核酸适体技术PPT课件

研究核酸与蛋白质相互作用的方法核酸适配器是一种与指数富集配体系统进化(SELEX)选择的蛋白质或其他小分子物质特异性结合的寡核苷酸片段，对可结合配体具有严格的识别能力和高亲和力。核酸适者广泛应用于生物传感器、新药开发、纳米技术等领域。3，3，SELEX技术，SELEX是指数富集配体系统演化的缩写，选择过程包括三个过程，与达尔文进化理论相同，4，利用现有的分子生物学技术，合成了1014 1015个单链、核苷酸序列的随机库，序列长度一般在25 35个核苷酸之间在达尔文的进化论中起自发突变作用。1“自发突变”，5，单链随机上调核苷酸序列容易形成与蛋白质、核酸等配体特异性共享相结合的次级结构。基于这种黏附性特异性结合，氨基酸、多肽、甚至金属离子等配体可以与达尔文进化论中像自然选择一样作用的随机库交互作用。“自然选择”，6、选择性分离核酸赤字，通过PCR或RT-PCR等技术生成初级文物。这个放大在达尔文的进化论中产生了很多增殖的效果。3“大量繁殖”，7、8、9，aptamer与配体的相互作用，核酸aptamer的富林包环经常是外来目标序列的结合部位，通常是嘌呤排列(包括基本不匹配、基本三量和基本平台)。10，G-A不匹配或G-G-g不对齐在大多数核酸适配器中观察到。这种不一致在环和正常双螺旋碱基对之间的积累中产生了转折点，通常导致环闭合。11，核酸与配体结合时，通常是发卡，茎环，G-tetramer，假节，12，与同一个配体结合的核酸适配体往往可以分为多个子集，同一个表位置的核酸适配体的重要功能领域的域(motif)是相同的。核酸适配器和配体的相互作用力包括以下种类的：“假基对”的积累、氢键作用、静电作用、形状匹配等。13，核酸适配器的应用进展，生物传感器生物传感器在快速测试中发挥着重要作用，将分子识别与信号传递器相结合。使用抗体的免疫传感器有了很大提高，但是传感器表面硬化的抗体容易衰减，因此失败，使用适应系统的aptamer传感器具有以下优点：(1)硬化核酸的重复变性和复性在使用热、盐浓度、络合剂时也可以反复变性；(2)适宜性以一定厚度容易连接到固相表面。(3)可以使用发光素、酶、生物素、亲和素等的光性体发生信号物。14，药物设计和临床治疗倾向于抑制核酸适体和蛋白质特异性结合后蛋白质的功能，缺乏免疫原性，体内渗透力强，是有希望直接干扰疾病发生过程的药物分子。到目前为止，选定的HIV、HCV、各种肿瘤和肿瘤相关因素、凝血酶、弹性蛋白、茶碱、氨基糖抗生素等在治疗过程中表现出良好的应用前景。15，自适应技术与纳米技术相结合，是长度为15 30 mer，在核苷酸探针两端各互补5 8 mer序列的茎区。在自由状态下，茎干区互补序列的结合导致探针分子形成发夹形状的结构。探针的5-端和3-端分别与荧光素分子和淬火代理分子相结合。在自由状态下，发针结构的两端靠近，使荧光分子接近急冷分子(约7-10nm)。16，此时发生荧光共振能量转移，荧光分子发出的荧光被猝灭的分子吸收，以热的形式发散，荧光几乎完全被急流吞没。当分子信号与充分补充序列的目标分子结合形成双链杂交体时，信标茎互补区域打开，荧光分子和急冷分子距离增加。杂交后信标分子的荧光恢复了近100%。检测到的荧光强度与溶液的靶量成正比。17，核酸aptamerbeacon具有高特异性和高亲和力的特性，在纳米技术领域核酸适配立即引起了科学家的注意，出现了应用名为aptamerbeacon的Aptamerbeacon的分子信