生物化学实验报告

实验一糖类的性质实验(1)糖类的颜色反应一、实验目的1 .了解糖类某种颜色反应的原理。2 .学习用糖的颜色反应来鉴别糖类的方法。二、颜色反应(1)-萘酚反应1、原糖在浓无机酸(硫酸、盐酸)的作用下脱水生成糠醛和糠醛衍生物，后者可生成-萘酚和紫红色物质。 糠醛和糠醛衍生物反应均为阳性，因此反应不是糖类的特异性反应。2、器材试管和试管，吸管3、试剂莫司试剂：测定5%-萘酚的醇溶液1500ml.萘酚5g，溶于95%醇中，总体积达到100 mL，贮藏于茶色瓶中。 在前面调和。1%葡萄糖溶液100 mL果糖1%溶液100 mL1%蔗糖溶液100 mL1%淀粉溶液100 mL0.1%糠醛溶液100 mL浓硫酸500 mL4 .实验操作取5根试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、0.1%糠醛溶液各1 mL。 再向5根试管中分别加入2滴莫氏试剂，充分混合。 倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢竖起试管，不要摇晃。 观察记录的各管的颜色。(2)间苯二酚反应1、原理在酸的作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者在间苯二酚的作用下生成红色物质。 这种反应是酮糖的特异性反应。 醛糖在相同条件下显色反应慢，仅在糖浓度高或煮沸时间长时，才显示微弱的阳性反应。 实验条件下蔗糖可能水解呈阳性反应。2、器材试管和试管，吸管3、试剂塞氏试剂：将0.05%间苯二酚盐酸溶液1000 mL、间苯二酚0.05 g溶解于浓盐酸30 mL中，用蒸馏水稀释至1000 mL。1%葡萄糖溶液100 mL果糖1%溶液100 mL1%蔗糖溶液100 mL4 .实验操作取3试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液0.5 mL。 并且，在3根试管中分别加入5 mL组合物试剂，充分混合。 把试管同时放入沸水浴。 观察记录的各管的颜色。(二)糖类还原作用一、实验目的1、了解和掌握糖类的还原性；2 .学习鉴定常用糖类还原性的方法。3、理解弗林先生、本尼迪克特试验法糖检的原理。二、实验原理还原糖是指含有葡萄糖等醛基或酮基(糖的情况)的单糖和乳糖或麦芽糖等二糖。 碱性溶液中还原糖还原Cu2、Hg2、Fe3、Ag等金属离子，糖本身被糖酸和其他生成物氧化。 糖类的这种性质常用于糖的定性定量。三、器材试管和试管，水浴锅电炉四、试剂1茶碱试剂甲液氢氧化钠质量分数为0.1 g/mL的溶液。 乙液硫酸铜质量分数为0.05 g/mL的溶液.2本尼迪克特试剂3 1%葡萄糖溶液100 mL4 1%果糖溶液100 mL5，1 %蔗糖溶液100 mL五项实验操作六思考问题菲林先生，本尼迪克特法检糖的原理是什么？2、弗林先生，比较一下本尼迪克特法的方法。实验二总糖的测定蒽酮比色法一、实验目的掌握蒽嵌苯法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、实验原理强酸将糖类脱水生成糠醛，将生成的糠醛或羟甲基乙醛与蒽酮脱水缩合形成糠醛衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处具有最大吸收。 在10-100ug的范围内，颜色的浓淡与可溶性糖的含量成正比。 该方法灵敏度高，糖含量可在30ug左右测定，可用于微量糖测定。 如果一般样品很少，采用这种方法是合适的。三、仪器、试剂和材料1 .设备(1)分光光度计(2)电子天平(3)三角瓶： 50m1 X 1(4)大试管： 9根(5)试管架、试管架(六)漏斗、漏斗架；(7)容量瓶： 50 m1 X 2(8)刻度吸管： 1m1x3、2m1x1、5ml1(9)水浴锅2 .试剂(1)葡萄糖标准液： l00ug/ml(2)浓硫酸(3)将蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶解于100ml浓度H2SO4中的日子进行调制后使用。3 .材料小麦分蘖节(或其他材料)。四、操作步骤1 .葡萄糖基准曲线的制作取7根大试管，根据下表数据制备一系列不同浓度葡萄糖溶液管理员1234567葡萄糖标准液(ml )00.10.20.30.40.60.8蒸馏水(ml )10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量(ug )0102030406080各试管立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸泡在冰水浴中冷却，加入各管后，一起浸泡在沸腾水浴中，在喷嘴上盖上玻璃球防止蒸发。 从水浴中煮沸后，将l0min正确煮沸取出，用水冷却，在室温下放置10min，在波长620 nm处比较颜色。 以标准葡萄糖含量(ug )为横轴，以吸光值为纵轴，制成了标准曲线。2 .从植物样品中提取可溶性糖将小麦分蘖节切成2mm以下，准确称量1g，放入50ml的三角烧瓶中，加入沸水25m1，水浴中煮沸10min，冷却过滤，滤液收集到50ml的容量烧瓶中，定容至刻度。 吸取萃取液2m1，放入另外50m1容量瓶中，用蒸馏水稀释决定容量，均匀测定。3 .测量将用lml稀释的萃取液放入大试管中，加入4.Oml蒽酮试剂，按照标准曲线制作以下操作。 记录比色波长620nm、吸光度，在检测线上检测葡萄糖含量(ug )。研究所得糖含量(ug )的稀释倍数五、结果处理六、注意事项1这种显色反应非常敏感，溶液中不要混入纸粉和灰尘。2 H 2 SO 4使用高纯度的。3糖类不同蒽醌的显色不同，稳定性也不同。 加热、比色时间要严格把握。七、思考问题1蒽酮比色测糖的原理是什么？2用水提取的糖类是什么？制作3葡萄糖基准曲线时应注意的事项是什么4分光光度计的原理是什么？需要注意什么？实验三粗脂肪的提取与定量测定实验的目的1 .学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。2 .熟悉和掌握重量分析的基本操作。 包括样品的处理、定量转移、干燥、恒重等。二实验原理本法采用重量法，用脂肪溶剂提取脂肪并称量。 该方法适用于固体和液体样品，通常将样品浸入醚、沸点为30-60度的石油醚等脂肪溶剂中，通过索氏萃取管进行循环萃取。 本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物，因其中含有脂肪、游离脂肪酸、磷脂、酯、甾体、芳香油、某些色素和有机酸等，故称为粗脂肪。用该方法测定样品的油分含量时，通常使用沸点不足60度的有机溶剂，但此时样品中结合状态的脂质(脂蛋白)无法直接萃取，因此该方法也称为游离脂质定量法。三种仪器、试剂和材料1 .设备索式萃取器、分析天平、烧杯、烤箱、干燥器、恒温水槽、脱脂棉、脱脂滤纸、镊子2试剂和材料石油醚芝麻和花生等油料种子。四、实验步骤1 .样品的准备用烤箱把花生摄取80度水分，干燥要避免过热。 冷却后，准确取1克左右放入乳钵，用滤纸包住样品放入索氏提取管内。 请注意不要使纸盒内的样品高于抽出管的虹吸部分，用滤纸擦拭研磨后的乳钵，将滤纸放入抽出管内，用少量溶剂洗涤乳钵，向抽出管中加入溶剂2 .提取2.1洗涤提取瓶以105度干燥至恒重，记录其重量。 加入石油醚到达萃取瓶容积的一半，连接萃取器的各部分，以免空气泄漏(不得使用凡士林或真空脂)。2.2加热萃取：使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，大致判断是否用滤纸完全萃取脂肪。2.3蒸发石油醚，干燥至恒重。3 .称重计算粗脂肪%=脂肪重量样品重量100%考试题1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？完成本考试应该注意什么？3、为什么不能在本实验装置的研磨口涂抹凡士林或真空脂实验四总氮量的测定克氏定氮法一、实验目的1 .学习微量凯氏定氮法的原理2 .掌握微量硅氏氮定量法的操作技术。 包括标准硫酸铵含量的测定、未知样品的消化、蒸馏、滴定及氮含量的计算等。二、实验原理蔡氏氮法常用于测定天然有机物(蛋白质、核酸、氮酸等)的氮含量。天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被二氧化碳和水氧化，氮变成氨，再与硫酸作用生成硫酸铵。 这时，这叫做“消化”。但是，这种反应进行得比较缓慢，为了提高反应的沸点，一般加入硫酸钾和硫酸钠，加入硫酸铜作为催化剂促进反应。浓碱分解消化液中的硫酸铵，游离氮，将产生的氨用水蒸气蒸馏一定量，硼酸在一定浓度的硼酸溶液中吸收氨，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，降低溶液中的氢离子浓度。 然后，用标准无机酸滴定，从最后使用的标准酸的当量数(相当于被测定物中的氨的当量数)算出被测定物中的氮量，直到溶液中的本来的氢离子浓度恢复为止。滴定中用亚甲蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2-5.6，终点是将NH4H2BO3的蓝滴到原来的H3BO3的蓝紫色。本法适用范围为：氮为0.2-1.0毫克。 相对误差必须小于2%。三、材料、试剂和器具(1)材料人的血清或猪的血清(2)试剂1、浓硫酸(化学纯)2，30 %氢氧化钠(分析纯)溶液3，0.9 % NaCl溶液4、硫酸钾-硫酸铜混合物：将硫酸钾和硫酸铜(CuSO4、5H2O )以3:1(W/W )的配比混合并粉碎.5，2 %硼酸6 .混合指示剂的制备：方法1 :将50毫升的0.1%亚甲蓝无水乙醇溶液与200毫升的0.1%甲红无水乙醇溶液混合配制，贮存于棕色瓶中。 该指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄，灵敏。方法：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10毫升与0.1%甲基乙醇溶液2毫升混合即可完成。本指示剂变色范围为紫红色、灰色、绿色7.0.01M HCl8 .硼酸一指示剂混合液：取100ml的2%硼酸溶液，滴加混合指示剂储存液，振荡后的溶液呈紫红色即可。 (加入约1毫升左右混合指示剂)9 .标准硫酸铵溶液(0.3mg氮/ml )(三)、器具1、凯氏烧瓶2 .消化系统3、吸管(1毫升，2毫升)4、量筒(10毫升)5、凯氏氮蒸馏装置6、微量滴定管(可读取3毫升、5毫升、0.02毫升)。七、玉米瓶(50-100毫升)8、容量瓶(50毫升)四、操作步骤样本处理血清样品：取人血(或猪血)，放入离心管，放入冰箱，次日离心除去凝血块，上层黄色透明清洗液为血清。 正确摄取血清1.0ml，加入0.9%NaCl 4.0，充分搅拌备用。固体样品：某固体样品中的氮含量以其物质100克(干重中所含氮的克数)表示。 因此，在固定氮之前，必须去除固体试料中的水分。 一般样品的干燥温度为105，不游离的水在100以下不能干燥。称量瓶中加入一定量的磨碎样品，在105的烘箱中干燥4小时。 用坩埚将计量瓶放入干燥器中，降低到室温后称量，通过上述操作继续进行样品的干燥。 每干燥1小时，称量2次的量不变，即称量到一定的重量。消化取两个50毫升凯氏烧瓶，在第一号烧瓶中加入2毫升稀释血清溶液(或核酸制品溶液4毫升，或固体粉末200毫克)。 注意：用吸管直接将溶液(或试管放入固体样品)放入烧瓶底部，不要装在瓶口或瓶颈上，在2号烧瓶中放入2毫升水作为空白对照。在各烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物约0.2克、浓硫酸3毫升、小陶片2粒，均匀振动。 将烧瓶的约60度角固定在铁架上，每个瓶口放入漏斗，用通风厨房的电炉消化。消化开始时，要控制火力，使液体不流入瓶颈。 等待瓶内水蒸气蒸发，硫酸分解放出SO2白烟后，适当加强火力，持续消化直到消化液变为透明绿色。 消化结束后，烧瓶的内容物冷却后，加入10毫升蒸馏水(请小心慢慢放入，横向摇动)。 冷却后，将瓶内容物转移到50毫升的容量瓶中，通过蒸馏将烧瓶水洗几次，将溶液合并后放入容量瓶中，最后确定容量直至刻度均匀，做好标记。(3)蒸馏1、设备清洗：设备应先清洗一般，再用水蒸气清洗。蒸馏器有几种类型，应用前要熟悉其使用方法。 使用方法如下打开水龙头，将水e放入g中，使其从k管流出(不要打开太多，以免水从g管溢出)。 打开P3，将水放入a室，漏斗d中放入约10毫升蒸馏水，放入b室。 用拇指一边按住喷嘴一边打开P1，b室的水首先从y型喷嘴中流出，然后a室的水通过k管流出，通常这样重复洗涤2次即可。 蒸馏器内存在氨气时，请加入蒸馏水后，不加样品进行一次蒸馏后使用。 (可用PH试纸检查。 中所述情节，对概念设计中的量体体积进行分析a为蒸汽发生室，P3为其开关，P1为出水开关，b为蒸馏室，遇到排气室m，m管插入装有定量酸液的锥形瓶，b室有y型管，一端通过a室，另一端通过P4与漏斗d相连，因此可以将样品和试剂放入b室，f为筛通过k流出，蒸馏时b室进入消化的样品和NaOH，两者的反应产生氨，b室通过m管吸收进入玉米瓶的酸。2、滴定标准样品首先，用标准硫酸铵溶液试验23次。 蒸馏器清洗后，打开水龙头P3，将水放入a室，将水放入a室的球部即可。取3瓶50毫升的玉米瓶，分别准确加入硼酸10毫升。 用正面盘子做备份。样品：用吸管吸入标准