生物胺的检测方法评价

生物胺检测方法评价引导生物胺是含氮的低分子化合物，对动植物和微生物有重要的生理作用。 适量的生物胺有助于人体的正常生理功能，过量会引起不良的生理反应。 目前国内外食品中生物胺的检测主要采用液相色谱法，一般只是组胺检测。 实际上，很多食品都含有其他生物胺(腐殖素、尸胺、胺、曲胺、尸胺、苯乙胺、章鱼胺)，其存在对组胺的毒性有协同作用。 因此，多组分生物胺的同时检测对食品安全和水产品出口具有重要意义。 本文对国内外常见生物胺的测定方法进行了阐述和比较。appraisalofbiiogenicaminesdeterminationliuchen-qidingzhuo-ping * wangxi-Chang(collegeoffoodscienceandtechnology，shanghaifisheriesuniversity 200090 )abstract : biogenicaminesarealiphatic， ailcychicrohiterocyclicorganibasesoflowmolecullarmass whichirisasaconsequeineofmetabolicprocessesinanimal plants和microorganiss.he atrallortoxiceferthentherareconsunconsinlargeamounts.ahighperforperformin phicmethodisdescribedbethemainmethodofdeterminingbient ly histamine.therearesallysitameomybiogenicaminetobedetermined，suchias:tryine，octopamine，phenylethylamine， putrescine cadaverine、tyramine、spermidine以及速度与速度之间的差异， bioningfulleandwhorkititismaningfulleandwhorkiticprodeforandfoodsafetythatdifferentkindsofbioigenicaminescanbedetermined一体化，在本文中thedifferedeterminitionmessolationossolefobiogenicaminesareintroducedandcompared .Key words: biogenic amines； 维基管理员(determination of biogenic amines )； 福德安全1引言生物胺是含氮的低分子量有机化合物的总称。 根据结构不同，可以将生物胺分为3种：脂肪族：腐殖素、尸胺、精氨酸、亚氨基丁等的芳香族：酪蛋白、苯乙胺等； 杂环族：组胺、5 -羟色胺等。1.1生理作用各种动植物的组织中含有少量生物胺，在很多食品、酒、饮料中也普遍存在。 生物胺不仅是产生激素、核酸、蛋白质的前体，也是产生致癌性物质的前体。 少量生物胺对人体有益，如儿茶素、组胺等可调节神经活动，控制血压的苯乙胺和酪蛋白具有升压作用。 过量的摄取会引起中毒。1.2生物胺对食品安全和水产品出口问题生物胺中组织胺对人类健康的影响最大，其次是酪蛋白。 摄取840mg组胺会产生轻微中毒症状，超过40mg会产生中度中毒症状，超过100mg会产生严重中毒症状。 酪氨酸超过lOOmg会引起偏头痛。 食品中生物胺含量达到1000mgkg-1，对人体健康有很大危害。 除了组胺、酪蛋白本身的作用外，其他生物胺的存在会增强组胺和酪蛋白的副作用。 因此，很难确定测定生物胺毒性的标准。 美国FDA通过组胺中毒大量数据的研究，确定食品中组胺的危害作用水平为：500mgkg-1的欧盟鲭科鱼类组胺含量不得超过100 mgkg-1，其他食品组胺不得超过100 mgkg-1， 酪蛋白规定不得超过100800mgkg-1的我国规定青花鱼中的组胺不得超过1000mgkg-1，其他海水鱼不得超过300 mgkg-11。 我国水产品出口企业如果不重视生物胺的检测，出口产品容易受到处罚，会造成严重的经济损失。2生物胺的检测方法胺的分析方法有HPLC、TLC和酶免疫分析等。 组胺等生物胺含有-NH2形成氢键，因此经常使用HPLC-FLD、HPLC-UV。 国内无法同时测定多种生物胺(8种以上)。2.1国内文献生物胺的测定方法2采用高效液相色谱法，以1，6 -己二胺为内标，测定柿子中精胺、亚精胺、尸胺和腐胺。 样品由磺酰氯衍生，经硅胶柱净化，经Lichrosorb NH2柱(5m，200mm4.0mm )分离后，氯仿：乙酸乙酯：三乙胺(98.4:1.5:0.1 ) 激发波长336nm、辐射波长495nm、精氨酸、亚氨酸、尸胺与腐殖素的线性相关系数均大于0.99，其回收率分别为98.99%、94.02%、96.46%、105.44%。 生物胺定量检出限15mgkg-12.2关于国外文献生物胺的测定方法2.2.1 7-氟-4-亚硝基苯并二唑柱前衍生/毛细管色谱-串联质谱法测定生物胺3生物胺用7 -氟-4-硝基苯并二唑(NBD )柱前导/毛细管色谱串联质谱法测定。 生物胺含有三聚氰胺、组胺、胍胺，进行诱导反应后，用毛细血管(20m*0.25mm C8 5m )分离，选择电喷雾离子，用碰撞诱导解离(CID )得到特征性的亚离子。 胍丁胺是一种潜在的神经递质。 胍丁胺的检测极限为0.6ngml1(s/n比=3)，在151000ngml1浓度的范围内，线性相关系数为0.9997。 该方法的优点是可以准确定量，但对仪器要求高，经济性和普及性差，测定胺种类少。2.2.2丹磺酰氯(Dansyl chloride )柱前诱导高效液相色谱法测定生物胺4 5用HPLC检测香肠中的色胺、苯乙胺、腐殖素、尸胺、组胺、5-羟色胺、酪蛋白、亚氨酸、精氨酸。 用高氯酸处理、氯化丹诱导后，用氨水去除尸胺附近的干扰峰。 C18反相列以梯度分离， 流动相为乙腈：甲醇：水：乙酸=4:335352535253525352535253525352535253525352535253525352535253525352535253525352535253525253525352525352535253525352535253 紫外检测器(=254nm )，流速为1.0mLmin-1，该方法对单胺的检出限为15mgkg1。 线性相关系数均应大于0.9999。 丹酸氯诱导法简单、可靠、实用，选择微波反应系统大大缩短了实验时间，诱导产物稳定。2.2.3苯甲酰氯(benzoyl chloride )柱前诱导高效液相色谱法测定生物胺6 7以苯甲酰氯为柱前衍生物，用HPLC检测生物胺是一种快速、敏锐的方法。 最佳诱导条件：30、40min； 线性范围为0.02-4g。 用三氯乙酸6%处理。 梯度洗脱(4min以内，甲醇：水=55:45至80:20 )，C18柱分离，紫外检测器检测(254nm )，流速为1.0mLmin-1。 该方法的主要特点类似于单宁酰氯衍生物法，产物稳定，实验简便。 但诱导时间长，样品中其他杂质与苯甲酰氯反应形成干扰峰。 预处理采用固相萃取，调整流动相极性对分离杂质峰和生物胺非常重要。2.2.4邻苯二甲醛(o-phthalaldehyde )柱后，高效液相色谱法测定生物胺8 9邻苯二甲醛(OPA )作为常用的柱后衍生物，其特征是诱导反应快，但生成物容易不稳定地分解，首先用乙酸乙酯从样品中提取生物胺，分离C18反相柱，梯度溶出(15min以内， 0.08molL-1乙酸：甲醇：乙酸胺=5233605336353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353 53535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353其检测极限在100300gL-1之间，直线范围为0.515mgL-1，柱温为：40。 流速为1.0mLmin-1。 该方法的特点是快速、灵敏、产物不稳定易分解，柱后需要在柱后添加引导装置，在实验室条件允许的情况下可以选择该方法。2.2.5荧光素柱后诱导高效液相色谱法测定生物胺8据国外的文献记载，荧光胺是为了检测酒中的生物胺而使用的。 对pH=8.0的硼酸缓冲溶液进行取样，充分混合，分离出C18反相柱，进行梯度溶出(在20min内， 0.08 molL-1乙酸：甲醇：乙酸胺=4833636363636306至0336353525352535253525352535253535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353 5353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353535353流速为1.0mLmin-1 . 用这个方法分离测定8种单胺的混合标准品只需要30分钟。 但是，在诱导过程中，双氨基和多氨基的生物胺会产生大量的吸收峰，影响分离，因此检测出的胺种类较少，有限。 荧光胺法的特点是快速、敏锐，类似于邻苯二甲醛法，但产物不稳定，增加柱后需要增加诱导装置。三结论国内外检测方法为HPLC，其衍生物多为丹宁、苯甲酰氯等柱前衍生物，其特点是简便、快速、敏锐、稳定，可同时处理大量样品，因此应用HPLC紫外检测器是一种普及的检测方法。据报道，荧光胺和OPA作为柱后衍生物，具有迅速、灵敏度高的特点，但生成物不稳定、分解快，需要使用柱后衍生物装置和荧光检测器，荧光胺多测定酒类中的生物胺，分离测定食品的种类有限。7 -氟4 -硝唑(NBD )柱前诱导/毛细管色谱串联质谱法测定生物胺也是一种可靠、敏锐的方法，但作为常规测定方法不太适合用于LC-MS/MS。由以上可知，对于方法的可靠性、成熟性、操作性，使用柱前衍生物单宁酸氯或氯苯甲酰、HPLC-UV法测定多个生物胺是合适的。参照文献：1李志军生物胺与食品安全J食品与发酵工业，2004，7，72吴荪丹等.理化检验B化学分册，2004，40 (2) :723Yaru Song，yaru song，yaru song，yaru song，yaru song，yaru song，josephl.Evans et al. j .enhancingcapillaryliquidchromatography/tandemasspectrometreyofbiiogenicaminsebypre-columnderivativewith7- fu loro-4-nitraobenzoxadiazole.rapid commun，mass spectrum 2004，114 Julia y.huistevel.Taylor. j .highphighpressupproselicchromatographicdeterminitionofputprofatreactiveactivicalinfoods.analysis5 Rosa M. Linares，Juan h.ayala anam.afonsonandvenerandonogonzlezdaz j rapid microwave-assistedansylationofbioigenicamins : analysisbyhigh-performenticalchromatography，journalofchromatographya.19906 gow-chinyenandchiu-Luan hsien， j .simultaneousanalysisofbiiogenicaminesincannedfishbyhplc.journaloffoodscience，1991，Volume 567 Deng-Fwu Hwang，sheng-hsiung Chang ch yuan-yuanshiuaetal. j .high-performenterproficedilicchromatographicdetermanitionofobionining8 carolbuteauandcyrielloui