肺炎培训课件2010-03-08.ppt

肺炎支原体与衣原体,中国市场产品支持专线：8008106607med2med-,AniLabsystemsLtd.Oy-芬兰的诊断产品公司,主要致力于感染疾病等酶标产品的研发和销售，产品在全球销售。,肺炎支原体IgM/IgG/IgA,肺炎衣原体IgM/IgG/IgA,百日咳杆菌IgM/IgG/IgA,呼吸道疾病产品,肺炎（pneumonia）是指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，可由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。,肺炎概述,细菌、病毒、真菌，等支原体肺炎衣原体肺炎,病原微生物：,肺炎支原体MycoplasmaPneumoniae,从人体分离出16种支原体，5种对人有致病性，即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体及发酵支原体。肺炎支原体是呼吸道感染、肺炎的主要原因,1938年，Reimann报道了7名罹患肺炎的患者，临床表现不同于一般的细菌性肺炎，当时称为原发性非典型肺炎。,概述,1944年，Eaton等从一名患原发性非典型肺炎患者的痰液中，分离出一种病原体，可引起棉鼠和地鼠肺炎，因其能通过虑菌器而疑为病毒，称为Eaton因子。,1962年，Chanock和Hayflick应用无细胞人工培养基成功分离培养Eaton因子，并提议将其命名为肺炎支原体。,是一类目前所知能独立生活，自行繁殖的最小微生物。基因组是环状双股DNA。1996年，首次对肺炎支原体进行了全基因组测序，测序株全长816,394bp，编码687个基因。二分裂的生长方式。,生物学特性,MP仅寄生于人类，传染源是患者及携带者。MP由感染者的鼻、咽、喉、器官排出，借飞沫或气溶胶而传播。潜伏期和治疗期间均有传染性，病初46天传染性最强，35周后消失。,流行病学1,-传染源及传播途径,人类对MP普遍易感，总的发病率取决于人群易感性。59岁儿童为发病高峰，其次是1014岁年龄段儿童，近年来发病年龄有提前的趋势，另有新生儿支原体肺炎的报道。集中在大、中、小学生，军人和囚犯为高危人群。成人症状较轻，免疫功能低下者常引起严重感染，且带菌状态可持续很长时间。,流行病学2,-易感人群,全球性分布，无地区性差异。局部流行、爆发流行。平时散发，寒冷季节发病率较高，占住院肺炎的1020%，流行期间可占30%。每45年有1次流行，被戏称为“奥林匹克病”；近年来平均每26年在全球出现流行。MP和CP占CAP混合感染的1/32/3，尤与肺炎链球菌混合感染常见。,流行病学3,-流行特征,支原体学/吴移谋等主编.-2版.-北京：人民卫生出版社，2008.1,临床表现,MP经飞沫传播侵入机体，粘附于呼吸道细胞表面，并由上呼吸道逐渐向下呼吸道蔓延，引起气管及支气管、喉炎，重症者导致肺炎。此外，也可同时或相继引起脑炎、心肌炎、肝炎等肺外症状。,呼吸道症状:潜伏期1-11天，发热可持续1-2周，X线表现近半数两侧可被侵害，75-90%有下叶受累，X线体征可长达3周以上。,肺外并发症:MP可进入血液，在呼吸系统以外的部位增值，引起肺外并发症，出现于呼吸道症状后330天。,皮肤损害：皮疹的发生率约25%。神经系统：MP感染患儿约7%发生中枢神经系统损害。心血管系统：发生率约45%。血液系统：以溶血性贫血多见，也有血小板、WBC减少。泌尿系统：可出现蛋白尿、血尿、肾衰竭。运动系统：可导致关节炎等。其他损害：可出现肝功能轻、中度损害。,支原体学/吴移谋等主编.-2版.-北京：人民卫生出版社，2008.1,病理生理肺炎病理生理发生发展示意图病原体毒素上呼吸道炎支气管炎肺炎肺组织充血水肿渗出支气管粘膜充血水肿渗出换气障碍通气障碍低氧血症高碳酸血症毒血症肺动脉肺动脉反呼吸呼吸衰竭高压射性收缩循环系统DIC神经脑水肿，脑病心力心肌消化出血，肠麻痹衰竭受损酸碱失衡中毒性心肌炎,实验室诊断,-支原体及血清学检查阳性，是诊断本病的主要依据。,病原学检查,典型“油煎蛋”菌落,原代菌落,没有细胞壁，基本形态有球型、双球型及丝状。在固体培养基上一般37天后方能形成集落，肉眼很难观察，必须借助低倍镜观察，典型菌落呈“油煎蛋”样。,电镜下形态,病原学检查,肉汤培养基左阴性对照（红色）右MP生长（黄色）,OXOID变色培养基左阴性对照（深色）右MP生长（绿色）,培养基：需要丰富的胆固醇、血清蛋白和酵母浸液。,培养条件：pH为7.08.0，温度3637，环境510%CO2。,生化反应：利用其分解葡萄糖、甘露糖，还原亚甲蓝等生化特性与其他支原体进行鉴别。,免疫学检查,非特异性试验：3376%的MP感染者冷凝集试验阳性，一般在第1周末或第2周出现，12个月消失。冷凝集效价在1：64或以上有诊断意义。不适用于MP感染的确认。,特异性试验：感染后79天，血清特异性抗体开始升高，34周达高峰。恢复期较急性期抗体滴度升高4倍或以上有诊断意义。特异性高，对于确认MP感染有一定的诊断价值。,分子生物学检查,PCR法：扩增的靶基因包括16SrRNA基因的可变区、P1蛋白、ATP酶操纵子，敏感性和特异性从53.8100%不等。易出现假阳性和假阴性。标本类型：咽拭子、痰及支气管肺泡灌洗液。,DNA探针杂交法：目前用于MP研究的探针有特异性DNA片段探针、人工合成的核苷酸探针和全DNA探针。标本类型：痰液，对咽拭子标本检测价值不大。,辅助性检查,影像学检查：X线检查，特异性不高，不能确诊。,血象检查：CRP、血沉、LH等指标均出现异常，白细胞升高不明显，而细菌性肺炎时白细胞升高明显，可鉴别。特异性不高。,产品介绍,美德声推广的MP-IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血清和血浆中肺炎支原体特异的IgM抗体。有助于辅助诊断记性肺炎支原体感染。,-AniLabsystems,MycoplasmapneumoniaeEIAs(2000)：全球首个取得CE认证,肺炎支原体试剂盒组成,加入样本,37度孵育60分钟,洗板后加入标记有HRP的二抗,37度孵育60分钟,加入底物显色液,室温孵育30分钟,加入终止液后测OD值,需时150分钟,准确、特异性强,肺炎支原体试剂盒检测原理,微孔板表面包被有一层P1片段特异抗原,产品性能1,批内重复性,批间重复性,产品性能2,标本：17对提示MP感染的标本；21对确认RSV感染标本；20对确认甲流感染标本；13个确认EBV感染标本；20个确认CP感染和1对确认的CP感染标本。,即用型试剂，可拆卸板条；IgG去除剂，有效消除类风湿因子的干扰；阴性对照、临界值对照、阳性对照均为人血清基质；独特的标记便于板条的识别。底物、洗液、终止液可以通用。与ANILabsystemsCP、BP等可同步操作。28储存，有效期12个月。,肺炎支原体产品特点,竞争产品,培养法,原理：通过MP生长分解Glu产酸，使指示剂的颜色由红变黄。,采样：咽后部扁桃体部位,传统培养法培养时间较长。武汉菁华：快速培养法，6小时出结果。,特点：传承徽生物检测的“金标准”,创建了“快速培养法”。创新世界微生物培养技术。突破传统培养时间障碍(3-7天)，首创6小时快速培养。稳定性好可在常温下保存7天不影响到效果。,凝集法,特异性检测MP总抗体，日本富士。,原理：致敏粒子与人血清中存在的MP抗体发生凝集反应。,特点：MP（Mac株）细胞膜成分致敏明胶粒子，采用凝集法定性/半定量检测MP抗体。致敏/未致敏粒子为冻干粉，使用前复溶，当天使用，冷藏可5天内使用，每次使用前充分混匀。阳性对照滴度为1：320，来源为兔血清。反应时间3小时后观察结果。试剂有效期，28保存12个月。无法区分急性期感染还是急性期后期（伴有其他并发症）。,ELISA法,在血清学检测方法中应用最为广泛，方便、快捷。特异性检测血清中MP特异性抗体。,试剂品牌：,EUROIMMUN,定性/半定量（与Cut-off比值）检测MP-IgM,有效期1年反应时间：30+30+15=75min（室温）,Virion/Serion,定性/定量检测MP-IgM,GenBio/ImmunoWell,定量检测MP-IgM，A(U/mL)=（OD样本浓度cal）/ODcal阴性：A770U/mL阳性：A950U/mL,厂家介绍：兰州雅华、潍坊康华,胶体金法,快速检测MP-IgM，特异性不高，易出现假阳性，不适于批量标本检测。,特点：一步法检测，简便、快速。,PCR法,厂家介绍：达安基因，试剂报价1200/20tests,检测MP-DNA，需要配PCR分析仪，实验室及技术人员要求高。对感染早期诊断有意义。,标本：痰液、肺及支气管灌洗液、咽拭子,肺炎衣原体ChlamydiaPneumoniae,1986年Grayeton等在学生急性呼吸道感染中，发现一种衣原体，以后于成人呼吸道疾病中亦被发现，当时命名为鹦鹉热衣原体TWAR-TW株，后经研究证明该衣原体为一新种、并定名为肺炎衣原体。衣原体是一种严格的细胞内寄生生物，已知有3种对人有致病性，即肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体。肺炎衣原体是呼吸道感染、肺炎的主要原因。肺炎衣原体只有一个血清型TWAR株。,概述,具有DNA和RNA两种类型的核酸，二分裂增值。没有合成ATP等高能化合物的能力。对多种抗生素敏感：四环素、红霉素等。对热敏感：56-60，只能存活5-10min。有独特的发育周期。,生物学特性,CP仅寄生于人类和哺乳动物，人类是CP唯一储存宿主，传染源是患者及无症状携带者。传播途径：主要经飞沫或呼吸分泌物道传播，可广泛寄居于呼吸道。,流行病学1,-传染源及传播途径,CP感染表现差异较大，常可无任何症状，事实上每一个人在一生中某一个时段都会受到CP的感染CP扩散较缓慢，机体产生的免疫力极其微弱，易造成持续感染和反复感染。,流行病学2,-易感人群,：衣原体肺炎流行病学特征，张建华.实用儿科临床杂志.第24卷16期：2009年8月.,具有散发和流行交替出现的特点。四季均可发生，随年龄增长，抗体阳性率呈线性上升。国外对成人肺炎研究表明243%的CAP与CP感染有关；对连续住院的CAP患者，CP抗体阳性率高达63.8%。国内报道经DNA和血清学检测亚洲地区成人CAP的流行病学研究表明CP占成人病原的5.8%。,流行病学3,-流行特征,：衣原体肺炎流行病学特征，张建华.实用儿科临床杂志.第24卷16期：2009年8月.,临床表现,CP经飞沫传播侵入机体，引起咽炎及支气管、喉炎，轻症无明显症状，成年人肺炎多较严重。此外，并可能伴随肺外表现如神经系统损害、心脑血管疾病等。,呼吸道症状:白细胞计数正常，X线无特异性，表现多为单侧下叶浸润，咳嗽症状可持续3周以上。,肺外并发症:CP感染可以有肺外多个系统损害，儿童较成人少见。,心血管系统：损伤冠状动脉，引起冠心病和ACS等。神经系统：导致成人脑梗死，引起脑炎、脑膜炎等。反应性关节炎：偶尔出现，肺炎症状后3周发生。结节病：与结节病，慢性肉芽肿等相关。自身免疫性疾病：（ANCA相关）肾炎。其他损害：腹主动脉瘤、甲状腺炎、结节性红斑等。,1)避免长时间在人群拥挤的地方逗留，减少空气传播机会。2)避免接触高热、咳嗽、胸闷等呼吸道感染症状的患者，如发现家人有明显呼吸道症状请及早就医，并做好隔离措施。3)保持家庭居住及工作环境的清洁和通气。,预防,实验室诊断,-分离、培养或血清学检测阳性是诊断CP感染的标准。,病原学检查,辅助性检查,血液检查&影像学检查,病原学检查,CP培养只能在细胞内生长繁殖，分离培养方法复杂，所需时间长，分离率低，不适宜临床快速诊断。CP能在呼吸道来源的细胞系：HEp-2和HL细胞系中稳定生长，在细胞内形成包涵体。标本置于室温会降低活性，需尽快培养。标本类型：鼻咽或喉拭子、痰和胸腔积液标本分离CP。鼻咽部拭子分离较理想。,ELISA:常用于对CP感染者的筛查。MIF：国际上标准且常用的方法，常用于实验研究。IHA：通过凝集试验，检测CP总抗体。,血清学检查,包括ELISA、MIF、IHA等检测方法，针对CP特异性抗体的检测。,急性感染：双份血清IgG滴度4倍以上增高，单份血清IgM滴度1:16或IgG1:512。既往感染：单份血清1:16IgG1:512。,分子生物学检查,最常用的引物是omp1、16SrRNA、16S和16S23SrRNA、CP特异性克隆PstI片段等测定扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、PAGE电泳等。对CP感染早期诊断有一定价值。存在假阳性或假阴性问题。对技术人员及设备要求较高。标本类型：咽拭子、支气管肺泡灌洗液。,辅助检查,血象检查：CRP、血沉、IgG、IgM、血浆铜蓝蛋白等指标均出现异常，白细胞不升高。特异性不高。,影像学检查：X线检查，特异性不高，不能确诊。,产品介绍,美德声推广的CP-IgM抗体检测试剂盒用于定性检测人血清和血浆中肺炎衣原体特异的IgM抗体。有助于辅助诊断记性肺炎支原体感染。,-AniLabsystems,ChlamydiapneumoniaeEIAs(1999)：全球首个CPEIA产品,肺炎衣原体试剂盒组成,加入样本,37度孵育60分钟,洗板后加入标记有HRP的二抗,37度孵育60分钟,加入底物显色液,室温孵育30分钟,加入终止液后测OD值,需时150分钟,准确、特异性强,肺炎衣原体试剂盒检测原理,微孔板表面包被有一层CP特异抗原,产品性能1,批内重复性,批间重复性,产品性能2,标本：1995年瑞典爆发肺炎衣原体流行期间采集的血清标本。,肺炎衣原体产品特点,即用型试剂，可拆卸板条；IgG去除剂，有效消除类风