细菌基因缺失株的构建方法ppt课件_第1页
细菌基因缺失株的构建方法ppt课件_第2页
细菌基因缺失株的构建方法ppt课件_第3页
细菌基因缺失株的构建方法ppt课件_第4页
细菌基因缺失株的构建方法ppt课件_第5页
已阅读5页，还剩13页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

.,学生：王薇指导教师：李槿年教授,细菌基因缺失株的构建方法,.,汇报提纲,基本概念,1.,.,一、基本概念,基因的同源重组（homologousrecombination），又叫基因打靶（genetargeting），是指外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组，并整合在预定的位置上，从而改变了细胞某些遗传特性的方法，重组的目的是为了敲除某个基因。,.,二、Red重组系统介绍,.,1、背景,二、Red重组系统介绍,敲除细菌基因的传统方法是利用RecA重组系统。RecA重组系统是大肠杆菌内源性的同源重组体系，它由RecA蛋白和RecBCD蛋白组成。这种方法需要较长的靶基因同源序列，还需构建具有靶位点的质粒，重组效率较低。近来由Murphy和Stewart等人用噬菌体的Red重组系统在大肠杆菌中建立的快速敲除原核基因的方法简化了实验操作，使实验周期大大缩短。这种重组技术是一项可在染色体水平上进行遗传操作的新技术，只需较短的同源序列，而不需要特定的限制性酶切位点，即可在生物体内完成重组过程，省去了体外DNA酶切、连接等步骤。,.,2、组成,二、Red重组系统介绍,质粒pKD46：为同源重组的辅助质粒，含温度敏感型复制子，高于37该质粒会丢失，阿拉伯糖诱导后能够表达Gam、Beta和Exo3个噬菌体重组酶。,.,2、组成,二、Red重组系统介绍,质粒pKD3：为PCR扩增提供氯霉素抗性基因的模板，氯霉素抗性基因两侧有FRT位点(FLP重组酶识别位点)，为重组转化子提供筛选标志。,.,2、组成,二、Red重组系统介绍,质粒pCP20：是具有氨苄青霉素(Amp)抗性和氯霉素(Cm)抗性的质粒，含有温度敏感型复制子，能够表达FLP重组酶，42诱导下FLP重组酶得到表达，质粒也逐渐丢失，该质粒用于消除FRT位点间的cat基因。,.,3、原理,二、Red重组系统介绍,HX4,HX4,HX4,HX4,HX4,HX4,.,4、利弊,二、Red重组系统介绍,以Red重组系统为基础的基因敲除是最近研究较热的技术方法，对研究微生物基因的功能具有重要的促进作用。它与传统的基因敲除方法相比，重组效率明显提高，而且此方法利用线性打靶DNA，不需构建打靶质粒，因此实验周期大大缩短。但到目前为止，此系统还主要应用于大肠杆菌的基因整合和敲除，在其它菌株获得成功的实例较少，具体原因尚不明确。,.,三、重组自杀性质粒方法简介,.,三、自杀质粒方法介绍,1、简介,.,三、重组自杀性质粒方法简介,2、原理,.,三、重组自杀性质粒方法简介,2、原理,.,2、原理,三、重组自杀性质粒方法简介,.,OmpU,OmpU,OmpU,p
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论