南方医科大学细胞生物学-第二章-研究方法

第一节显微镜技术,光学显微镜:观察显微结构（lightmicroscope)显微镜电子显微镜:观察亚微结构(electronmicroscope),第二章.细胞生物学研究方法,分辨率公式,n=介质折射率（空气1，水1.33，香柏油1.5）=标本对物镜镜口张角的半角，sin的最大值为1。=照明光源的波长，白光0.5m。,横向分辨率Rx,y=0.61/nsin,纵向分辨率Rz=2/(nsin)2,TechnologyforCellBiology,(一)普通光学显微镜的分辨率：0.2微米,一、光学显微镜技术,思考：如何提高显微镜的分辨能力？,人眼的分辨率：100m,不同光线的波长,名,称,波,长,(nm),可见光,760,-,390,紫外光,390,-,13,X,射线,13,-,0.05,射线,1,-,0.005,电子束,:,100V,0.123,10,000V,0.0122,100,000V,0.00387,（二）普通光学显微镜的成像原理,光镜的结构光学部分照明部分机械部分,在普通光学显微镜下，细胞结构呈半透明状，不易看清。,往往将标本切片进行染色提高可辨程度。,未染色,已染色,（三）荧光显微镜,以紫外线为光源，照射被检物体发出能观察到的荧光。,荧光显微镜显示同一细胞中的多种结构成分,细胞核,内质网,细胞骨架,（四）相差显微镜,通过致密部分(如细胞核),速度慢通过疏松部位(如细胞质),速度快,相位差(光程差),振幅差(明暗差),相差显微镜,倒置相差显微镜,载物台的上方：光源长焦距聚光器载物台的下方：物镜应用：直接对培养的细胞进行观察,体外培养的细胞(a)：正在分裂生长的Hela细胞(b)：CHO单层细胞的培养,用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。,(五)激光共聚焦显微镜,信噪比英文名称：signal-to-noiseratio;signaltonoiseratio定义：特定参数(信号)值与非特异性参数(噪声)的比值。如实验中样品的放射性与本底放射性强度之比；荧光在X射线底片上所造成的感光强度与非特异感光背景强度之比等,二、电子显微镜,1.透射电子显微镜,分辨率=0.1nm,2.扫描电子显微镜-标本表面的三维结构,显示细胞表面三维立体结构,显示细胞断面三维立体结构,电镜与光镜的比较,一.细胞组分的分级分离,第二节.细胞生物学其他研究方法,分离不同类型细胞,大小密度形状小轻不规则大重圆形,1.差速离心法方法：从高速到低速逐级沉降分离对象：体积、质量差别较大的颗粒,二细胞培养,（一）细胞培养从机体中取出组织或细胞，模拟体内的生理环境，使之能够继续生存的一种方法。（二）分类原代培养(primaryculture):直接从生物体获取细胞进行培养。传代培养(secondaryculture)：将原代培养的细胞以定比例扩大培养。,体外培养的细胞(a)：正在分裂生长的Hela细胞(b)：CHO单层细胞的培养,三、细胞融合（细胞杂交）1.概念：在自发或人工诱导下，相同或不同基因型细胞之间相互融合的过程。2.诱导因子：生物：仙台病毒化学：聚乙二醇物理：电脉冲3.分类：异核体：不同基因的细胞核融合同