土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案

土壤中降解尿素的细菌分离及其激素1，要素CO(NH2)2重要农业氮肥。必须被土壤中的细菌分解成NH3，才能被植物吸收使用。2，CO(NH2)2 H2O细菌脲酶CO2 2NH3一、研究思路(a)筛选菌株1、是-寻找高温DNA聚合酶美国科学家布鲁克(1966年)-在美国黄石公园的热泉里发现了耐热细菌。这表明搜索菌株过期了。2、实验室微生物筛选原理人类在提供营养、温度、pH等目的菌株生长的有利条件的同时，抑制或阻止其他微生物的生长。要分离一种微生物，必须根据营养、生理学、生长条件等微生物的特性，使用选择性培养分离的方法，或者抑制大部分微生物生长，或抑制有助于其生长的环境，培养一段时间后，增加群中该细菌的数量，然后通过平板稀释等方法分离纯培养。想：1、向微生物生长提供碳源和氮源的制造方法是？碳源：葡萄糖，尿素氮源：这个公式能筛选出产生脲酶的细菌吗？怎么了？可以。只有产生脲酶的细菌才能作为氮源存活。3、筛选菌株培养基KH2PO4 1.4gNaHPO4 2.1gMgSO4 H2O 0.2g葡萄糖10.0g元素1.0g琼脂15.0g溶解这些物质后，用蒸馏水到1000毫升，一定量。4、选择培养基：允许某些种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。想：1，1群体1生菌。2、殖民地数量的统计实际活细菌数量。3、稀释涂层板法需要反复实验，一般必须至少涂层三个板。4、重复实验结果小于30组。(b)殖民地数量统计：1、生物计算方法-稀释涂层板法(1)操作方法：稀释涂层平板统计殖民地数。(2)原则：殖民地活细菌。(3)统计原则选择30300殖民地平面统计。每种稀释度使用3个平板获得平均值。(4)统计结果：统计的群体数量比活细菌的实际数量多，因此统计结果一般用表示。每个样本的菌株数=。C:稀释度在板上生长的平均菌落数；V:中使用的稀释剂的体积；M:稀释倍数。2、显微镜直接计算(c)设置对照1、设定对照的目的：排除实验组中未测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可靠性。对照实验除了被测试的条件外，其他条件都是相同的实验。满足这一点作为对照组，不满足这一点称为实验组。科罗拉多号制造土壤溶液系列稀释涂层平板和培养实验组：对照组：设定对照组-在同等条件下培养空白培养基。四、实验设计(a)土壤取样1、土壤是天然培养基-微生物的数量、种类。2、土壤采样：(1)取样位置：7090%的土壤是细菌。富含有机物的土壤层3 8厘米处分布着多种细菌。(2)取样要求：表土铲。(1)，细菌数的测定：一般用104，105，106稀释剂。(b)样品稀释(2)，放线菌测定：一般为103，104，105稀释剂。原则：确保板块的殖民数量介于两者之间。(3)，测定霉菌的数量：一般使用102，103，104稀释剂。1、接种：使用适当的稀释剂作为涂层板2，培养：微细菌：3037，1 2d；(c)微生物培养和观察放线菌： 25 28，5 7d；真菌： 25 28，3 4d。3、观察：A.每24小时统计殖民地数量。原因：不同种类的微生物通常需要不同的培养温度和培养时间，每24小时计算一次菌落数，选择稳定的菌落数时作为结果记录，从而防止培养时间不足，种群数量缺失。B.以“稳定的殖民地”为观察对象。原因：不同种类细菌形成的菌落在大小、形状、光泽、颜色、硬度、透明度等方面一度是特征，菌落特性可以作为识别菌株的重要基础。(d)酚红鉴定培养基的鉴定：降解尿素的细菌鉴定。原则：脲酶催化尿素分解成氨培养基碱性酚红变成红色结论：这种细菌能分解尿素。注意：1、在特定培养条件下(相同培养基、温度和培养时间)，同种微生物表现出相同稳定的菌落特性。2、注意群体的形态、大小、边缘、突起、颜色、纹理等，都是区分细菌的重要手段。五、实验的具体操作(a)，无菌手术1、土壤取样从肥沃湿润的土壤中取样。先铲出3厘米表土药，然后重新取样，将样品装入事先准备好的信封。采土用小铲子和装土的信封在使用前必须杀菌。2、准备培养基：用唯一的氮源制造尿素的选择培养基。州为了确保正确的结果，一般在30334300的平面上计算群体的数量。为了接近结果，可以在3个或3个以上的板块上添加相同的稀释度，涂层后培养，计算殖民地的平均。统计菌落往往低于活细菌的实际数量。当两个或更多细胞连接在一起时，在板块上观察到的只是一个殖民地。因此，统计结果一般用群体的数量来表示，而不是用活细菌的数量来表示。，用铜版板法选择的背板的稀释度非常重要，一般3种稀释度中第二种稀释度也在背板上出现的平均殖民地数在50个左右是最好的。3、样品稀释：(1)，火焰旁边应该叫土壤10g。在装有90毫升无菌水的锥虫病上倒入好的土样，钉上棉签。(2)，在稀释土壤溶液的过程中，每一步在火焰旁进行。(3)分离不同的微生物使用不同的稀释程度，原因是不同的微生物在土壤中含有不同的量，目的是确保殖民地的数量在30到300之间，有适合计算的瓣膜。(。(4)，如果两个以上殖民地的数量得到了30334300的板块，稀释工作就比较成功，殖民地的数量也可能是可能的，如果相同稀释倍数重复的三个种群的数量大不相同，实验就不正确，需要重新实验。(b)，做好标记实验的时候要在培养皿上做标记。请注明培养基类型、培养时间、稀释程度、培养物等。2、装有一系列稀释菌的试管最好在试管架上从低到高放置。(c)，规划六、结果分析和评价1.通过对照组实验，如果有培养菌引起的污染，则种群数量较高。培养物混合在不同的氮源中，群体多种多样，群体数量高，很难选择分解元素的微生物。2.提示：选择每个平板上有30334300个菌落的稀释率，最适合计算每克样本中细菌的数量。相同稀释倍数的重复三个种群的数量不能相差太大，这意味着实验不准确。注：饮用水中大肠杆菌数的测定方法是将一定量的水作为细菌过滤器放入二红米蓝识别培养基中培养，然后大肠杆菌群菌落表示黑色，对此进行描述，从水样中导出大肠杆菌数。例1:土壤中的细菌能分解尿素是因为合成了一个()A.脲酶b .脲酶c .蛋白酶d .肽酶例2:为了分离能分解尿素的细菌，培养基中添加元素(唯一的氮源)在功能上属于。A.选择培养基b .固体培养基c .液体培养基d .半固体培养基例3:实验测定了链霉素对3种细菌的抗生素效果，并在用3种细菌预先准备的琼脂板上绘制了3条等长平行线(3条线都与图中的链霉菌接触)，在37 进行了3天的恒温培养。在实验结果分析中，以下叙述不正确的是()链霉素能阻止结核菌素的生长B.链霉素对结核菌比霍乱细菌更有效链霉素对结核菌比伤寒更有效链霉素可用于伤寒患者的治疗。例4:测定土壤中细菌的数量一般使用104，105，106倍稀释剂进行板培养，而测定霉菌的数量一般是使用102，103，104倍稀释剂的原因()A.细菌个人小，真菌个人容易稀释b .细菌，细菌不易稀释C.细菌比土壤中的真菌多d .是随机的。没有原因示例5:用于确定选择徽章是否起到选择作用的对比度是()A.未接种的选择培养基b .未接种的牛肉奶油蛋白胨培养基C.接种的牛肉奶油蛋白胨培养基d .接种的选择培养基例6:一般用于菌种鉴定的重要依据是()A.菌落b .细菌形态c .细菌体积d .细菌结构例7:可以选择分解尿素的细菌的下一个培养基是()A.kh2po 4，Na2HPO4，MgSO47H2O，葡萄糖，元素，琼脂，水B.kh2po 4，Na2HPO4，MgSO47H2O，葡萄糖，琼脂，水C.kh2po 4，Na2HPO4，MgSO47H2O，元素，琼脂，水D.kh2po 4，Na2HPO4，MgSO47H2O，牛肉奶油，蛋白胨，琼脂，水示例8:涂层平板操作过程中出错()A.在emared火上涂上涂布机，直到燃烧红色b为止。将少量液滴添加到培养基表面C.将沾有少量酒精的涂布机点燃火焰，燃烧酒精，冷却8 s 10 s后使用D.涂层时，可以旋转培养皿，使涂层均匀。例9:将尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养出能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色为()A.蓝色b .红色c .黑色d .棕色例10:微生物学中是指允许某些种类的微生物生长，同时阻止其他种类的微生物生长的媒介()A.识别徽章b .浓缩徽章c .选择徽章d .基础徽章例11:分离土壤中降解尿素的细菌，对培养基的要求是。没有元素没有元素琼脂没有葡萄糖和葡萄糖没有葡萄糖硝酸盐没有硝酸盐A.b .c .d .例12:寻找目的菌株时，要根据生存环境的要求在合适的环境中寻找，不属于厌氧菌的生存环境。()A.土壤深层b .人或动物寄生c .真空d .池塘淤泥例13:以下是对检测土壤中细菌总数的实验工作的叙述，其中错误的是。A.用蒸馏水制作牛肉软膏蛋白胨培养基，然后倒入高温高压灭菌后的盘子B.104，105，106倍的土壤稀释剂和灭菌水，每组涂0.1毫升C.颠倒实验组和对照组板，在37 进行24 48小时的恒温培养D.如果确定了对照组的无菌状态，则选择群体数超过300个的实验组板进行计数示例14:如何确定分解元素的细菌()A.以