酶组织化学应用.ppt

酶组织化学-水解酶和氧化还原酶组织化学原理和方法，组织化学、狭义应用化学和物理原理将某些试剂放在组织切片中，与要检测的物质反应，最终形成着色沉淀，通过显微镜观察，研究组织细胞结构和功能之间的关系。1 .基本原理，细胞内酶分解适当的基质，产生中间产物(即初级反应产物)，然后将其中之一与辅助物(或捕获物)反应，产生着色不溶性的最终反应产物，其反应产物在原地沉积，表示酶的存在，显示酶的组织化学方法1。金属沉淀法：磷酸水解酶标记钠甘油磷酸铅磷酸铅硫化铅2。偶氮耦合方法：标记多种酶的最重要方法，酸性磷酸酶，底物酶，初级反应产物-不容易扩散的，重氮盐，最终反应产物-着色，偶氮结合法。Gomori naphthol phosphate法-萘酚与酶活性部位相结合，不溶性沉淀孵化液 -萘系磷酸钠，蒸馏水，5%四硼酸酯，10%硫酸镁，固-蓝b盐六偶氮-品红和(结合合成萘酚被碱性磷酸酶水解，立即释放与氮盐结合产生不溶性偶氮颜料的萘酚。)孵化液萘酚as-bi磷酸钠，二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)，tris-cl或巴比妥乙酸缓冲液，六偶氮对品红，工作阶段1。小组织液氮淬火，低温冰箱切片2。甲醛钙溶液(Fca)固定在5分钟，4 ，然后蒸馏水洗也不能固定3 .作用液560分钟，37 或室温4。蒸馏洗涤5.4%甲醛固定15分钟至2小时，室温6。自来水清洗，蒸馏洗涤7.1%甲基绿(氯仿清洗)510分钟，蒸馏洗涤8。甘油明胶密封，或丙酮-甲苯-DPX密封结果酶活性中红色非结晶沉淀，核为蓝绿色，酶种类，1 .氧化还原酶2。转移酶3。水解酶4。裂缝新塔第5。异构酶6。合成酶、水解酶-增加或去除水，催化水的催化水解的酶AB H2OAH BOH，(a)碱性磷酸酶，AKP(也称为碱性磷酸一酯酶(EC3.1.3.1)是碱性环境中催化各种烷和酚的磷酸盐水解的最佳phh肾近曲小管刷边及肠相皮肤边的应用：1 .肝病白血病研究诊断2。在骨发生及代谢疾病研究中，展示碱性磷酸酶的一般方法：1。钙钴法(Gomori-Takamatsu法)基本原理甘油磷酸钠Ca磷酸钴硫化钴孵化 2%巴比妥钠，3%-甘油磷酸钠，2%无水氯化钙，硫酸镁5%，新鲜组织低温冷冻切片2。将不确定的切片直接作为作用液投入，或固定5分钟2小时，4 为1%氯化钙Formalin(Fca)，洗蒸馏水3。作用液1060分钟，374。用蒸馏洗涤5.2%硝酸钴1分6。用蒸馏洗涤7.12%硫化铵1分8。用蒸馏洗涤9。甘油明胶密封片，或脱水、透明、中性橡胶密封片结果碱性磷酸酶活性为黑色硫化钴沉淀，肾小管碱性磷酸酶-钙钴法X100，肾小管碱性磷酸酶-钙钴法X200，(2)酸性磷酸酶(accon) 0.5%甲醛分布：主要在溶酶体内使用：前列腺癌和其他器官的转移性前列腺癌，胃癌，肺癌，乳腺癌等(-)幽门瘤，骨肉瘤等(-)，酸性磷酸酶的一般方法1。 酸性磷酸酶硝酸铅法基本原理和碱性磷酸酶钙钴法的原理是甘油磷酸铅硫化铅(黑)孵化液硝酸铅，巴比妥硝酸盐缓冲液，-甘油磷酸钠结果酸性磷酸酶活性是黄褐色黑2。同时结合法基本原理 ACP在酸性条件下将萘酚as-tr磷酸盐与萘酚as-tr和磷酸、萘酚as-tr和六偶氮双红相结合，形成酶活性中的红色不溶性复合物孵化液萘酚AS-TR磷酸盐，6偶氮对品红，ACP，ACP新鲜组织低温冰箱切片2。不固定或晾干的话，丙酮固定15分3。用孵化液放入37的水浴箱，12小时4。流水洗涤，晾干(12分钟)5。马耶尔索木丁或1%甲基绿染色6。流水洗涤10分7。现有脱水是透明的，中性口香糖密封片结果酸性磷酸酶活性是橙色。苏木精料或绿色(甲基绿复合物)，涂膜-腹膜对吞噬细胞酸性磷酸酶X400，(3) 5 核苷酸酶(5nucleotidase)在C-5 位置水解，核苷和脱氧核糖核苷在C-5 位置水解小鼠肾脏7.5，睾丸，脑，肝分别为8.5，7.5至8.5，8.0活化剂：Mg，Mn抑制剂：氟化钠(0.1MNaF)，硼酸盐，哦，哦，哦在肾组织中分布肾小管刷边，所有肾小管刷边()基膜()2.-甘油磷酸钠()，5 nas，作为基质，(4)葡萄糖-6根据硝酸铅的甲醛固定和失活情况，G6p酶：葡萄糖-6-p葡萄糖磷酸铅硫化铅，G6p酶，(5)腺苷三磷酸酶能量，也称为ATPADP Pi能，根据启用剂、抑制剂和酶的位置，有3种ATP酶1。肌球蛋白三磷酸酶在骨骼肌最佳PH 9.09.4中被Ca激活，被Mg抑制通常是2型肌纤维： (赤根)-收缩缓慢，活动持续时间长，酶活性高，染色严重的型(白根)膜性腺苷3磷酸水解酶活性钠-钾活性腺苷3磷酸水解酶最佳ph 7.2-7.5活化剂：Mg，Na，K抑制剂：Ca，苦毒莫考西林总是存在于细胞膜，特别是分泌功能激活的细胞膜上。3.线粒体腺苷三磷酸水解酶心肌最丰富，肝心肌的线粒体ATP酶被Mg激活，被Ca抑制，肝细胞线粒体ATP酶被Mg，Ca同时激活的心肌和肝脏的线粒体ATP酶被-氯汞苯甲酸(PCMB)抑制。最佳PH激活剂抑制剂肌球蛋白ATP酶膜ATP酶线粒体ATP酶，腺苷三磷酸水解酶1。镁活化ATP酶(铅法):在ATP酶活性中呈黄褐色硫化铅沉淀。主要用于标记膜性ATPase，线粒体ATPase2。钙激活ATP酶(钙和钴法):在ATP酶活性中表现为黑色硫化钴沉淀。主要用于显示肌球蛋白ATPase，(6)非特异性酯酶酯酶酯酶，3354非特异性酯酶，脂肪酶，胆碱酯酶非特异性酯酶-短链脂肪酸水解的酯胆碱酯酶-胆碱酯酶-胆碱水解的酯酶非特异性酯酶-最佳PH5.08.0肝、肾、胰、小肠具有高酶活性，-单核巨噬细胞，t淋巴，中性粒细胞具有非特异性酯酶反应1。非特异性酯酶含量在急性白血病分类诊断中有一定的，颗粒及粒度有一定的诊断价值2。与非特异性酯酶一起，t，b淋巴细胞的识别可以显示非特异性酯酶。-以乙酰-萘或萘酚衍生物为基质的同时结合方法，通过酶作用释放-萘酚，与固体蓝b或偶氮对品红结合，生成紫色黑色或赤褐色的不溶性偶氮染料，(7)胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶-神经组织、肌肉、红细胞的胆碱酯酶多巴胺氧化酶、细胞色素氧化酶等乳酸脱氢酶氧化酶氧化酶，以及，(a)脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶的标记：底物脱氢酶氧化，从底物中释放氢气，通过氢的传递系统，在还原氢方面，以颜色静态的方式将四唑盐盐和铁氰化钾显示为氢体组的脱氢酶：辅酶和必需的辅酶珊瑚虫酸脱氢酶(SDH)SDH被分类为属于丁二酸氧化酶系统的酶。没有辅酶存在的SDH存在于所有有氧呼吸的细胞中，心肌、肾小管上皮细胞、肝细胞的含量最丰富，与线粒体一起最佳PH7。显示方法皮尔逊二甲基亚砜方法基本原理丁二酸丁二酸丁二酸氢(四唑盐)富马酸还原制氢体(无色) (蓝色沉淀)，作用液0.1米丁二酸钠，0.1米新鲜组织低温冷冻切片2。作用液1535分钟3。盐水洗4。氯化钙Formalin(FCA)固定10分钟5。80%乙醇，5分6。甘油明胶密封或脱水，透明，中性口香糖密封片结果酶活性中青紫沉淀，小鼠心肌冷冻切片-丁二酸脱氢酶X400，2。乳酸脱氢酶(LDH)需要辅酶的脱氢酶广泛分布的溶解性酶