血液标本采集和抗凝剂选择

第一章第一节血液标本采集和抗凝剂选择,一、血液标本种类：全血=血细胞+血浆，用于：临床血液学分析血浆=全血-血细胞，用于：临床生化凝血因子测定血清=血自然凝固后析出的液体用于：临床生化临床免疫学分析,二、采血方法,静脉采血法动脉采血法皮肤采血法,采血方法,（一）静脉采血法,1、适用：适用于绝大多数临床检验2、部位：体表的浅静脉均可,肘部静脉最常用手背静脉内踝静脉股静脉颈外静脉,静脉采血部位,3、器材：,注射器：不同型号（510ml）容器：硅化处理玻璃试管塑料试管压脉带消毒碘酒棉球,4、优点：可满足绝大部分检验需要,5、注意：注射器和容器必须干燥抽血不宜过快，以免产生气泡或溶血要拔掉针头再徐徐注入容器若遇病人晕厥时勿惊慌，可采取：平卧休息嗅芳香氨酊指按“人中”“合谷”等穴位,措施,（二）皮肤采血法（毛细血管采血法）,1、适用：需血微量的检查,2、部位：,手指耳垂指足跟,WHO推荐：左手无名指指端内侧,3、器材：采血针：一次性采血针三棱针专用采血针激光采血仪75%酒精棉球和消毒干棉球微量吸管(20微升),激光采血仪,4、优缺点：优点：方便，快捷,末梢循环受多种因素影响标本混有组织液采血量受限疼痛明显,缺点,5、注意：穿刺部位消毒酒精干后方可穿刺烧伤病人应选择皮肤完整处采血一人一针,（三）动脉采血法1、适用：用于血气分析2、部位：股动脉等3、器材：专用采血器4、注意：采血后立即封闭针头，避免与空气接触，及时送检，最好在30分钟内检测,（四）真空采血法（负压采血法）1、适用：适用绝大多数临床检验尤其适宜于病房和野外流动采血2、部位：全身浅静脉,真空采血装置套筒式头皮静脉式真空采血管：压脉带消毒碘酒棉球,3、器材,真空采血装置,套筒式,头皮静脉式,真空采血管,4、优点：封闭：减少医务人员感染减少容器间转移减少交叉污染保护环境减少溶血保证标本质量,【方法学评价】皮肤采血法开放式静脉采血法真空采血法,【质量控制】要注意影响标本质量的因素,1、患者情况,年龄、性别、种族活动情况及精神状态采血时间及体位服药或吸烟,(qualitycontrol),操作规范勿挤压皮肤压脉带使用时间尽量短,2、采血,压脉带使用时间应少于1分钟（建议在针头穿刺进入血管后即可放松压脉带）,AlbCaALPASTCholFe,如压脉带使用3分钟：,浓度可分别升高5-10,BUN浓度下降4,压脉带使用时间长,使血液淤滞，局部出现缺氧：无氧酵解-乳酸测定值-血pH值Ca、Mg从结合蛋白中游离-游离Ca、Mg同时导致与蛋白结合的药物游离-游离药物浓度导致细胞内钾外移-假性血清钾,3、避免溶血：,血液中细胞内外成分有很大差异，很多生化成分在血细胞中的浓度比在血浆中高许多：,例如血细胞中乳酸脱氢酶、钾和镁的浓度分别比血浆中高160倍、22倍和3倍，溶血后细胞内的物质向细胞外转移，使测定结果偏高,类似的生化项目还有AST、ALT等等。,血细胞释放的某些化学物质对结果也产生影响：,例如溶血释放出来的腺苷酸激酶可以影响CK总活力的测定。同时还能干扰CK同工酶测定。,受化学物质干扰的测定还有：TBIL、DBIL、TG等。,肉眼可见溶血，是由于红细胞被破坏，血浆中的血红蛋白浓度已达20mg/dl，称为显性溶血血小板和白细胞破坏时没有血红蛋白释放，称为非显性溶血血小板破坏可使血清钾、镁、酸性磷酸酶升高粒细胞破坏可释放多种酶当肉眼未见溶血，而上述指标出现异常增高时，应警惕非显性溶血的发生。,造成溶血的原因采血后将血从注射器注入试管，血细胞受外力而溶血采血时定位或进针不准，针尖在静脉中探来探去，造成血肿而溶血混匀含添加剂的试管时用力过猛或运输时动作过大从已有血肿的静脉采血，血样可能含有已溶血的细胞；,用压脉带时间过长，引起血管内溶血血液和抗凝剂比例失调(血量不足)，由于渗透压的改变发生溶血静脉穿刺处用酒精消毒，酒精未干即开始采血注射器或盛血容器带水或容器污染注射器和针头连接不紧，采血时空气进入，产生泡沫，发生溶血。,4.输液时采血部位的选择,若一侧手臂静脉输液时应从对侧手臂取血，以免血液被稀释或输入的液体对测定结果的影响。若二侧手臂同时进行静脉输液，应选择输液穿刺点的远心端取血，且避免采血部位距输液处太近。,5、血标本处理：,及时送检尽快检验合适的条件保存,6、实验结果分析：,影响因素结合临床及时与临床沟通,三、抗凝剂选择,常用的抗凝剂有,EDTA草酸盐肝素枸橼酸盐,抗凝用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，阻止血液凝固。抗凝剂能够阻止血液凝固的物质。,1）抗凝原理：与血中钙离子结合成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。,1、乙二胺四乙酸盐（EDTA-Na2,EDTA-K2）,2）应用：适用：多项血液学检查，尤其是血小板计数特别适用于全血细胞分析血细胞比容测定不适用：凝血象检查和血小板功能检查因为：EDTA影响血小板聚集用量：1.5-2.2mg/ml血EDTA-K2，EDTA-K3应用注意：EDTA-K3可使RBC皱缩，ICSH建议用EDTA-K2作血细胞计数抗凝剂,2、草酸盐1）抗凝原理：溶解后解离的草酸根与血中钙离子结合成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血作用。2）应用：溶解度好、价廉适用：一般血液学检查不适用：凝血象检查因为：对凝血V因子保护差形成的草酸盐沉淀影响自动凝血仪用量：0.1mol/L草酸钠，比例9:1,3、肝素1）抗凝原理：抗凝机制复杂与T-结合抑制凝血活酶的形成抑制血小板聚集与释放反应灭活丝氨酸蛋白酶,抑制凝血酶形成2）应用：适用：适用于绝大多数检查（不影响细胞体积,不易溶血）尤其是细胞培养和红细胞渗透脆性实验不适用：不适合血液学一般检查因为：易引起白细胞聚集血涂片罗氏染色有蓝色背景用量：152.5IU/ml血,4、枸橼酸盐1）抗凝原理：与钙离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。2）应用：适用：血沉测定凝血功能测定输血保养液不适用：用量：0.105M枸橼酸钠，比例9:1,含有K+、Na+的抗凝剂不能用于测定K+、Na+的标本；EDTA、氟化物、草酸盐等不能用于测定Ca2+的标本，因为Ca2+可与它们形成不溶性物质。,5、使用抗凝剂应注意：,草酸盐、氟化物不能用于测定酶和用酶法测定的标本。因为它们有激活或抑制某些酶活性的作用：如草酸盐可抑制淀粉酶、ACP、LDH活性氟化物则有激活尿素酶、淀粉酶的作用因此正确选择抗凝剂并避免抗凝剂污染，才能得到准确的检验结果。,严格掌握抗凝剂与血液的比例,血液和抗凝剂的比例过高或过低都会影响标本的质量。,血液比例过高时(采血过量)，由于抗凝剂相对不足。血浆中出现微凝血块的可能性增加，阻塞检验仪器，影响检验指标。血液比例过低(采血不足)，抗凝剂相对过剩对许多检验指标会造成严重影响。,对凝血实验来说，当血液与0.105M枸橼酸钠的比例由9:1降至7:1时，APTT（活化部分凝血活酶时间）试验的结果就会有显著升高，降至4.5:1时，PT（凝血酶原时间）试验结果就会有显著改变。,对血常规实验来说，EDTA的最佳浓度是1.5mg/ml血，当EDTA浓度达2.5mg/ml血时，中性粒细胞会肿胀、分叶消失。血小板肿胀、崩解，使常规检验得出错误结果。,血液涂片制备和细胞染色,一、血液涂片制备二、血液细胞染色,一、血液涂片制备厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，血膜边缘要整齐，并留有一定的空隙。,引起血涂片分布不均的主要原因：推片边缘不整齐，用力不均匀，载片不清洁。,二、血液细胞染色(一)瑞氏染色法(Wrightsstain)1瑞氏染料（复合染料）酸性染料伊红(E-)碱性染料亚甲蓝(M+，又名美蓝)美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)，甲醇的作用：溶解美蓝和伊红，解离为M+和E-；脱水作用，固定细胞形态，增强染色效果。,(一)瑞氏染色法2染色原理是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，物理的吸附作用，化学的亲和作用，嗜酸性颗粒碱性与酸性染料粉红色；细胞核蛋白酸性与碱性染料紫蓝色或蓝色；中性颗粒等电状态与伊红和美蓝染淡紫红色。,(一)瑞氏染色法3pH值的影响:细胞各种成分均属蛋白质（两性电解质），,3pH值的影响:染色所用玻片必须清洁，无酸碱污染。配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性。新鲜配制的染料偏碱，须在室温贮存一定时间，贮存时间愈久，染色效果愈好。DeamGilliland等采用吸光度比值作为瑞氏染液的质量规格。,(二)吉姆萨染色法吉姆萨染液由天青、伊红组成。对细胞核和寄生虫(如疟原虫等)着色较好胞质和中性颗粒则染色较差。复合染色法,方法学评价1血涂片制备,手工推片法,抗凝的血液病标本离心后取其灰白层涂片,采用厚血涂片法(如疟原虫、微丝蚴检查等)。,旋转器涂片法,方法学评价2血液细胞染色瑞氏染色法瑞氏吉姆萨复合染色法,质量控制1血涂片制备血膜由厚到薄逐渐过度；血膜的体尾交界部位，红细胞分布均匀，既不重叠