《病原微生物检验》教学大纲.doc

病原微生物检验教学大纲供卫生检验专业用一、课程基本信息课程名称：病原微生物检验（Experimental Pathogenic Biology Technique）课 程 号：课程属性：专业课先修课程：病毒学检验、细菌学检验学 分：3学 时：72 理论学时：0 实验（实践）学时：72二、教学目的要求病原微生物检验是病毒学检验和细菌学检验的配套实验课程，是卫生检验重要的专业课程之一，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。实验内容包括病毒学检验和细菌学检验的基本技能、分离培养及鉴定技术、血清学技术，以及分子生物学技术。通过实际操作训练，使学生加深对细菌学检验和病毒学检验基本理论、基本技能、检验方法、研究手段的理解和掌握，加深对常用分子生物学技术的认识和把握。在教学过程中，注重对学生实验操作规范性培养、实验现象和结果分析能力的培养，以及实验报告撰写能力的培养，全面提高学生分析和解决实际问题能力。三、实验方式及基本要求实验方式：整个实验课程要学生自己完成，每2个学生为一个实验单位，共同完成所有的实验内容。基本要求：熟悉实验步骤，掌握实验关键点和影响因素，能正确的判断和分析实验结果。四、实验报告实验报告包括：实验目的，实验原理，主要试剂和仪器，实验步骤，结果，结论，讨论。五、实验项目与内容提要实验1 动物接种技术及动物标本采集1、动物接种：小鼠的腹腔接种、尾静脉接种、脑内接种以及灌胃2、动物标本采集：胸腺、肝脏、脾脏、摘眼球取血要求：熟悉动物实验常用的接种途径和标本的采集实验2 鸡胚培养、原代细胞培养1、原代细胞培养：选用10日龄的鸡胚，进行鸡皮成纤维细胞的培养。2、病毒的鸡胚培养：选用910日龄的鸡胚，采用尿囊腔途径接种病毒。要求：熟悉原代细胞培养及尿囊腔接种病毒的操作要点及影响因素。实验3 传代细胞培养 选择生长良好的MDCK细胞，通过消化、分散、分装后进行培养。要求：熟悉传代细胞培养的操作、要点。实验4 流感病毒分离培养在长成单层的MDCK细胞上，接种病毒后进行培养，显微镜观察细胞形态的变化，及细胞病变的类型。要求：熟悉病毒的细胞培养的操作、要点，以及判断病毒感染细胞的程度。实验5 血凝试验及血凝抑制试验本实验包括一个单位血凝素的滴定、一个单位血凝素的确定和正式试验。要求：掌握血凝效价、血凝抑制效价的判断，熟悉实验的影响因素和操作要点。实验6 RT-PCR检测流感病毒利用RT-PCR技术检测致病微生物致病基因，通过凝胶电泳观察结果。要求：熟悉RT-PCR技术的操作要点、影响因素及凝胶电泳的结果观察。实验7 病毒学检验讨论利用所学病毒学检验知识对病毒性感染的案例进行分组讨论。要求：了解突发公共卫生事件的相关知识，熟悉判断疾病的病原的要点。实验8 抗菌药物最小抑菌浓度测定完成某抗菌药物最小抑菌浓度的测定。要求：熟悉抗菌药物最小抑菌浓度测定的操作步骤、试验结果的判断以及试验的注意事项。实验9 消毒剂的定量杀菌试验完成某消毒剂定量杀菌的最小杀菌浓度和最小杀菌时间的测定。要求：熟悉消毒剂定量杀菌试验操作技术及结果计算方法。实验10 细菌质粒的提取与鉴定从细菌中提取质粒，并用琼脂糖凝胶电泳检测提取出来的质粒，在凝胶成像分析仪中成像，分析。要求：熟悉质粒的概念，掌握碱裂解法提取质粒的原理、步骤和注意事项，熟悉琼脂糖凝胶电泳，学会使用凝胶成像分析仪。实验11 病原性球菌分离鉴定以金黄色葡萄球菌或溶血性链球菌为病原性球菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定全过程。要求：熟悉病原性球菌分离鉴定的操作步骤，以及结果判断。实验12 致病性肠道杆菌分离鉴定以沙门菌或志贺菌为致病性肠道杆菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定和血清学分型。要求：熟悉致病性肠道细菌分离鉴定的操作步骤，玻片凝集试验的基本要领，以及结果判断。实验13 霍乱弧菌快速检验以水弧菌代替霍乱弧菌，完成细菌快速检验，包括：动力观察、制动试验、染色镜检等。要求：熟悉霍乱弧菌快速检验的目的和操作步骤。实验14 肠产毒素性大肠杆菌的分离鉴定从模拟污染样品开始，完成肠产毒素性大肠杆菌的增菌、分离、生化鉴定和毒素检测。要求：熟悉肠产毒素性大肠杆菌的菌落特征、生化特性和毒素检测，掌握判断依据。附：学时分配实验项目学时数动物接种技术与动物标本采集4鸡胚培养、原代细胞培养6传代细胞培养4流感病毒分离培养6血凝试验及血凝抑制试验4RT-PCR检测流感病毒6病毒学检验讨论4抗菌药物最小抑菌浓度的测定4 消毒剂的定量杀菌试验4细菌质粒的提取与鉴定4病原性球菌分离鉴定6 致病性肠道杆菌的分离鉴定8 霍乱弧菌快速检验4 肠产毒素性大肠杆菌的分离鉴定8总计72六、教材1. 李洪源主编：病毒学检验，人民卫生出版社，2006。2. 张朝武主编：细菌学检验，人民卫生出版社，2006。七、参考书目1. 张朝武主编：现代卫生检验，第一版，人民卫生出版社，2005。2. 余倩、许欣主编：卫生微生物检验学细菌学分册，四川科技出版社，2003。3. 王秀茹主编：预防医学微生物学及检验技术，人民卫生出版社，2002。八