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B7H4、CA125及P53在上皮性卵巢癌中的表达及意义作者：孔凡荣，王黎明，戴淑真，孙显璐，吕艳华 作者单位：青岛大学医学院附属医院 1.妇科; 2.病理科， 山东 青岛 【摘要】 目的 探讨B7H4、CA125及P53在原发上皮性卵巢癌（EOC）中的表达及其之间的相互关系，以及与预后的关系。方法 用免疫组织化学PV6000二步法测定B7H4、CA125及P53在70例上皮性卵巢癌、20例正常卵巢组织和20例良性卵巢肿瘤中的表达。结果 B7H4在原发上皮性卵巢癌组织中阳性表达率88.6% (62/70)高于卵巢良性上皮肿瘤（45%）及正常卵巢组织(0%)(P0.05)。上皮性卵巢癌组织中CA125阳性表达率为77.1%（54/70），与B7H4表达呈正相关（r=0.720）。上皮性卵巢癌组织P53阳性表达率为68.6%（48/70）低于B7H4（P0.05）。多因素Cox回归分析显示,上皮性卵巢癌的预后与FIGO分期、术后残癌灶大小、B7H4的表达、细胞分化程度、CA125的表达、淋巴结转移的有无及P53的表达相关；单因素分析显示，B7H4表达越强，平均生存时间越短，5年累积生存率越低。结论 上皮性卵巢癌中B7H4表达上调，且B7H4表达与CA125的表达呈正相关，高于P53的表达。B7H4为卵巢癌总生存期的独立危险因素，且有可能作为上皮性卵巢癌新的诊断和预后指标。 【关键词】 卵巢肿瘤；B7H4；蛋白质p53；预后ovarian cancer and their clinical value KONG Fanrong1,WANG Liming1,DAI Shuzhen1,SUN Xianlu2,L Yanhua1 (1. Department of Gynecology and obstetrics; 2. Department of Pathology, Affiliated Hospital of Medical College of Qingdao University, Qingdao 266003, Shandong, China) To investigate expressions of B7H4, CA125 and P53 in primary epithelial ovarian cancer (EOC) and to explore their relationship with prognosis. Methods Expressions of B7H4, CA125 and P53 were determined by PV6000 twostep immunohistochemistry in 70 cases of EOC, 20 cases of normal ovarian tissues and 20 cases of benign ovarian tumors. Results The positive rate of B7H4 in epithelial ovarian cancer was 88.5%(62/70), and it was significantly higher than that in benign ovarian epithelial tumors (45%) and normal ovarian tissues (0%) .The positive rate of CA125 in epithelial ovarian cancer was 77.1%, and it positively correlated with B7H4. The positive rate of P53 in epithelial ovarian cancer was 68.6% (48/70), and was significantly lower than B7H4 (P0.05). Multivariate COX regression analysis showed that prognosis of epithelial ovarian cancer was correlated with the FIGO stage, residual tumor size, B7H4s positive expression, cell differentiation, CA125s positive expression, P53s positive expression and lymph node metastasis. Single factor KaplanMeier analysis showed that the intensity the B7H4 positive expression was negatively correlated with the average survival time of patients and the cumulative fiveyear survival rates. Conclusion B7H4 overexpresses in epithelial ovarian cancer and positively correlates with CA125 and is higher than P53 expression. B7H4 is an independent risk factor of total life span of epithelial ovarian cancer patients. The stronger the B7H4 expression, the shorter the average life time and the lower the cumulative fiveyear survival rate. Key words: Ovarian neoplasms； B7H4； Protein p53； Prognosis 肿瘤细胞能逃逸机体的免疫监视，其发生发展与肿瘤细胞高表达B7分子有关，B7同源体4（B7 Homolog4 B7H4又称B7s1或B7x）是B7家族中的最新发现的一个新成员, B7H4在卵巢癌组织中高表达12。CA125是比较公认的原发性上皮性卵巢癌诊断及化疗效果检测指标。研究表明34P53蛋白在上皮性卵巢癌高表达，且P53蛋白可反映上皮性卵巢癌的分化程度，影响着肿瘤细胞的的生物学行为。本研究采用免疫组化PV6000二步法，分析70例上皮性卵巢癌组织中B7H4、CA125及P53的表达及与预后的关系。 1 资料与方法 1.1 临床资料 选取青岛大学医学院附属医院妇科2000年4月2007年4月间70例原发上皮性卵巢癌患者为研究对象， 1780岁，（48.715.2）岁；术前均未接受任何治疗。其中绝经34例；组织学分化：高分化13例、中分化19例、低分化38例；病理类型：浆液性腺癌37例、粘液性腺癌19例、宫内膜样癌8例、透明细胞癌6例；FIGO分期（2000年标准）：期26例、期6例，期34例、期4例。66例有详细随访资料，11例复发，4例失访，随访时间为891个月，平均34.6个月。随访截至2007年12月，至最后一次随访有28例带瘤生存，38例死亡。对照组选择同期因子宫肌瘤而行卵巢切除的患者20例和良性卵巢肿瘤20例。 1.2 肿瘤细胞减灭术后残癌灶的分组 根据所有的卵巢癌患者详细的病历手术记录记载，将术后残癌灶按直径分为3组：无残癌组，残癌直径02?cm组，残癌直径2?cm组。 1.3 实验试剂及方法 鼠抗人B7H4抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，鼠抗人P53及CA125单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化方法采用PV6000二步法（北京中杉金桥生物技术有限公司）按其试剂盒操作说明书进行，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 1.4 结果判定 B7H4及CA125以细胞浆及细胞膜出现棕黄色颗粒状物为阳性染色，P53以细胞核出现棕黄色颗粒状物为阳性染色。染色结果判断标准采用Fromowitz阳性细胞半定量分级法：阳性细胞数80%为4分；细胞染色强度，阴性为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据阳性细胞数与相应染色强度之和判定染色结果：01分为阴性(-)，25分为低表达(+） 2 结 果 2.1 卵巢上皮性癌组织中B7H4的表达 见表1。 B7H4蛋白在卵巢组织中呈细胞浆及细胞膜表达，在原发上皮性卵巢癌中呈弥漫性颗粒状染色，在良性卵巢肿瘤组织中呈稀疏弱点状表达，且在原发上皮性卵巢癌中阳性表达率为88.6%高于卵巢良性肿瘤阳性表达率45.0%（9/20）及正常卵巢组织零表达（0/20）， 两两比较均有统计学意义（P0.05）。 表1 B7H4在正常卵巢及卵巢良恶性肿瘤中的表达 2.2 B7H4与CA125及P53表达比较 B7H4蛋白在卵巢组织中呈细胞浆及细胞膜表达，CA125在原发上皮性卵巢癌组织中呈细胞浆及细胞膜表达，P53在原发上皮性卵巢癌组织中呈细胞核表达，见图1。70例原发上皮性卵巢癌中B7H4阳性表达率为88.6%（62/70）与CA125的阳性表达率77.1%（54/70）相比差异无统计意义（2=3.2，P0.05），其中B7H4与CA125协同表达51例，占72.8%，两者的表达强度呈正相关（r=0.720，P0.05）； P53的阳性率为68.6%（48/70），与B7H4阳性率88.6%相比差异有统计学意义（2=8.3，P0.05）。其中两者的协同表达42例，占60%，两者的表达强度无相关关系（r=0.24，P0.05），见表2。 表2 卵巢癌中B7H4及CA125、P53的表达比较 2.3 B7H4的表达与上皮性卵巢癌预后的关系 本实验中66例有确切随访资料的卵巢癌患者5年生存率为30.4%，B7H4表达强度与患者的平均生存时间和5年累积生存率均呈负相关，其中B7H4高表达组38例，术后中位生存期为25.3个月；B7H4低表达组22例，术后中位生存期为32.5个月；B7H4阴性组6例，术后中位生存期为45.2个月。B7H4高表达组5年累积生存率22.6%，低表达组的5年累积生存率32.5%，B7H4阴性组五年累积生存率38.7%，3者差异有统计学意义（2=6.554，P0.05），见图2。 上皮性卵巢癌中B7H4不同表达强度生存率函数曲线 3 讨 论 卵巢恶性肿瘤是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，其中恶性上皮性卵巢肿瘤占卵巢恶性肿瘤的90%，预后差，其5年存活率较低，徘徊在25%30%5， 早期发现与早期诊断有助于改善卵巢癌的预后。因此发现对卵巢癌有早期诊断价值，且特异强灵敏度高的肿瘤生物学标志，对改善卵巢癌预后及提高患者的生存率具有重要的临床意义。B7H4通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答，同时大量表达B7H4还可促进上皮细胞的恶性转化，保护上皮细胞免于失巢凋亡68。 本研究结果中，B7H4在原发上皮性卵巢癌中呈弥漫性颗粒状强表达，而在良性卵巢肿瘤中呈稀疏点滴状弱表达，卵巢癌中表达率显著高于正常卵巢及卵巢良性肿瘤中的无表达或低表达，说明B7H4可能为卵巢癌新的具有诊断价值的肿瘤标志物，可作为鉴别卵巢上皮性恶性肿瘤与良性肿瘤的指标。 CA125是比较公认的原发性上皮性卵巢癌诊断及化疗效果检测指标，本研究结果显示，B7H4与CA125表达率差异无统计学意义，且上皮性卵巢癌组织中B7H4与CA125的协同表达率为72.8%，且两者的表达呈正相关。Simon等9研究表明B7H4与CA125联合可诊断65%早期卵巢癌，B7H4在卵巢癌的表达不依赖与CA125，且联合检测B7H4和CA125可明显提高卵巢癌的早期诊断率，与本研究的结果不一致，需进一步的临床及实验研究来确定原发性上皮性卵巢癌中B7H4与CA125相互关系。P53蛋白是正常细胞增殖和分化的负调控因子，是一种最重要的抑癌基因，研究表明34P53蛋白在上皮性卵巢癌高表达，且P53蛋白可反映上皮性卵巢癌的分化程度，影响着肿瘤细胞的的生物学行为。本研究发现原发性上皮性卵巢癌中P53蛋白的表达率低于B7H4，两者的表达强度无明显的相关关系，提示上皮性卵巢癌组织中B7H4的表达不依赖与P53的表达。 文献报道临床分期、组织学类型、细胞分化程度、残癌灶大小、淋巴结转移等是影响卵巢癌预后的主要因素1012，本研究多因素分析还发现B7H4、P53及CA125的表达为卵巢癌预后的影响因素，但本研究没有发现组织学类型与上皮性卵巢癌患者的预后相关性。另外单因素分析发现B7H4为卵巢癌独立的预后影响因素，B7H4表达强度与患者的平均生存时间和5年累积生存率均呈负相关，B7H4表达越强，平均生存时间越短，5年累积生存率越低，说明B7H4表达与上皮性卵巢癌的预后有关，可以作为判定卵巢癌预后的一个较好的指标。 本研究证实了上皮性卵巢癌中B7H4表达上调，且为卵巢癌的预后独立的影响因素，可作为上皮性卵巢癌鉴别诊断、预后预测的指标。但B7H4在卵巢癌发生、发展中具体作用机制尚不十分明确，仍需要进一步的研究。晋升网（）致力于成为医务工作者晋升职称心灵导师；是目前国内收录医学期刊、医学杂志最多最权威的医学学术平台；提供免费医学期刊在线阅读；网罗和甄选海量优秀医学论文检索，独立研发医学在线资源分享库和医学在线模拟考试库；整合刊类、标题、关键词检索及全文检索，并独家研发刊社管理和刊社加盟系统、在线投稿、在线查稿、在线阅读、远程审稿、在线下载等系统；聚刊社力量，建服务平台，让晋升网通过“专业”走入每一个医务人员的身边是我们不懈的追求目标。【参考文献】 1 ZK(#Sica G L, Choi I H, Zhu G, et al. 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