动物微生物细菌病的实验室诊断方法

.,细菌病的实验室诊断方法,.,学习目标,知识目标掌握细菌病实验室诊断的方法理解利用各种诊断方法的进行鉴定的意义能力目标具备结合临床病例设计实验室诊断方案的能力,.,主要内容,病料的采集、保存和运送细菌的形态学检查细菌的分离培养生化试验动物接种血清学试验分子生物学技术,.,重点与难点,重点细菌病实验室诊断的方法难点设计实验方案,.,细菌病的实验室诊断,初诊：根据流行病学、症状、病变等方面的疾病特征，做出初步诊断,通过实验室诊断，确定病原是否是细菌以及病原菌的类型,实验室诊断是在临床诊断的基础上进行的,.,细菌病实验室诊断方法,病料的采集、保存和运送细菌的形态学检查细菌的分离培养生化试验动物接种血清学试验分子生物学技术,.,病料的采集、保存和运送,病料采集遵循的原则防止污染无菌采样适时采样适当部位病料采集方法（不同病料不同方法）实质脏器液体材料其他病料病料的保存和送检,.,防止污染,动物剖检个人防护和消毒动物尸体处理废弃物处理,.,动物剖检,剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检台。剖检前，动物尸体应浸泡消毒。,.,个人防护和消毒,做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护。剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。,.,动物尸体焚烧炉,深埋（投入消毒药）,动物尸体处理,焚烧或深埋：剖检后动物尸体和病料焚烧灭菌或消毒深埋。,.,处理不当会引起人和动物疫病的散播,动物或人的传染病,废弃物处理,.,无菌采样,目的防止病料被污染方法所用器械和器皿必须灭菌点燃酒精灯注意无菌操作,.,适时采样,细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物。死亡动物采集病料夏天不宜迟于68h，冬天不迟于24h。,.,适当部位,选择病料的部位可采用两个原则第一原则：根据疾病的类型和表现采集病变最典型的部位第二原则：一般采集正常无菌的部位,.,典型采样,.,实质脏器的采集,剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内。污染或剖开过久的被检器官：先烧烙表面，然后在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染色和细菌的分离培养。,.,液体病料的采集,脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入试管内，塞好棉塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂（每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml）。若需分离血清，则采血后放在灭菌的容器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。,.,其他病料的采集,皮肤要取有病变且带有一部分正常皮肤的部位。被毛或羽毛取病变明显部位，并带毛根放平皿。胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检。肠道及内容物需选择病变最明显的部分，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放平皿内。,.,细菌性病料的保存和送检,低温保存尽快送检做好记录畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验项目、采集时间等,.,细菌的形态学检查,方法光学显微镜检查电子显微镜检查意义观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断,.,细菌的分离培养,方法：用分区划线法在合适培养基上培养意义看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病依据菌落的特征判断细菌种类用菌落中的细菌进一步作形态学鉴定可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验可进一步作药敏试验,.,分离培养,通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行分离培养。不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。,.,分区划线法,.,不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同,不同细菌的菌落,.,溶血环,有的细菌在鲜血培养基上有-溶血现象,.,伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落,.,细菌的生化试验,进行生化试验的细菌必须是纯培养物。检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类。例：不同种沙门氏菌的生化鉴定,.,鸡白痢沙门氏菌,鸡伤寒沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,不同种沙门氏菌的生化鉴定,.,意义将待检细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。接种对象本动物试验动物接种途径,动物接种,.,常用的动物接种途径,.,血清学试验,临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。用已知抗体检测动物体内的病原菌用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体例：鸡白痢的检疫,.,1、加一滴抗原,2、加一滴鸡的全血,3、将抗原和血液混匀,4、静置2min,观察结果,鸡白痢检疫全血平板凝集试验,.,鸡白痢检疫结果,.,分子生物学方法,分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。PCR技术、核酸分子杂交技术等。,.,大肠杆菌病实验室诊断方案,病料中细菌的形态学检查,病料中细菌的分离培养,18小时后,动物致病性试验,涂片革兰氏染色,生化试验,H2S试验,糖发酵试验,MR试验,10日龄小鸡，皮下注射0.2ml/只,病料,纯培养,.,大肠杆菌病实验室诊断结果,剖检（采集病料）纤维素渗出物的涂片