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TechniquesinCellBiology,细胞生物学研究方法,光学显微镜技术（lightMicroscopy）电子显微镜技术(Electromicroscopy)扫描探针显微镜（ScanningProbeMicroscope）,第一节细胞形态结构的观察方法,一光学显微镜技术（lighticroscopy）,复合显微镜：现今使用的光学显微镜都是由几个透镜组合而成，所以又称为复合显微镜。,构成：（1）光学放大系统:（2）照明系统：（3）机械和支架系统,原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。,显微镜适合的放大倍数放大倍数：是眼睛看到像的大小与对应标本长度大小的比值。放大倍数目镜的放大倍数X物镜的放大倍数,人眼的分辨能力在0.1mm左右,固定：可使生物大分子交联，蛋白质成分凝固，防止细胞自溶和破坏而产生人工假象。常用固定剂：甲醛、戊二醛、乙醇包埋：便于切片，防止样品移位,常用包埋剂：石蜡切片：生物样品太厚，不能直接用光镜观察，需切成110m的薄片染色:苏木精对负电荷分子有亲和力，可显示细胞内核酸的分布伊红可使细胞质染色,2、光学显微镜的样品制备与观察,苏木精-伊红染色，又称“苏木素-伊红染色”，或“HT,胸腺嘧啶,A,氨基喋呤;可阻断内源性的DNA的合成。,单克隆抗体制备示意图,三细胞拆合及显微操作技术,细胞拆合方法：可以分为物理法和化学法两种类型。物理法：用机械方法或短波光把细胞核去掉或失活，然后用微吸管吸取其它细胞的核，注入去核的细胞质中，组成新的杂交细胞。这种核移植必须用显微操纵仪进行操作。化学法：用松胞素B处理细胞，细胞出现排核现象，再结合离心技术，将细胞分拆为核体和胞质体两部分。由于核体外表包有一层细胞膜和少量胞浆，因而在PEG或仙台病毒的介导下，核体可同另一胞质体融合，形成重组细胞。,细胞拆合：就是把核与质分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。,显微操作技术micromanipulationtechnique,在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置。,显微操作仪,现在显微操作装置的设计越来越精密，已经有可能对细胞核进行解剖和注入微量物质（如核酸分子片段）。,DNA,第四节模式生物,病毒细菌酵母线虫果蝇斑马鱼小鼠拟南芥玉米,C.elegans的优势在于为一种多细胞真核生物。雌雄同体成虫有959个体细胞；雄成虫有1031个。且每一个体细胞的发育情况都研究得较为清楚。这个细胞世系的规律在各个个体之间是几乎不变的。,在国际上，斑马鱼模式生物的使用正逐渐拓展和深入到生命体的多种系统（例如，神经系统、免疫系统、心血管系统、生殖系统等）的发育、功能和疾病（例如，神经退行性疾病、遗传性心血管疾病、糖尿病等）的研究中，
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