选择性吸收而得到的原子或分子光谱。,紫外可见分子吸收光谱与电子跃迁,物质分子内部三种运动形式：（1）电子相对于原子核的运动（2）原子核在其平衡位置附近的相对振动（3）分子本身绕其重心的转动分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级三种能级都是量子化的，且各自具有相应的能量,能级跃迁,紫外-可见光谱属于电子跃迁光谱,是其分子中外层价电子跃迁的结果（三种）：电子、电子、n电子外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。主要有四种跃迁形式，它们所需能量大小顺序为：nn,电子跃迁类型,1、*跃迁跃迁所需能量最大0.990）。,对照品溶液的制备精密称取经60减压干燥至恒重的葡萄糖醛酸对照品适量，加水制成每1ml中约含0.06mg的溶液，摇匀。,测定法精密量取供试品溶液1.0ml，置25ml具塞试管中，照标准曲线项下自“冷却至4以下”起，依法操作，由回归方程计算葡萄糖醛酸的含量，即得。（玻璃酸钠含量以葡萄糖醛酸计应不低于0.040%。）,计算公式：A样：供试品溶液在530nm波长处的吸光度,（1）0.06mg/ml对照品溶液的制备：精密称取对照品12mg置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，从中取0.5ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。,（2）精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8和1.0ml，分别置25ml具塞试管中，各加水至1.0ml，混匀。得到对照品溶液的浓度分别为（mg/ml）:0.012、0.024、0.036、0.048、0.060,（3）在530nm波长处测定各对照品溶液的吸光度值分别为：1、0.136182、0.306173、0.489334、0.691865、0.86714,（4）将测得的吸光度对浓度作标准曲线，得到回归方程：y=0.06501x+0.00368R2=0.9992,（5）0.10mg/ml供试品溶液的制备：取供试品1ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度。,（6）在530nm波长处测定供试品溶液的吸光度：1、0.6555