微生物实验报告

脓液和粪便样本中致病菌的检测专业：学生编号：姓名：一、实验目的通过一系列的观察和鉴定，探索和检测其病原菌的种类，确定其病原菌的名称和性质。在实践中，学习诸如培养基的制备、消毒和灭菌、细菌的分离和培养、细菌种群和个体的形态特征的观察以及细菌生化反应的鉴定等技能。从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。二。实验材料装备打火机、油笔、酒精灯、接种环、接种针、污物盘、普通冰柜、防水电热恒温培养箱、奥林巴斯CX21生物显微镜、电炉、试管(带棉塞)、称重纸、药勺、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、直尺、锥形瓶、高压釜、镊子、载玻片、吸水纸、擦拭纸试剂药物普通营养琼脂培养基、蒸馏水、脓液标本、粪便标本、石蜡油、生理盐水、结晶紫、卢戈碘溶液、95%乙醇、稀释复水、葡萄糖微发酵管(2)、乳糖微发酵管(2)、青霉素抗生素纸、链霉素抗生素纸、庆大霉素抗生素纸、血浆、福氏志贺氏菌诊断血清三。方法和步骤培养基的制备细菌的分离和培养细菌的纯培养细菌形态学检查细菌的生化试验细菌血清学试验及结果分析实验论文写作1.培养基的制备干粉培养基蒸馏水加热熔化分装浓缩于试管篮中用硫酸纸和牛皮纸覆盖用橡皮筋捆扎置于灭菌桶或平台边缘的篮中送至高压蒸汽灭菌室(清洗室)灭菌(1)平板培养基：将10毫升平板倒入平板琼脂完全凝固后，将平板倒置4冰箱保存备用。(2)斜面培养基：培养基热时，斜面琼脂凝固后，存放于4冰箱备用。贴上标签并消毒。2.空气和人体表面的细菌学检查(1)空气细菌检查每组一个营养琼脂平板。选择取样位置(实验室、厕所或可选位置)打开板盖，将其面朝下放在板旁边将板暴露在空气中15分钟将板倒置标记在37下培养24小时观察结果。(2)人体表面细菌学检查甲乙双方按丙方标准定期洗手。甲和乙、丙和丁共用一个平板按规定在普通平板上的手指上接种细菌。第一个细胞在洗手之前，第二个细胞在洗手之后，第三个细胞在消毒之后，第四个细胞是空白对照。3.细菌的分离和培养接种环烧灼灭菌分别取脓样和粪样，分别放在普通平板和曙红亚甲蓝平板上，各制作两份，烧掉接种环上多余的样本冷却后，用分隔线分离法将脓样接种在营养琼脂平板上(2份)，粪样接种在曙红亚甲蓝平板上(2份)接种环烧灼灭菌倒置平板至37培养18 24h 观察结果。4.细菌菌落生长特性观察及纯化培养接种环烧灼灭菌在平板上选择四个典型的单个菌落(白色、黄色、紫黑色和粉红色)进行斜面接种和纯培养做好标记接种环烧灼灭菌斜面培养基置于37过夜培养保存备用5.细菌个体形态特征的观察(1)革兰氏染色：取干净的载玻片，灭菌后用接种环在载玻片上取1-2圈生理盐水，取少量细菌培养物，用生理盐水轻轻涂抹均匀，待涂片干燥后，在酒精灯火焰外侧快速来回2-3圈，结晶紫初染1分钟，水洗，卢戈碘溶液媒染1分钟，水洗，95%乙醇脱色20秒左右，水洗，稀释品红，复染1分钟，水接种环烧灼灭菌，分别取上一次实验得到的四种菌液，密涂于普通平板上，烧灼灭菌接种环，标记：青、链、青，镊子火焰消毒，贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片，压制，镊子消毒，倒置37培养18-24小时，观察结果7.血浆凝固酶试验取一张干净的玻片，分别在左右两侧滴1-2滴兔血浆，滴1滴生理盐水，烧灼消毒接种环，冷却后，分别用接种环取上一次实验获得的白色和黄色真菌苔藓(菌量2-3个菌落)与血浆研磨混合，混合均匀观察结果，烧灼消毒接种环，等一等，观察结果8.糖发酵试验将接种针烧灼灭菌分别用灭菌后的接种针刮除实验得到的紫黑色和粉色真菌苔分别接种葡萄糖发酵微管和乳糖发酵微管烧灼灭菌接种环将微管平放在平板上37培养过夜观察结果。9.动态测试将接种针烧灼消毒用接种针分别从紫黑色和粉红色斜面上取菌从半固体培养基的中心垂直穿透至接近管底的位置，但不到达管底按原路线抽出接种针用火焰快速消毒试管口2-3次堵塞棉塞烧灼消毒接种针37培养24小时观察结果10.血清学试验取一张干净的玻片，将研磨面的近端作为对照区，滴加15ul生理盐水，将远端作为试验区，滴加15ul福氏志贺氏菌诊断血清，烧灼接种环并消毒，分别取带接种环的红菌苔，在生理盐水或血清中研磨，混合均匀，烧灼接种环并消毒，来回倾斜玻片，观察结果四.结果和讨论脓液中细菌的分析与探讨1.用一个普通的平板从脓标本中分离出两个金黄色和白色的菌落。2.当在显微镜下观察时，这两种细菌都是葡萄球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌。3.结合菌落的颜色，可以初步断定这是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。4.通过血浆凝固酶试验，观察到黄色菌落的细菌能使血浆产生颗粒状物质，表明凝固酶为阳性。白色菌落不凝集，表明它们是凝固酶阴性。5.最后进行药物敏感性试验。从培养基中可以观察到不同的抗生素形成不同的抑菌圈。青霉素对金黄色葡萄球菌最敏感。粪便中细菌的分析与探讨1.当用曙红-亚甲蓝板分离菌落时，具有金属光泽的紫黑色菌落和粉红色半透明菌落可以从粪便样品中分离出来。2.当在显微镜下观察时，这两种细菌是G-杆菌，它们排列不规则，不能从形态学上识别。3.通过糖发酵试验，可以观察到紫黑色细菌可以改变葡萄糖和乳糖试管的颜色并产生气体。粉红色细菌只能改变葡萄糖试管的颜色。4.通过半固体动态试验，观察到紫黑色细菌使半固体培养基浑浊，粉红色细菌只在接种针插入的方向聚集。5.总而言之，紫黑色细菌是大肠杆菌，粉红色细菌是志贺氏菌。6.药物敏感性试验结束时，发现大肠