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文档简介
基因工程,主题1,100公斤只能从猪或牛的胰腺中提取4-5g。1979年,美国将人的胰岛素基因重组为大肠杆菌,实现了细菌生产胰岛素,大大降低了生产成本。据调查,、2016年全世界约有4亿糖尿病患者,我国约有1.5亿人。胰岛素,思考:基因改造技术在另一种生物中表达一种生物的某些特性。这种形体的表达跟我们所学的基因的什么过程有关?科顿在生物界是!通用,基因工程的产品,基因工程的概念,基因工程是根据人们的意志进行严格的设计,通过体外DNA重组和基因改造等技术赋予生物新的遗传特性,创造更适合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平设计和制造的,因此也称为DNA重组技术。捐赠者细胞,目的基因,受体细胞,获取新特性,基因工程概念,DNA重组技术,体外,基因,DNA分子水平,切割,剪接,导入,表达,1DNA重组技术的基本工具,读课本第4-5页“限制性核酸内切酶分子手术刀”相关内容,思考下一个问题,自主学习,1。限制性核酸内切酶主要来源于那种生物吗?限制性核酸内切酶的作用是什么?限制性核酸内切酶效应后会形成几个末端?原核,磷酸二酯键,一,“分子手术刀”-限制性核酸内切酶,双链DNA分子的特定核苷酸序列,在每条链的特定部分分离两个核苷酸键。特征:特异性限制性内切酶仅识别一个特定核苷酸序列,在特定部位切断磷酸二酯键,中轴,g和a之间切断,大肠杆菌的一种限制性内切酶(EcoR)仅识别GAATTC序列,在g和a之间切断。EcoRI限制性内切酶作用,粘性末端,粘性末端,EcoRI限制性内切酶,通过限制性内切酶切割DNA的两条单链切口,扩展核苷酸几对,它们之间正好是互补对,这些切口称为粘性末端。SmaI仅识别CCCGGG序列并在c和g之间剪切。中间轴,SmaI限制酶的作用是在g和c之间切割,平端平端,SmaI限制酶的切割,限制酶在识别序列的中心轴上切割时,DNA的两条单链切口是平端。要获得特定的性状,基因需要用限制性内切多少个切口?能做多少粘性末端呢?切割两个切口,生成四个粘性末端。如果用同一种限制性内切两个不同的DNA,会发生什么?看起来你可以通过制造相同的粘性末端,粘合其末端,合成重组后的DNA分子。寻根问题,为什么限制酶不能切割细菌自身的DNA?通过细菌中含有特定限制酶的细胞的长期进化,其DNA分子没有这种限制酶的识别切割顺序,或通过甲基化酶将甲基化酶转移到识别序列的碱基,防止限制酶被切割。细菌含有某种限制性内切酶并不能阻止自己的DNA中断,但可以防止外源DNA的入侵。2,“分子缝合”DNA连接酶,DNA连接酶可以“缝合”粘着端之间的间隙,将梯子两侧的扶手切断,形成一个重组DNA分子。想:DNA连接酶连接到哪些部分?可以“缝合”粘着端之间的缝隙,恢复EcoliDNA接合酶或T4DNA接合酶,即被限制酶切断的两个核苷酸之间的磷酸二酯接合,T4DNA接合酶可以“缝合”平端之间的缝隙,但效率低下,T4DNA接合剂磷酸二酯结合恢复,作用:蛋白质,不需要,完全重组DNA分子形成,形成DNA的链,基因工程,DNA克隆,DNA连接酶和DNA聚合酶的比较将单个核苷酸连接到现有DNA片段,形成磷酸二酯结合,两个DNA片段之间形成磷酸二酯结合,第三,常用的载体有质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒等,质粒结构特征是什么?质粒作为载体有其必要条件吗?共同载体:质粒、克隆区、复制和插入目的基因一起复制,目的基因插入位点,标记基因的存在,可以通过含有氨苄西林的培养基识别质粒暴露,简单结构,独立于细菌染色体(细胞核DNA),具有自我复制能力的极小双链环DNA分子。载体的作用,载体的必要条件,载体的种类,“分子运输车”载体,1)在宿主细胞内复制并稳定保存。2)为了与外源基因连接,有多个限制性酶接触点。3)有特定标记基因,便于识别和选择。1)作为携带工具,将目的基因引入受体细胞2)在受体细胞内大量复制目的基因,细菌的质粒病毒:噬菌体衍生物,动植物病毒等。1.符合以下条件之一是:()a,所有限制性酶只能识别一个特定核苷酸序列b,质粒是基因工程的唯一载体c,载体必须具备的条件之一是具有多个限制性酶接触点以与外源基因结合,使DNA连接酶在黏附性末端的碱基之间形成氢键,c,练习,
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