中国超级细菌研究概况-俞云松.ppt

中国超级细菌研究概况,感染科俞云松,超级细菌（Superbugs）PDR,Superbugs:aresuper-bacteriathatareresistanttoalmostallantibiotics。,MRSA、VRE、hVISA、VISA、VRSA碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（KPC、IMP、NDM-1)碳青霉烯耐药其它肠杆菌科细菌。,（是指对其有效治疗药物几乎均耐药的细菌）,主要超级细菌菌种：,CAMRSA定义,目前至少有八种定义，但最为公认的定义为：MRSA菌株分离自门诊病人或住院48h以内的病人。此外，这些患者必须从未有MRSA感染或定植，且之前一年未曾住院或住过护理院，未曾透析或手术，未曾长期置管或穿透皮肤的医疗器械。,ClinMicrobiolInfect2007;13:222235,CID2003:36(15January)Salgadoetal.,CA-MRSA,美国CDC标准,CA-MRSA感染者不具有医院获得性MRSA感染者的因素,常感染身体健康的青壮年美国弗吉尼亚州贝德福德一名17岁高中生就因感染MRSA而死亡，21所学校停课。,阿什顿邦兹，07年10月4日感到身体一侧疼痛，就到当地一家医院就诊。10月17日死亡。,.ZellerJL,etal.JAMApatientpage.MRSAinfectionsJAMA.2007Oct17;298(15):1826.,1104patients,351S.arueusSSTIs,14(4%)CA-MRSA,DiagnosticMicrobiologyandInfectiousDisease67(2010)18,Allchildren0to14yearsoldintheoutpatientsurgerydepartmentofBeijingChildrensHospitalfromAugust1,2008,toJuly30,2009.,中国社区获得MRSA流行情况,中国社区获得MRSA流行情况,ANSORPSurveillanceinAsia-2005-6,%,SongJH,HsuehPRetal.ANSORP2006data,协和医院40.3%北京医院78.3%,华山医院74.1%瑞金医院62.5%儿童医院22.9%儿科医院8.5%,浙医一院49.8%邵逸夫医院53.6%,广医一附院33.6%,武汉同济医院63.2%,重医一附院61.9%,院内MRSA在中国（2009CHINETDATA）,2009年卫生部监测网：北大药理所,金黄色葡萄球菌（18588株）对抗菌药物的敏感性(%)抗菌药物株数RIS苯唑西林头孢西丁58.541.5,金葡菌五个国际流行克隆(MLST),中国ST239(2-3-1-1-4-4-3),YudongLiu,HuiWangANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Feb.2009,p.512518,Vancomycin-insensitiveS.aureus,VISAHetero-VISAVRSA,hVISAandVISA,theprevalenceratesofhVISAandVISAamongMRSAisolatesfrombloodspecimens13.1%(26/199)hVISA0.5%(1/200)VISA,WenjiaSun,HuiWang.ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Sept.2009,p.36423649,VRSA,oneinIndia(Kolkata)oneinIran(Tehran),总共11株VRSA,VanA-TypeVancomycin-ResistantStaphylococcusaureusAAC,Nov.2009,p.45804587,中国2005-2010年VRE分离率（%）（CHINETDATA）,2009年卫生部监测网：北大药理所,粪肠球菌（7045株）对抗菌药物的敏感性（%）抗菌药物株数RIS万古霉素1.24.594.3替考拉宁0.70.798.6屎肠球菌（6290株）万古霉素4.22.393.5替考拉宁2.31.096.7,滤膜接合试验结果:18/21株VRE菌株接合转移成功质粒均携带VanA基因,VRE均含54Kb可接合质粒,图部分VRE接合菌菌株质粒电泳图V517:质粒大小Marker,1：ZY11304接合菌,2：ZY20305接合菌,3:ZY21237接合菌，4：ZY22303接合菌，5：ZY30041接合菌，6：ZY22198接合菌,VRE接合菌均含有一个54kb大小的质粒,2009年铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药率（%）(CHINET数据）,2009年卫生部监测网：北大药理所,铜绿假单胞菌（23525株）对抗菌药物的敏感性（%）RIS亚胺培南27.33.769.0美罗培南22.53.973.6,Atotalof645nonduplicatestrainsofclinicalP.aeruginosawereisolatedfromfromhospitalsin16differentregionsthroughoutChinafromJuly2006toJuly2007.,耐药机制产金属酶（碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中的金属酶分布，20062007，16个城市，28家医院）,24MBLs-positiveisolates（9PFGEtypes,A-I）lowprevalenceofMBL-producingstrainsamongIRPAisolatesfromhospitalsinmainlandChina,9（24/264）,StructuresofintegroncontainingVIM-2,Fig.IntegronstructuresofVIM-2inthisstudy,intI1aatI1aacA459-beVIM-259-beaadB59-be3-CS,intI1aatI1aacA459-beVIM-259-be3-CS,A(In72),B,YuYS,QuTT,ZhouJY,andetal.JClinMicrobiol.2006;44(11):4242-5.,theexpressionlevelofOprD2amongPA,19.33,46.47,34.2,Note：significantdecreaseintheexpressionofOprD2(2.5),2009年不动杆菌碳青霉烯类耐药率（%）(CHINET数据）,2009年卫生部监测网：北大药理所,鲍曼不动杆菌（19801株）对抗菌药物的敏感性（%）亚胺培南46.31.552.2美罗培南47.21.351.5,94-04年NPRS监测不动杆菌占革兰阴性菌比例,05-09年CHINET监测不动杆菌占革兰阴性菌比例,不动杆菌耐药性（CHINET数据）,%,year,1994-2004年鲍曼不动杆菌的敏感率(1874株),敏感率(%),年份,携带NDM-1基因,-NewDelhimetallo-lactamase1造成包括碳青霉烯类抗生素在内的几乎所有-内酰胺抗生素耐药,新的超级细菌（NewSuperbugs),-lactamases,碳青霉烯酶,ESBL,B类金属酶,A类酶丝氨酸,D类,GIM,VIM*,KHM,AmpC,超广谱-内酰胺酶,OXA,KPC,IMI,GES,NMC,SME,B类金属酶,A类酶丝氨酸,IMP,VIM,SPM,NDM-1,SIM,AIM,DIM,DiscoveryofacquiredMBLs,2009年卫生部监测网：北大药理所,肺炎克雷伯菌（22071株）对抗菌药物的敏感性(%)抗菌药物RIS亚胺培南1.80.397.9美罗培南1.70.398.0,2009年卫生部监测网：北大药理所,革兰阴性菌分布,2009年卫生部监测网：北大药理所,大肠埃希菌（33844株）对抗菌药物的敏感性(%)RIS亚胺培南0.60.299.2美罗培南0.30.099.7肺炎克雷伯菌（22071株）对抗菌药物的敏感性(%)RIS亚胺培南1.80.397.9美罗培南1.70.398.0,2009年卫生部监测网：北大药理所,阴沟肠杆菌（7310株）对抗菌药物的敏感性（%）RIS亚胺培南1.20.898.0美罗培南产气肠杆菌（1522株）对抗菌药物的敏感性（%）RIS亚胺培南2.30.996.8美罗培南1.20.298.6,2009年卫生部监测网：北大药理所,弗劳地枸橼酸杆菌（1375株）对抗菌药物敏感性（%）RIS亚胺培南5.11.393.6美罗培南2.50.497.1粘质沙雷菌（1752株）对抗菌药物的敏感性（%）RIS亚胺培南3.10.496.5美罗培南,2009年卫生部监测网：北大药理所,奇异变形菌（2994株）对抗菌药物敏感性（%）RIS亚胺培南2.11.396.6美罗培南0.70.299.1摩氏摩根菌（506株）对抗菌药物敏感性(%)RIS亚胺培南0.50.898.7美罗培南0.40.099.6,2009年14家医院克雷伯菌属的耐药率（%）,产ESBL株对内酰胺类、FQ、氨基糖苷类、磺胺类的耐药率比非产ESBL株高，对碳青霉烯类耐药率较2008年高,2009年14家医院大肠埃希菌的耐药率（%）,产ESBL株对内酰胺类和其他测试药的耐药率高于非产酶株对FQ、庆大霉素、哌拉西林的耐药率极高（60%）对碳青霉烯类、两种酶抑制剂复方的耐药率低,2009年14家医院奇异变形杆菌的耐药率（%）,产ESBL株对内酰胺类和其他测试药的耐药率高于非产酶株对FQ、庆大霉素、哌拉西林的耐药率极高（60%）对碳青霉烯类、两种酶抑制剂复方的耐药率低,2009年14家医院1684株肠杆菌属细菌耐药率（%）,对碳青霉烯类的耐药率低（5%）对阿米卡星、头孢吡肟、两种酶抑制剂复方的耐药率20%,2009年14家医院345株柠檬酸杆菌属细菌耐药率（%）,对碳青霉烯类的耐药率低对两种酶抑制剂复方、头孢吡肟、阿米卡星的耐药率20%,2009年14家医院146株摩根菌属细菌耐药率（%）,对碳青霉烯类、两种酶抑制剂复方、头孢吡肟、阿米卡星的耐药率5%第三代头孢菌素的耐药率为10%左右,2009年14家医院389株沙雷菌属细菌耐药率（%）,对碳青霉烯类的耐药率2%两种酶抑制剂复方的耐药率5%FQ、第3、4代头孢菌素、阿米卡星的耐药率20%,2005-2010年CHINET耐药监测肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药率（%）,细菌耐药机制,L.SilviaMunoz-Price358:1271-81.,对碳青霉烯类抗生素耐药机制,外膜孔蛋白减少或丢失主动泵出系统过度表达靶位的改变碳青霉烯酶的产生,外膜孔蛋白(22KD、22.5KD、29KD、33KD、35KD）,IPMresistanceislinkedtothelossofa29-kDaOMP,产气肠杆菌从亚胺培南敏感株变为耐药株,亚胺培南敏感及耐药的产气肠杆菌PFGE,TheMICsofdonorsandtransconjugantsoffourE.aerogenesstrains(mg/L),亚胺培南敏感及耐药的产气肠杆菌SDS-PAGE及Western-blot,SchematicdiagramofthelocationsoftheISelementswithrespecttotheompE36gene,IS903D-like,（发表于IJAA）,是指所有能明显水解亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗生素的内酰胺酶,碳青霉烯酶（Carbapenemases）,QueenanAM,BushK.ClinMicrobiolRev.2007Jul;20(3):440-58,Worldwideemergenceofmetallo-lactamasesintheEnterobacteriaceae,QueenanAM,BushK.ClinMicrobiolRev.2007Jul;20(3):440-58,EmergenceofclassAcarbapenemases,QueenanAM,BushK.ClinMicrobiolRev.2007Jul;20(3):440-58,Ecloacae8,EC600,E.coliC600E8，E.colipT103和E.coliDH5对抗菌药物的体外抗菌活性,改良三维试验,Enzyme,Enzyme+clavulanicacid,Enzyme+Cloxacillion,Enzyme+EDTA,Plasmidoftheenterobactercloacaeandtheconjugants,M1ABM2,54kb,15kb,质粒DNASouthern杂交,BC,B:阴沟肠杆菌C:接合菌,E.colipT103克隆菌质粒酶切电泳,15000bp10000bp7500bp5000bp2500bp1000bp,插入片断3100bp,YuYS,DuXXAntimicrobAgentsChemother.2006Apr;50(4):1610-1,肺炎克雷伯菌产生的碳青霉烯酶KPC（KlebsiellaPneumoniaeCarbapenemase）2001年在美国北卡罗来纳州首次报道属于A类2f组丝氨酸碳青霉烯酶-内酰胺酶水解包括碳青霉烯类抗生素在内的所有-内酰胺类抗生素,但对头孢他啶和头孢西丁相对较弱酶抑制剂如克拉维酸有部分抑制作用编码基因位于质粒上,已报道的KPC酶种类,产KPC菌株全球流行情况,1996年菌株，首先发现KPC,PDR肺炎克雷伯菌,改良三维试验,Enzyme,Enzyme+clavulanicacid,Enzyme+Cloxacillion,Enzyme+EDTA,内酰胺酶PCR,PCR筛选内酰胺酶耐药基因包括TEM-1、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9、OXA-48、VIM、OXA-10和KPC-1肺炎克雷伯菌质粒DNA为模板PCR阳性为TEM、SHV和KPC转化菌和克隆菌只有KPC阳性PCR产物测序分别为TEM-1、SHV-12和KPC-2,转化试验,抽提亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌质粒转化DH5，在含1g/ml的亚胺培南的MH平板上筛选成功筛选到亚胺培南耐药的转化菌（转化质粒约60kb）,染色体带,61kb,产KPC-2型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌质粒及Southern杂交,Acarbapenem-resistantisolateofKlebsiellapneumoniaeharboringclassAcarbapenemaseKPC-2wasidentifiedinZhejiang,China.Theencodinggenelocatedonanapproximately60kbplasmid.AnoveltransposableelementwasdetectedupstreamtheblaKPC-2,whichwasdifferentfromthegeneticenvironmentofblaKPC-2intheisolatesfromtheUSandColumbia.,WeiZQ,DuXX,YuYS.AntimicrobAgentsChemother.2007Feb;51(2):763-5.,菌株分布,肺炎克雷伯菌,沙门菌,粘质沙雷菌,产酸克雷伯菌,枸橼酸杆菌,变形肠杆菌,铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,阴沟肠杆菌,2001：美国2001-2008：美国，24州2005：法国2006：哥伦比亚，以色列(E.coli)2007：中国2008：希腊，古巴，苏格兰，英国,阿根廷2009：巴西，挪威，瑞典，爱尔兰，波兰，加拿大，意大利，芬兰，比利时2010:丹麦，德国，西班牙，匈牙利,鲍曼不动杆菌,产KPC菌株的快速传播,中国产KPC酶菌株,2007年初我们实验室报道了亚太地区首株产KPC-2酶肺炎克雷伯菌中国多个省市出现产KPC菌株：浙江、上海、江苏、安徽、武汉、郑州、哈尔滨浙江省11个地区中有9个地区发现产K