病原学诊断与防治.ppt

第八章病原学诊断与防治,第一节细菌学诊断细菌学诊断检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断检测患者血清中特异性抗体,一、病原菌检测,标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确无误。,标本采集与送检原则,致病菌的检验程序,人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。,第二节血清学诊断,第二节病毒学诊断,一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）1早期（前驱期、急性期、发病前12天）2根据不同病毒感染，采集不同部位标本3病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保存，快速送检4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清学实验检查抗体（双分血清）,二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）,（一）病毒的分离方法动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。（3）传代细胞能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。,病毒在培养细胞中增殖的指标,细胞的变化（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）（2）形成细胞融合（多巨核细胞）（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所）红细胞吸附干扰现象细胞代谢改变（pH）,正常细胞,病变细胞,（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。,三、病毒感染的血清学诊断,用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）,四、病毒感染的快速诊断,(一)形态学电镜和免疫电镜直接观察病毒光镜大病毒和包涵体,（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）常用方法：免疫荧光技术（IF）固相放射免疫测定（SPRIT）酶免疫技术（EIA）等。,（三）检测病毒特异性IgM抗体,检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。,（四）检测病毒核酸,1核酸杂交斑点杂交（dothybridization）原位杂交（insitehybridization）DNA印迹杂交（Southernblot）RNA印迹杂交（northernblot）2核酸扩增聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCRDNA）连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）反转录PCR（ReversetranscrptasePCR，RTPCR(RNA)3基因芯片技术（genechip）,第三节真菌学诊断,死疫苗活疫苗类毒素新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗,第四节特异性预防与治疗,一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。,合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗,抗毒素抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂,二、人工被动免疫,人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。,两种人工免疫的比较,三、细菌感染的治疗,抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞膜功能影响细菌蛋白合成影响细菌核酸合成,四、病毒感染的治疗,药物治疗核苷类药物抑制病毒基因复制抑制病毒基因转录蛋白酶抑制剂天然药物（中草药）其他药物（金刚烷胺