土壤中微生物的分离与纯化

微生物实验报告实验名称：土壤中微生物的分离和纯化课程名称环境微生物实验环境科学与工程学院2011年环境科学专业课(1)学校编号姓刘联系信息2013年12月10日实验报告土壤微生物的分离与纯化刘(广东工业大学11年级环境科学一班)各种微生物生长所需的条件各不相同。根据需要，通过制备不同的培养基可以获得仅含有目标菌株的纯培养物。关键词：培养基选择、分离纯化一、实验的目的和要求1.阐明培养基制备的原理，掌握通过微生物培养基制备制备培养基的一般方法和步骤。2.掌握根据需要选择不同环境寻找目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步掌握微生物的无菌操作技术，掌握微生物培养方法和接种方法。二。实验方案1.实验原理培养基是根据各种微生物的生长需要人工配制的混合营养基质，用于培养或分离各种微生物。因此，培养基质应该具有微生物可以利用的营养成分(包括碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子)。)和水，取决于微生物的类型和实验目的地，培养基也具有不同的类型和配置。在土壤、水、空气、动物和植物中，绝大多数不同种类的微生物混合在一起。当我们想要获得某种微生物时，我们必须将它从混合微生物群中分离出来，以获得只含有这种微生物的纯培养物。这种获得纯培养物的方法被称为微生物的分离和纯化。为了获得某一微生物的纯培养物，通常是根据该微生物对营养、酸碱度、氧气等条件的不同要求，提供合适的培养条件，或者添加一些抑制剂，创造一个只利于该细菌生长而抑制其他细菌生长的环境，从而消除一些其他不必要的微生物，然后通过稀释涂布平板法、稀释混合平板法或划线平板法等方法分离纯化该微生物，直至获得纯菌株。2.实验材料1)培养基和试剂牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏2.0g，蛋白胨4.0g，氢氧化钠2.0g，琼脂6-8g，水400毫升。高1号培养基配方：可溶性淀粉4克，硝酸钾0.4克，磷酸氢二钾0.2克，硫酸镁0.2克，氯化钠0.2克，硫酸亚铁0.004克，琼脂6-8克，水400毫升。马铃薯蔗糖培养基配方：马铃薯80克，蔗糖8克，琼脂6-8克，水400毫升。马铃薯葡萄糖培养基配方：马铃薯80克，葡萄糖8克，琼脂6-8克，水400毫升。2)仪器和其他用品高压灭菌颜色。高压釜罐、洁净工作台、培养皿、移液管、250毫升锥形瓶、250毫升烧杯。玻璃珠、接种环、炼金术、显微镜、称重纸等。3.实验方法1)实验流程图培养基的制备消毒微生物的分离土样2)实验步骤A.土壤取样光宫正门对面的山坡已经可以使用了。B.培养基的制备C.消毒准备好的培养基，用报纸包裹的培养皿，用橡皮塞密封的装有9mL无菌水的试管，装有45mL蒸馏水和玻璃珠的锥形瓶，玻璃珠放入高压釜中进行高温蒸汽灭菌。D.微生物的分离(a)倒置平板使牛肉膏蛋白胨培养基、科氏1号琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基熔化。当冷却至55至60时，向科赫1号培养基中加入1毫升0.5%重铬酸钾，向马铃薯蔗糖培养基中加入1毫升1%链霉素，然后分别倒平板。b)准备土壤稀释剂，称取5克土壤样品，放入装有45毫升无菌水和玻璃珠的烧瓶中。摇摇约20分钟，使土壤样品与水充分混合，分散细菌，配制10-1份土壤溶液，将1毫升无菌吸管中的1毫升土壤悬浮液吸入盛有无菌水的试管中，吹吸3次使其充分混合，然后将试管中的1毫升土壤悬浮液吸入另一个盛有9mL无菌水的试管中，用无菌吸管依次配制10-2、10-3、10-4、10-5、10-6种不同稀释度的土壤溶液。c)微生物的分离操作步骤：u分离的细菌一、涂膜：用记号笔在两块牛肉膏蛋白胨板的底面分别涂上10-5倍和10-6倍的稀释液，然后用两根1毫升的无菌吸管分别从10-5倍和10-6倍的土壤稀释液中抽取200微升对，然后将板放入涂有稀释液的板中，加入8个无菌玻璃珠，轻轻摇动，涂膜均匀后倒出玻璃珠。二。在37温室中倒置培养12天分离的放线菌一、涂膜：用记号笔在高1号的两块板的底面分别书写10-3倍和10-4倍稀释液，然后用两根1毫升的无菌吸管分别从10-35倍和10-4倍的土壤稀释液中抽取200微升对，放入写有稀释液的板中，加入8个无菌玻璃珠，轻轻摇动，涂膜均匀，倒出玻璃珠。二。在37温室中倒置培养35天分离酵母和霉菌(如图1所示)一、涂膜，取两块葡萄糖和蔗糖平板，用记号笔在底面分别写下葡萄牙10-4、葡萄牙10-5、甘蔗10-4和甘蔗10-5的两种稀释液，然后用1毫升无菌吸管将10-4和10-5的两管土壤稀释液各200微升吸至写有稀释液的平板中，加入八个灭菌玻璃珠，轻轻摇动，涂膜均匀，然后倒出玻璃珠。二。在37温室中倒置培养35天E.细菌选择划线分离用接种环从待纯化的菌落中蘸取少量细菌，将细菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，将霉菌和酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基和马铃薯蔗糖琼脂培养基上，放线菌接种在高雪1号培养基上进行划线分离。F.菌种保藏图1。分离微生物的示意流程图三。实验结果在你测试的四个培养基平板上，菌落生长在哪一组？简要描述它们的菌落形态特征，并将菌落形态特征填入表1。答：科赫1号培养基上的菌落属于放线菌。它们的菌落形态特征是在菌落和较小菌落的背面有同心的圆形线条。马铃薯葡萄糖培养基和马铃薯蔗糖培养基上的菌落是霉菌和酵母，它们的菌落形态特征如下：酵母：菌落呈淡黄色，光滑半透明，比细菌菌落大。霉菌：菌落很大，肉眼可以看到许多毛发。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落为细菌，菌落形态为较小的圆形菌落和颗粒状。表1。菌落特征表图1。纯化细菌图2。纯化放线菌图3。纯化酵母图4。纯化霉菌四.问题和讨论1.如何确定平板上的单个菌落是否为纯培养？请写下实验的主要步骤。答：菌落形态的观察平板上各个菌落的形态是一致的，基本上可以确定为纯培养。使用革兰氏染色法确定是否使用接种环将少量细菌浸入菌落中，然后进行革兰氏染色以在显微镜下观察其是否为纯细菌。划线分离使用接种环从菌落中蘸取少量细菌，划线分离是通过在不同的培养基上接种不同的细菌来进行的。例如，将细菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，将霉菌和酵母接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基和马铃薯蔗糖琼脂培养基上，将放线菌接种在科赫1号培养基上进行划线分离。然后在合适的条件下培养，看看是否有杂菌。如果没有，它就被确定为纯文化。2.如果要分离酵母，最好在哪里取样？并解释原因。答：酵母是单细胞微生物，属于高等微生物的真菌，易于生长。酵母存在于空气、土壤、水和动物中。无论有没有氧气，你都可以生存。为了分离酵母，应该选择含有更多酵母和更少其他菌株的样品。尽管酵母在自然界分布广泛，但它主要生长在酸性和潮湿的含糖环境中。然而，腐烂水果中的酵母含量相对较高，所以可以考虑从腐烂水果中取样，如腐烂的葡萄和苹果。酵母可以在有氧和无氧环境中生存，属于兼性厌氧菌。相对高纯度的酵母也可以从酒糟中获得。五、经验掌握根据需要选择不同环境寻找目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步掌握微生物的无菌操作技术，掌握微生物培养方法和接种方法。培养基是在以前的微生物实验中制备的。然而，这个实验极大地提高了我对培养基制备的知识，并使我对培养基的制备原理有了更深的理解。通过微生物培养基的制备，我也掌握了制备培养基的一般方法和步骤。本实验中使用的培养基用于选择性培养。根据需要选择不同的环境可以帮助我们找到目标菌株。在实验过程中，