临床常见标本的细菌学检验PPT幻灯片课件

,微生物学检验,第十九章临床常见标本的细菌学检验,返回总目录,本章内容,学习目标：掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点了解临床标本细菌学检验的临床意义临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌本章重点：病毒标本采集和运送原则病毒学诊断及鉴定常用方法病毒培养的基本操作,学习目标及重点,第一节概述,一、临床标本的采集、送检与处理原则（一）临床标本的采集1.核对检验单信息信息完整、无误2.选择适当的容器,3.早期采集使用抗菌药物前4.无菌采集严格无菌操作技术,第一节概述,5.选择采集部位和方法,第一节概述,6.充足的标本量足量、适量7.标记标本8.归放标本符合生物安全防护要求,第一节概述,（二）临床标本的保存和送检立即送检，否则应放入运送培养基或保存液中运送1.普通细菌培养标本室温：1小时，4：24小时，运送培养基：48小时2.苛养菌培养标本保温、保湿送检，“床头接种”,第一节概述,3.厌氧菌培养标本防干燥，避免接触空气。4.安全运送注意安全防护高致病性传染病标本，按生物安全有关规定包装，由专人运送,第一节概述,（三）临床标本的处理核对标本与申请单信息常见标本处理方式组织：无菌粉碎研磨后，加生理盐水制成悬液，接种体液：3000r/mim离心10分钟后，接种。棉拭子：置运送培养基送检，避免污染。粪便：挑取带脓、血及黏液部分接种。痰液：检查标本是否有血液、脓液、颗粒、干酪样物等血液：采集后立即增菌培养厌氧菌培养：检查标本、运送方式是否适合厌氧培养，立即接种,第一节概述,二、培养基及培养方法的选择1.培养基选择恰当的培养基或组合,第一节概述,电热恒温培养箱,二氧化碳培养箱,厌氧培养箱,2.常用培养方法需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养,第一节概述,三、细菌学检验的基本流程（一）细菌学检验的基本程序,第一节概述,（二）细菌学检验鉴定步骤1.标本性状观察颜色、是否粘稠、是否浑浊、是否脓性、是否带血等性状,第一节概述,革兰染色,抗酸染色,墨汁染色,2.涂片检查不染色标本检查：检查细菌的动力染色标本检查,第一节概述,3.细菌的分离培养目的：得到单个纯菌落甄别污染菌方法观察菌落是否在划线上观察菌落是否与直接涂片染色结果相符观察菌落是否符合拟培养细菌的生长特点注意培养时间,第一节概述,4.细菌的鉴定选择细菌检验鉴定方法的原则选择有鉴定价值的试验：两种细菌出现不同的结果选择快速、简易的试验：如触酶、氧化酶综合考虑试验的敏感性和特异性,第一节概述,5.细菌对抗菌药物敏感性试验纸片扩散法肉汤稀释法自动化仪器法E-test法等。,第一节概述,返回本章内容,四、细菌学检验报告原则标本周转时间（TAT）：从标本采集起到临床医生收到检验结果的时间危急值：指危及到患者生命健康安全的检验结果检验报告原则初报告预报告最终报告报告抗菌药物敏感性试验结果,第一节概述,一、血液及骨髓标本的细菌学检验（一）标本的采集1.皮肤消毒严格执行三步法2.采血部位：肘静脉肘动脉或股动脉采血婴幼儿采颈静脉血,第二节临床常见标本的细菌学检验,3.采集方法严格无菌操作4.采血量比例：1:10成人810ml/瓶儿童15ml/瓶婴儿12ml/瓶骨髓12ml/瓶,第二节临床常见标本的细菌学检验,5.采血时间和頻度,6.标本的运送和保存立即送检，室温保存，切勿冷藏,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,2.检验程序,第二节临床常见标本的细菌学检验,3.检验方法（1）普通细菌的培养与鉴定增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表,第二节临床常见标本的细菌学检验,阳性培养瓶处理阴性培养瓶处理于1218小时、第3天和第7天至少做3次盲传，7天无细菌生长报告阴性,第二节临床常见标本的细菌学检验,（2）特殊细菌培养与鉴定脑膜炎奈瑟菌,鉴定：葡萄糖、麦芽糖发酵阳性药敏：CLSI标准,脑膜炎奈瑟菌菌落,第二节临床常见标本的细菌学检验,（2）特殊细菌培养与鉴定草绿色链球菌,鉴定药敏试验,草绿色链球菌,草绿色链球菌菌落,7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周培养无草绿色链球菌生长”,第二节临床常见标本的细菌学检验,伤寒沙门菌及其他沙门菌布鲁菌培养4周无细菌生长，报告“经4周培养无细菌生长”,第二节临床常见标本的细菌学检验,厌氧菌真菌：真菌增菌肉汤增菌沙保弱培养基（25或37）菌落特征生化鉴定、报告L型细菌高渗液体培养基血琼脂平板和L型细菌培养基典型“油煎蛋”菌落返祖、鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,4.结果报告采取分级和限时报告制度初报告：将镜检结果电话通知主管医生预报告：68小时内报告直接药物敏感结果最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议阴性报告,第二节临床常见标本的细菌学检验,（三）临床意义排除杂菌污染，从血液和骨髓标本中检出任何细菌都具有临床意义葡萄球菌是血液感染最常见的细菌草绿色链球菌是亚急性心内膜炎的主要致病菌尿路、胆道、胃肠道炎症粘膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌多见产单核李斯特菌主要引起新生儿败血症,第二节临床常见标本的细菌学检验,互动讨论草绿色链球菌属人体正常菌群，试分析从血液和痰液标本中分离出草绿色链球菌各有何临床意义？,第二节临床常见标本的细菌学检验,二、脑脊液标本的细菌学检验（一）标本的采集1.采集部位腰椎穿刺法2.采集量35ml3.标本的运送和保存15分钟内送检，最迟不能超过1小时。疑似苛养菌感染时，应保温送检,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,2.检验程序,第二节临床常见标本的细菌学检验,肺炎链球菌,脑膜炎奈瑟菌,流感嗜血杆菌,3.检验方法（1）涂片检查革兰染色,第二节临床常见标本的细菌学检验,抗酸染色墨汁负染色,新型隐球菌,结核杆菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,（2）分离培养与鉴定普通细菌标本血琼脂平板和巧克力平板（35，CO2环境）可疑菌落形态、生化试验及血清学试验、药敏试验结核分枝杆菌标本罗-琴培养基或米氏7H-10培养基35温箱孵育可疑菌落鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,真菌标本血平板或沙保弱培养基25及37孵育可疑菌落形态、镜检及生化反应等鉴定。厌氧菌标本血平板、厌氧血琼脂平板和硫乙醇酸钠肉汤35需氧、厌氧培养可疑菌落染色镜检及生化鉴定、药敏试验,第二节临床常见标本的细菌学检验,4.结果报告初报告：报告标本直接涂片结果预报告：报告标本直接药敏试验结果最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议阴性报告,第二节临床常见标本的细菌学检验,（三）临床意义脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者,第二节临床常见标本的细菌学检验,三、尿液（泌尿生殖道）标本的细菌学检验（一）标本的采集1.中段尿采集法2.导尿法3.膀胱穿刺采集法4.集尿法5.标本的运送和保存立即送检、及时接种室温不超过2小时，4不超过8小时淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,2.检验程序,第二节临床常见标本的细菌学检验,3.检验方法（1）涂片检查普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检淋病奈瑟菌检查,第二节临床常见标本的细菌学检验,念珠菌检查结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体,第二节临床常见标本的细菌学检验,（2）尿液细菌计数计算：cfu/ml=菌落数稀释倍数或cfu/ml=意义革兰阳性球菌大于104cfu/ml,革兰阴性杆菌大于105cfu/ml，应考虑为泌尿系统感染,第二节临床常见标本的细菌学检验,淋球菌菌落,（3）分离培养与鉴定普通细菌培养：沉淀物血平板和麦康凯平板35培养菌落观察染色镜检、生化反应、抗菌药物敏感试验淋病奈瑟菌培养：标本TM或MTM平板35、510CO2环境疑似菌落涂片镜检、生化反应鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,4.结果报告初级报告：标本涂片染色镜检结果，如“找到革兰阴性双球菌，存在于细胞内（外），形似淋病奈瑟菌”最终报告：报告细菌种属、菌落计数、药物敏感性试验、结果评价及建议阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养无细菌生长”,第二节临床常见标本的细菌学检验,（三）临床意义尿液中细菌数少于104cfuml或104105cfu/ml之间，反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采集或处理不当被污染。尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合,第二节临床常见标本的细菌学检验,直肠肛拭子,四、粪便标本的细菌学检验（一）标本的采集1.自然排便法脓血、黏液粪便23克2.直肠拭子法成人45厘米幼儿23厘米3.标本的运送和保存卡-布（Cary-Blair）运送培养基,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,2.检验程序,第二节临床常见标本的细菌学检验,3.检验方法（1）涂片检查霍乱弧菌检查：动力检查：动力及制动试验染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌，可做出初步报告酵母样菌检查,第二节临床常见标本的细菌学检验,葡萄球菌,艰难梭菌,弯曲菌,（1）涂片检查葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌检查粪便中优势菌检查：推定主要优势菌并及时报告结果,第二节临床常见标本的细菌学检验,沙门菌,志贺菌,（2）分离培养与鉴定沙门菌及志贺菌培养粪便或直肠拭子SS平板、麦康凯平板、GN增菌液35、需氧培养可疑菌落生化试验、血清学反应鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,五种致病性大肠埃希菌ETEC-肠产毒大肠埃希菌EPEC-肠致病大肠埃希菌EIEC-肠侵袭大肠埃希菌EHEC-肠出血大肠埃希菌EaggEC肠凝聚性大肠埃希菌,（2）分离培养与鉴定致病性大肠埃希菌培养脓血或糊状粪便麦康凯/伊红美蓝/中国蓝平板35、需氧培养可疑菌落生化反应、多价血清凝集试验鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,霍乱弧菌培养米泔水样粪便碱性蛋白胨水增菌碱性琼脂平板或TCBS平板35需氧培养可疑菌落形态检查、动力及制动试验、血清学试验鉴定副溶血性弧菌培养粪便、可疑食物、呕吐物3.5%NaCl蛋白胨水增菌SS平板、TCBS平板35需氧培养可疑菌落生化试验及耐盐试验鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,金黄色葡萄球菌培养粪便、肛拭子、可疑食物甘露醇高盐琼脂平板、血琼脂平板35需氧培养可疑菌落革兰染色、凝固酶、DNA酶及甘露醇发酵鉴定小肠结肠耶尔森菌培养标本NYE、1/15M磷酸盐増菌液4、2530、35、需氧环境可疑菌落生化反应、血清学试验鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,小肠结肠炎耶尔森菌,空肠弯曲菌培养标本Camp-BAP、Skirrow或Butzler血琼脂43、微需氧环境有色半透明菌落动力、生化试验鉴定。艰难梭菌培养标本CCFA平板35、厌氧环境可疑菌落生化鉴定、毒素试验,第二节临床常见标本的细菌学检验,真菌培养标本沙保弱琼脂平板、血琼脂平板25及37培养可疑菌落镜检、芽管及厚膜孢子试验等鉴定4.结果报告初级报告：镜检典型阳性结果，报告临床。最终报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议；检出霍乱弧菌应立即向当地疾病预防控制中心报告阴性报告：根据分离目的菌而定,第二节临床常见标本的细菌学检验,（三）临床意义能引起肠道感染的常见致病菌有沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌及致病性大肠埃希菌等。能引起食物中毒的常见致病菌有沙门菌、副溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌、蜡样芽胞杆菌等幽门螺杆菌是引起胃炎、消化性溃疡主要致病菌，胃癌的危险因子,第二节临床常见标本的细菌学检验,互动讨论正常人粪便中含有大量细菌，而能引起肠道感染的细菌种类较多，致病菌和正常菌往往共存生长。试分析如何快速准确的检出致病菌？,第二节临床常见标本的细菌学检验,五、痰液（呼吸道）标本的细菌学检验（一）标本的采集,1.自然咳痰法晨痰最佳，深部痰2.小儿取痰法3.特殊器械采集法4.标本的运送和保存立即送检，室温不超过2小时,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,2.检验程序,第二节临床常见标本的细菌学检验,3.检验方法（1）涂片检查目的:确定标本是否适合做细菌培养为选用培养基提供参考,适合细菌培养的痰液镜检标准,第二节临床常见标本的细菌学检验,（1）涂片检查普通细菌检查：涂片行革兰染色镜检，根据染色性、形态及排列初步报告结核杆菌检查：制成厚涂片，抗酸染色镜检放线菌及诺卡菌检查,硫磺样颗粒涂片,衣氏放线菌,第二节临床常见标本的细菌学检验,痰培养前的处理痰液的洗净痰液的均质化普通细菌培养嗜肺军团菌培养标本血琼脂、巧克力琼脂和BCYE琼脂平板35，510CO2环境根据培养时间、菌落特点等鉴定,（2）细菌的培养与鉴定,第二节临床常见标本的细菌学检验,异染颗粒,白喉棒状杆菌培养标本吕氏血清斜面、血琼脂平板和亚碲酸钾琼脂平板35、需氧环境典型菌落形态、生化试验、毒力试验,第二节临床常见标本的细菌学检验,百日咳鲍特菌在CCBA培养基菌落,鲍特菌培养标本鲍-金培养基35、需氧环境可疑菌落涂片镜检、生化及血清学试验等鉴定4.结果报告初级报告：典型阳性结果，立即向临床报告最终报告：报告细菌种属、药敏试验、各细菌所占比例、结果评价及建议阴性报告：报告“正常菌群”或“生长细菌的种类、数量”,第二节临床常见标本的细菌学检验,（三）临床意义上呼吸道感染是最常的呼吸道感染症下呼吸道感染最常见的疾病是细菌性肺炎，肺炎链球菌是主要病原菌医院获得性肺炎的病原体50%以上是革兰阴性杆菌真菌性肺炎的常见菌以白假丝酵母菌为主，曲霉、毛霉和隐球菌也可见,第二节临床常见标本的细菌学检验,六、脓液（病灶分泌物）标本的细菌学检验（一）标本的采集,开放性脓肿,瘘管,1.拭子采集法开放性性脓肿2.沙布条采集法瘘管的放线菌感染3.注射器抽吸法封闭性脓肿4.标本运送与保存厌氧标本“床边接种”,第二节临床常见标本的细菌学检验,（二）微生物学检验1.常见病原菌,第二节临