液相色谱定量方法指导原则

液相色谱的定性定量方法，1色谱峰的基本概念(1)，连接峰底(CD):峰的起点和终点之间的直线峰高(h):峰的最大值到峰底的距离峰宽(KL ) 在：峰两侧的拐点处切线和峰底相交的两点之间的距离峰宽度(w1/2 )通过：峰高度的中点而与平行于峰底的直线峰的两侧相交的两点之间的距离峰面积(A)A)A)A):峰和峰底之间的面积为响应值拖尾峰3330 基线变动基线漂移量(Baselinedrift )由于仅从移动相位产生的响应信号的曲线基线噪声(N):的各种因素而引起，所述移动相位比前端缓和的非对称峰值前伸峰值3360的前端缓和，也称为非对称峰值基线3360 :基线的时间方向的缓慢变化，1色谱的峰值相关的基本概念(2)、以及通过2次测定和计算得到的色谱的参数(1)、死区时间(t0)成分的保持时间，即移动相(溶剂)不保持通过列的时间。 死体积(deadvolume，V0)从采样器的注入口到检测器的流池的固定相未占用的空间。 V0=Ft0(F为流速)保持时间(retentiontime，tr ) :从样本开始到出现列后的成分的浓度极大值为止的时间。 保持体积(retentionvolume，VR)从样品开始到柱后出现浓度极大值为止溶剂流出的体积也称为溶出体积。 VR=FtR。 调整保留时间(adjustedretentiontime，tR)保留时间减去死亡时间。 如果实验条件(温度，固定相等)是恒定的，那么tR (或tR )能够定性地用，因为tR仅取决于分量的性质。 tR=tR-t0调整保留体积(adjustedretentionvolume，VR)减去死亡体积后的保留体积VR=VR-V0或VR=FtR，2通过测量和计算得到的色谱参数(2)，柱的性能：柱在分离过程中主要由动力学参数决定的分离通常用理论板数或有效板数表示。 理论板数：利用调整保留时间tr 计算理论板数，得到的值为有效理论板数(n有效或neff )有效板数：2测定和计算得到的色谱参数(3)，分离度：相邻色谱峰的分离程度为2个成分保留值之差.分离度图表、应答值：成分通过检测器系统生成的信号值。 相对应答值：单位量物质与单位量参照物质的应答值之比。 另外，对于2次测定和计算得到的色谱参数(4)、校正因子(f ) :相对于响应值的倒数，峰面积的积与物质的量成比例。 定量极限(LOQ ) :样品中被测物可定量的最低量，其测定结果应具有一定的精度和精度。 定量限制表明分析方法是否具备敏锐的定量检测能力。 2通过测定和计算得到的色谱参数(5)、检出限(LOD ) :指样品中被测定物能够检测的最低量，是鉴别试验的灵敏度指标。 反应的灵敏度越低。三相色谱定性分析、1、与已知物直接对照的2、已知物的峰值增加3、二极管阵列检测器的三维图像定性4、与其他设备的并用定性、4相色谱定量的依据、在一定的操作条件下，检测器的响应信号(色谱峰值的峰值面积或峰值高度)由检测器检测即，mi=fiAi或mi=fihi，式中： mi成分的量fi-比例常数是色谱定量的依据。5峰面积a的测定方法(1)、(1)峰高h乘半峰宽w1/2法将色谱峰视为等腰三角形，得到的面积为实际面积的0.94倍，因此实际面积为(适合对称峰) A=1.065hw1/2(相对计算中可省略前系数) (2) 峰均方峰宽法非对称峰不能上述近似，可以在峰高0.15和0.85测定峰宽取其平均值计算： A=h(w0.15 w0.85)/2，5峰面积a的测定方法(二)、(3)峰高乘保持时间法中， 半峰宽窄峰和半峰宽以上重叠的峰可以用下式计算： A=1.065hbtR (相对计算中可以省略1.065和常数b ) (4)剪纸称量法中对于不对称或分离不完全的峰，可以切除峰，以质量取决于其面积，使用量很少。(5)自动积分法通过连接记录仪和自动积分器，可以直接正确且迅速地测量峰值面积。 (6)取代峰面积定量法，在各种实验条件不严格变化的情况下，在一定的样本范围内色谱峰的半峰宽不变化，可以定量峰高来代替峰面积，特别是对于狭窄的峰，比面积定量法更准确。 5峰面积a的测定方法(三)、6定量修正因子(一)、检测器对不同物质的响应值不同，相同质量的不同物质通过检测器时产生的峰面积不同，因此无法直接应用峰面积来计算成分的含量。 因此，导入“定量的修正系数”修正峰面积，能够更正确地反映成分的含量。 mi=fiAi，即fi=mi/Ai，6定量校正因子(2)，fi被称为绝对校正因子，在定量分析中经常使用的是相对校正因子fi，在成分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比： mi，ms是质量单位的情况下，fw是相对质量校正因子mi， ms为摩尔单位时fM应注意相对摩尔校正因子：应用中一般省略“相对”二字，6质量校正因子的测定方法(3)准确量测定成分的纯物质和标准物质的纯物质并混合后，取一定量(检测器的线性范围内)在实验条件下注入色谱仪，在出现峰值后分别测定两者的峰面积.7常用的几种定量方法(1)、(1)归纳法在试样中的全部成分达到峰值(即反映在色谱图中)的情况下，从校正后的峰面积中全部色谱峰的总面积所占的点数，可以求出该成分的质量点数。7常用的一些定量测定方法(二)、归纳法的特殊情况是试样中各成分的相对校正因子接近(例如同系物中沸点接近的成分)，上式可以简化为：xi%=100，测定参数为峰值高时，也可以用峰值高归纳法计算成分含量。 (运用峰高校的正因子，将峰高代峰面积代入前页的式子即可)，归一法具有简便正确的特征，这一点只有在所有成分都出峰时才能使用。 7常用的几种定量测定方法(3)、(2)内标法的使用条件：试样中的各成分均不能出峰，各成分的含量极端，仅测定其中的一部分成分，操作步骤：加入准确地取一定量的试样的一定量的选定基准物(内标物)并混合后，进行色谱分析，得到内标物和试样的质量和质量.7常用的一些定量测量方法(四)、内标法测量对象成分的含量计算公式如下(可从前面推测) :(各符号的含义相同)以内标法中的常内标准物为基准，fs=1，可使用峰值高度代替峰值面积，做法相同。内标法的注意事项，内标物必须是试样中不存在的纯物质而添加的内标物质量，试样中接近测定对象成分的内标物的色谱峰应处于测定的成分色谱峰附近，或几个测定的成分色谱峰之间。 7常用的几种定量测定方法(五)、内标法的优缺点、优点：即使定量准确，样品中含有不出峰的成分，也不影响测定。 缺点：每次测定都要准确测定样品和内标物质的质量，不适于快速分析。7 .常用的几种定量测量方法(6)，内标曲线法，用Ci%来标绘Ai/As，得到通过原点的直线内标标准曲线。 常数，上式可以是：xi%=、内标法测定成分的含量的计算式，固定试样测量量，加入内标物也一定的话：7常用的几种定量测定方法(7)、内标曲线的绘图、测定成分的纯物质变成不同浓度的标准溶液(系列)。 b .采集一定量的标准溶液和内标物，混合后进行样品分析，用测量Ai和As的Ai/As绘制标准溶液浓度，得到通过原点的直线(内标标准曲线)。 7常用的几种定量方法(八)、样品测定和成分定量、取与制作标准曲线相同量的样品和内标物，测定其峰面积比，可由标准曲线检测成分的含量。 内标标准曲线法应用于生产过程的控制分析，无需计算校正因子，液体样品也能测量体积，具有简便快捷的特点。 7常用的几种定量测定方法(9)，(3)外标曲线法，a .取被测定成分的纯物质，制备一系列不同浓度的标准溶液，b .将上述溶液各注入一定体积的柱中，得到c .色谱图，测定峰面积或峰高，d .峰面积(或峰高)对浓度的关系曲线 另外，检量线的制作、7常用的几种定量测定方法(十)、外标法样品测定(一)、在相同操作条件下注入相同量(一般为体积)的测定对象样品，从列测定峰面积或峰高，可在检量线上检测测定对象成分的浓度。 外标法也用于生产过程的控制分析，操作简便，计算简单，但分析结果的准确性取决于操作条件的稳定性和样本的重现性。 7常用的一些定量测量方法(11 )、外标法样本测量(2)采用单点校准法，其中，当所测量成分的浓度不太变化时，不需要产生标准曲线。 即，调制接近被测定成分的含量的标准试样，分别采取相同量的体积，测定标准试样和测定对象的峰面积，测定成分含量：Ci%=Ai/AsCs%、7常用的几种定量测定方法(12 )、(4)标准添加法(1)， 标准添加法实质上是将测定对象成分的纯物质添加到测定对象试样中，分别测定添加前后的峰面积，计算测定对象成分在试样中的含量的特殊内标法。 a .可单点添加，色谱条件完全相同时，加入以下公式计算： 7中常用的几种定量测定方法(十三)、标准添加法(二)、b .一系列浓度，计算标准曲线外推法测定的测定物在样品中的含量。 优点：不需要其他内标物，不需要正确放入样品的操作加上简单的预处理过程，可以补偿被检成分在处理过程中的损失。 缺点：色谱条件不完全一致的话，会导致分析误差。 7 .一些常用的定量测量方法(14 )、7 .一些常用的定量测量方法(15 )、标准添加法(3)将标准添加法标准曲线绘制一系列已知的测量对象分别添加到一些均等部分的样品中，浓度为(cx 0)、(cx c1)、(cx c2)、(cx c3) 调制与样品具有相同基质的标准系列溶液(正、尖峰)请用设备分别测量上述系列溶液的响应值S0、S1、S2、S3、s4用响应信号s绘制浓度c，使直线外推与浓度轴在一点(下图)交叉，求出样品中的被测量物浓度cx。优点：矩阵相近或矩阵干扰相同的缺点：麻烦，适用于少量样本分析。、影响8定量精度的因素1、样品的制备-可汽化或紫外吸收或带荧光、转化率高-溶剂-样品回