蛋白质体外消化率的测定方法

地地 址：上海市南汇区航头镇航头路址：上海市南汇区航头镇航头路 109 号号 201316 电电 话：话：021- 58229995 传传 真：真：021- 58228544 网网 站：站： 邮邮 件：件：yuanyao 上海源耀生物科技有限公司上海源耀生物科技有限公司 技术交流资料技术交流资料 2007 年 5 月 GB/T 178111999 前前 言言 本标准等效采用美国公职分析化学家协会（AOAC） （1995 年版） 动物蛋白质饲料的胃蛋白酶消化率测 定方法 过滤法 。 在技术内容上，原方法中所用的“恒温搅动器” ，根据实际情况改用“恒温平转摇床” ；再则，限于国内 试剂条件，选用市场上易购的胃蛋白酶试剂（1:3000）代替原方法指定的胃蛋白酶试剂（1:10000） 。 本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心（武汉）负责起草。 本标准主要起草人：屈利文，钱肪。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 动物蛋白质饲料消化率的测定动物蛋白质饲料消化率的测定 胃蛋白酶法胃蛋白酶法 Determination of digestibility in animal protein feedsPepsin method 1 范围范围 本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。 本标准适用于所有动物性蛋白质饲料，不适用于植物性蛋白质或混和饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。 2 引用标准引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有 效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 64321994 饲料中粗蛋白测定方法 GB/T 64321994 饲料粗脂肪测定方法 GB/T 64821992 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理方法原理 脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化 16h，过滤分离不溶性残渣， 洗涤、干燥，测定残渣地粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样地粗蛋白含量。 4 试剂试剂 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯 实验室用水应符合 GB/T 6682 中三级水的规格。 4.1 0.2胃蛋白酶溶液：将 6.1ml 浓盐酸稀释至 1000ml 水中（溶液 pH12） ，加热至 4245，加入 2g 活 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 地地 址：上海市南汇区航头镇航头路址：上海市南汇区航头镇航头路 109 号号 201316 电电 话：话：021- 58229995 传传 真：真：021- 58228544 网网 站：站： 邮邮 件：件：yuanyao 性为 1:10000 生化级胃蛋白酶若活性不是 1:10000，可使用活性 1:3000 生化级胃蛋白酶 1） （不可使用 非生化级胃蛋白酶） ，应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升 20IU,并缓慢搅拌直至溶解。勿 在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前钱配制。 4.2 乙醚。 4.3 丙酮。 4.4 定氮试剂：按 GB/T6432 中试剂及配制方法规定 采用说明： 1AOAC 中制定为 1:10000。 国家质量技术监督局国家质量技术监督局 1999-08-10 批准批准 2002-02-01 实施实施 GB/T 178111999 5 仪器、设备仪器、设备 5.1 恒温式平转摇床 1 ：温控范围 2050，水浴式或空气浴式均可，转速可调（15300r/min） 。 5.2 实验室用样品粉碎机。 5.3 索氏抽提器、脱脂设备：按 GB/T 6433 中仪器、设备规定。 5.4 定氮仪器、设备：按 GB/T 6432 中仪器、设备规定。 5.5 实验室常用仪器、设备。 6 试样制备试样制备 取具有代表性试样，用四分法缩分至 200g，然后粉碎至全部过 0.90mm 孔筛（20 目） ，混匀装于密封容器， 保存备用。 7 测定步骤测定步骤 7.1 脱脂 称取 12g 试样用乙醚（4.2）脱脂（含脂肪小于 1可不脱脂，含脂肪 110建议脱脂，含脂肪大 于 10则必须脱脂） 。脱脂方法可参照 GB/T 6433 中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。 7.2 胃蛋白酶消化 称取脱脂烘干（7.1）后的样品若干克（精确至 0.0002g，含氮量约 580mg）于 250ml 带盖磨口瓶中， 加 150ml 新配制的并已预热至 4245的胃蛋白酶溶液（4.1） ，要确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧 瓶盖，将瓶夹于恒温摇床（5.1）上，于 45恒定搅动 16h 进行保温消化。 7.3 消化残渣的处理 从搅动器上取下磨口瓶，呈 45角放置，让残渣沉淀 15min 以上，随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上抽 滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容 物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入 15ml 丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口， PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 地地 址：上海市南汇区航头镇航头路址：上海市南汇区航头镇航头路 109 号号 201316 电电 话：话：021- 58229995 传传 真：真：021- 58228544 网网 站：站： 邮邮 件：件：yuanyao 在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份 15ml 的丙酮进行洗涤，照上法振摇 和倒出。检查瓶子，并用丙酮在此洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次， 并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损的移入凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于 105烘箱内 烘干。 7.4 粗蛋白的测定 将上述（7.3）烘干的残渣按 GB/T 6432 中方法测定粗蛋白含量（W2） 。同时，称取脱脂烘干（7.1）后的 样品若干克（精确至 0.0002g，含氮量约 580mg） ，直接按 GB/T 6432 方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白 的含量（W1） 采用说明： 1AOAC 方法中，规定使用“恒温搅动器” 。 GB/T 178111999 8 分析结果的计算及表示分析结果的计算及表示 8.1 结果按式（1）计算 W1W2 X(%)=-100 （1） W1 式中：X试样的胃蛋白酶消化率， W1脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均