免疫学技术原理ppt课件

抗原抗体反应,.,主要内容,抗原抗体反应的原理,抗原抗体反应的特点,影响抗原抗体反应的因素,免疫学检测技术的类型,思考题小结,（一）抗原抗体反应的原理,抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体,物质基础:,.,体内：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素或引起免疫病理的损伤,体外：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应,.,（二）抗原抗体反应的特点,特异性可逆性比例性阶段性,特异性：抗原与抗体结合反应的专一性,抗原抗体反应特异性示意图,分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性,（1）特异性,两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应,交叉反应（crossreactions）,抗原抗体交叉反应示意图,AgB,(2)可逆性,可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性,影响因素：抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，结合越牢固，越不易解离环境因素对复合物的影响pH、离子强度,前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：抗原抗体比例合适,抗原抗体反应比例性示意图,比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系,(3)比例性,第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象,(4)阶段性,A.抗原、抗体反应物的自身因素环境因素,（三）影响抗原抗体反应的因素,抗原:理化性状、表位种类和数目抗体:来源、特异性、亲和性、效价,.,B.环境因素,电解质:生理盐水或缓冲液酸碱度:pH6pH9温度:1540，37最适,(四）免疫学检测技术的类型,按实际用途分为:e免疫组织化学技术(immunohistochemistrytechniqu,IHCT)免疫测定(immunoassay),标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析,.,按测定反应体系的物理状态分为:均相免疫测定(homogenousimmunoassay）非均相免疫测定(heterogenousimmunoassay),按检测现象分为:放射免疫技术荧光免疫技术酶免疫技术化学发光免疫技术金免疫技术,.,1什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2.抗原抗体反应有哪些特点？3.如何理解抗原抗体反应的特异性？4什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？5抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？6抗原抗体反应有哪些影响因素？7基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？,思考题,.,小结,抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性。,.,影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。,.,排斥,抗体,Y,颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。,第二节凝集反应,.,分类,直接凝集反应-颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,细胞性抗原：细菌和红细胞,.,凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原。,凝集素(agglutinin)：凝集参与反应的抗体,.,颗粒性抗原,凝集素,直接凝集反应,.,1、玻片凝集反应:,已知抗原,+,未知抗体,凝集团块混浊,?,2、试管凝集反应：,定量抗原,+,系列稀释抗体,不同程度的凝集反应,YESNO,确定抗体的滴度,.,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,试管凝集试验,.,.,.,间接凝集反应(indirectagglutination):将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象.,.,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,间接凝集试验示意图,.,载体种类及其处理方法,红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒,.,1.正向间接凝集试验2.反向间接凝集试验3.间接凝集抑制试验,间接凝集反应的类型,.,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集试验,.,反向间接凝集试验,用抗体致敏载体-检测抗原,.,间接凝集抑制试验,用抗原致敏载体-检测抗原,.,间接血凝试验,.,间接乳胶凝集试验,概念,金黄色葡萄球菌协同凝集试验,.,间接凝集反应的应用,抗原的检测反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。,.,1.孕妇尿中绒毛末促性腺激素含量明显增高2.糖脂是结核杆菌