免疫沉淀反应PPT参考幻灯片

沉淀反应PRECIPITATION,主讲人：XXX,1,何为沉淀反应？,概念：可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下而出现的沉淀现象。,可溶性Ag,相应Ab,2,沉淀反应,特点：抗原分子量小，是可溶性抗原抗原抗体复合物中主要有抗体组成反应时常稀释抗原反应结果以抗原的稀释度来判定效价,3,沉淀反应的分类：,液体内沉淀试验环状沉淀试验絮状沉淀试验免疫浊度沉淀,凝胶内沉淀试验单向琼脂扩散试验双向扩散试验,凝胶免疫电泳技术对流免疫电泳免疫电泳火箭免疫电泳免疫固定电泳,4,环状沉淀试验,【原理】：将Ag溶液叠加在细玻璃管内的Ab液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。【评价】：简便快速只能定性敏感性低目前多被其他方法替代,5,絮状沉淀试验,【原理】：可溶性Ag、Ab在液相中特异性结合，在电解质存在的条件下，形成絮状沉淀物。【方法】：玻片法、试管法【评价】：操作简单、无需特殊设备但灵敏低【临床意义】：测定抗原抗体反应最适比,6,7,在Ab浓度不变的情况下随着Ag浓度不断上升免疫沉淀反应变化如图所示,AbAg,Ag,各管Ag倍比稀释,加入抗血清,各管Ab量不变,振摇混匀、37孵育,沉淀量不同,轻摇,8,免疫浊度试验,9,透射比浊法和散射比浊法光路,检测器A,检测器B,IC,I0,I,I,透射比浊法,散射比浊法,10,1.透射比浊法（transmissionturbidimetry)2.散射比浊法（nephelometry)速率散射比浊法(ratenephelometry)终点散射比浊法(endpointnephelometry),11,单向琼脂扩散试验,试管法,平板法,抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。,12,Ab,Ag,试管法,13,试管法原理：把Ag液小心地加于已含Ab琼脂的细试管内，当对应的Ag与Ab相遇，在界面处形成清晰的乳白色沉淀环。,方法评价：敏感度较低、简便、快速、实用、只能定性不能定量、缺乏多对分辨力。,临床意义：排泄物和组织匀浆中的细菌、寄生虫、螺旋体的检测。,14,平板法,标准品抗原浓度测定,不同病人抗原浓度测定,原理,将一定量的Ab混入琼脂凝胶中，使待测Ag在凝胶中自由扩散，与相应Ab结合形成沉淀环，沉淀环大小与Ag浓度呈正相关。,15,1.测定沉淀环直径2.在标准曲线上查找相应抗原浓度,绘制标准曲线,16,影响因素,1.抗原分子量：与扩散速度、沉淀环反相关2.抗体种类：兔抗血清优于马、羊3.抗体稀释度：抗体浓度大沉淀环小4.扩散时间：抗原含量高，扩散时间长5.扩散温度：437内温度与扩散速度正相关6.琼脂板厚度：与沉淀环反相关,17,双向琼脂扩散试验,【原理】：将可溶性Ag和Ab置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当Ag与Ab相遇，在比例合适时形成沉淀线。,18,染色标本图,Ab,Ag,模拟图,1.抗原抗体双向自由扩散2.24小时出结果3.呈现沉淀线或弧,19,双向琼脂扩散试验的应用,1.检测未知抗原或抗体2.抗原性质分析3.抗体效价滴定4.抗原或抗体纯度鉴定,20,A:浓度Ag、Ab及扩散率近似B：浓度Ag、Ab近似，扩散率AgAbC：浓度Ag、Ab近似，扩散率AgAbD：浓度AgAb，扩散率近似E：浓度AgAb，扩散率AgAbF：浓度AgAb，扩散率AgAb,检测未知抗原或抗体,21,抗原性质分析,1表示待检Ag2表示标准Ag,完全吻合,1中含有与2有相同的Ag还有另外的Ag与Ab相对应,1有与Ab相对应的Ag，但与2不同,1与2性质相同但含量较低；,22,1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。,2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。,3.可进行任意稀释。,抗体效价滴定,Ag