叶绿体色素含量的测定

叶绿体色素含量的测定-分光光度法中文摘要：本实验介绍了以菠萝叶为原料，以80%的丙酮提取叶绿体色素，并采用从特定波长到分光光度法测定的吸光度计算优水溶液中各色素浓度的公式。英语摘要：In this experiement，we used spinach leaves as raw material And used 80% of acetone to extract pigments from them，And apply spectro phottro实验原理：叶绿体色素利用80%丙酮提取，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收棒的波长分别为663nm、646nm和470nm。用分光光度法测定丙酮提取物中叶绿体色素的含量。实验目的：掌握用分光光度法测定和计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度的方法。实验设备和试剂：1，材料：菠菜叶2、仪器：分光光度计、秤、研磨机、漏斗、剪刀、容量瓶、烧瓶、滤纸、滴管等3、试剂：80%丙酮、石英砂和碳酸钙实验阶段：叶绿体色素的提取取0.5克新鲜菠菜叶晾干，去静脉，切碎，放入碗中。加入少量石英砂和CaCO3，加入80%丙酮，均匀研磨，加入80%丙酮，然后静置10分钟。用漏斗过滤残渣，用无色的丙酮反复冲洗洗涤池、残渣。容量瓶定到50毫升。吸光度测定取1厘米比色杯的光光炉，注入上述叶绿素萃取物，用80%丙酮注入其他比色杯作为空白对照组，在波长663，646，470nm处测定吸光度。3.计算结果叶绿素a，b的浓度和叶绿素的总浓度及类胡萝卜素浓度分别根据以下丙酮提取物的色素浓度计算公式计算。计算公式80%丙酮提取物中颜料浓度的计算Ca(叶绿素a)=12.2A663-2.81A646Cb(叶绿素b)=20.13A646-5.03A663CT(叶绿素)=Ca Cb=17.32A646 7.18A663Cx.c(胡萝卜素)=(1000A470-3.27Ca-104Cb)/229叶绿体色素含量=实验结果：波长吸光度平均值663纳米0.8190.8160.8170.817646纳米0.4140.4240.4210.420470纳米0.8280.8460.8470.840Ca(叶绿素a)=12 . 20 . 817-2 . 810 . 420=8.7872mg/lCb(叶绿素b)=20 . 130 . 420-5 . 030 . 817=4.3451mg/lCT(叶绿素)=Ca Cb=13.1323mg/LCx.c(胡萝卜素)=(10000.840-3 . 278 . 7872-1044.3451)/229=1.5693mg/lCa(叶绿素a)含量=8.7872mg/l 0.05 l 1/0.5g=0.8787=87.87mg/gCb(叶绿素b)含量=4.3451mg/l 0.05 l 1/0.5g=0.4345=43.45mg/gCx.c(胡萝卜素)含量=1.5693mg/l 0.05 l 1/0.5g=0.1569=15.69mg/g实验讨论：1.叶绿素a，b在蓝色区域也有吸收峰，用这个吸收峰波长能定量分析叶绿素吗？怎么了？定量分析的吸收峰要稳定，也要有强的吸收。此外，还必须考虑干涉问题。光合作用色素除了叶绿素外，还有胡萝卜素。胡萝卜素主要利用红光吸收蓝光，消除干扰。2.萃取叶绿素时，干材料必须使用80%丙酮，而新鲜材料为什么可以用无水丙酮萃取呢？植物缺水，植物的叶绿素含量就会降低。建材与新鲜材料相比水分含量少，无水丙酮，提取效果不如80%丙酮。叶绿素萃取除了丙酮外，还可以使用其他萃取试剂：石油醚-乙醇、醚-乙醇、醚。从菠萝叶中提取叶绿体色素时，用丙酮研磨提取叶绿素的效率比石油醚乙醇萃取的效率高，醚研磨提取叶绿素的效果明显低于丙酮，石油醚研磨产生的效果最低，因此最好的萃取剂是丙酮，其次是石油醚1乙醇。但是用混合溶剂提取的叶绿素的纯度高于用单溶剂提取的纯度，生产时可以根据实际需求合理选择。采用直接萃取法和氙法从菠萝叶片中提取叶绿素的方法是不同的。这种提取实验表明，丙酮、乙醇提取法提取叶绿素的效率高于丙酮、乙醇Arnon法，甲醇、醚提取法提取叶绿素的效果明显