临床检验基础实验指导

临床检查基础学实验指导血液检查一、微吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定和使用【实验目的】:掌握微移液管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、结构和使用。【实验试剂】:红细胞稀释液，75%乙醇，消毒药棉。【实验器材】: 一次性采血针、计数板、玻璃罩、微吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。【实验原理】:一次采血针刺破毛细血管后，用微量吸管吸取一定量的血液，稀释成一定的倍数，冲入计数池计数一定体积内的细胞数。【实验方法】:一、微吸管的使用：用抗凝血训练微吸管的使用。二、毛细血管采血(以红细胞数为例):准备：取一根清洁干燥试管，加入红细胞稀释液2ml。采血部位选择，按摩75%乙醇棉球刺针部位皮肤消毒酒精挥发干(否则血流不会落下)从指尖的腹内侧迅速地擦拭刺针正确地吸取第一滴血液用无菌干燥棉球按压伤口止血用无菌干燥棉球按压管的前端周边的多馀部分三、计数板的结构与应用1 .计数板结构外观结构：一块计数板用“h”型槽上下分为两个计数室，计数室两侧有支柱，比计数室高0.1mm，复盖平滑的血球计数专用玻璃罩(24.0mm20.0mm0.6mm )时，玻璃罩与计数室之间出现0.1mm的间隙。格子结构：计数池长度、宽度分别为3mm，平均分为9个大格子，各大格子的容积为0.1 mm3的四角的4个大格子分别用单线分为16个中格子，白细胞计数区域即中央格子用双线分为25个格子，各格子用单线分为16个格子2 .计数板的使用：用清洁干燥的柔软纱布擦拭计数板和盖玻璃从计数板的下缘按压盖玻璃盖在计数室充分混合细胞悬浊液游泳池静置观察细胞分布状况(严重不均时，重新填充游泳池)。 中所述情节，对概念设计中的量体体积进行分析【注意事项】:1 .采血部位应选择皮肤完整，无烧伤、冻伤、紫绀、水肿、炎症。2 .针刺迅速，深度应适当(约2-3mm )。 在血液流出之前，请擦去第一滴血。3 .微移液管抽血时，必须将微移液管的前端插入血滴的中央。 血液循环变差的话，左手可以从采血部位的远端向指尖施加一点压力，直到血液流出。 用力按压是禁忌，组织液混入，影响结果的准确性。4 .计数板在使用中，手指接触计数池和盖玻璃的表面，访问油污，填充液体时不得起泡。二、血涂片的制作，瑞氏染色【实验目的】:掌握血片的制作方法、瑞氏染色的原理和方法。【实验试剂】:瑞-吉氏复合染液(I液、ii液)【实验器材】:显微镜、载玻片、按压玻璃、一次性针、消毒棉球、洗耳球【实验原理】:细胞着色具有化学亲和性和物理吸附作用，细胞所含化学成分不同，化学性质不同，对染料的亲和力也不同，使细胞染成不同的颜色。【实验方法】:一、瑞一吉氏复合染液制备I液：取瑞特染粉1g、吉姆扎染粉0.3g，在干净的乳钵中加入少量甲醇(分析纯)，研磨一会儿，吸入上层染液，加入少量甲醇，继续研磨，吸入上层染液。 像这样连续数次共用甲醇500ml。 收集在茶色的瓶子里，每天早晚摇晃3 ，5天，再保管1周，可以过滤染色液使用。ii液：取磷酸缓冲液(PH6.56.8)、磷酸二氧化钾(无水)6.64g、磷酸氟化钠(无水)2.56g，加入少量蒸馏水溶解，调整PH后，加入1000ml水。二、血片制作、瑞氏染色方法准备：清洁干燥的载玻片，边缘光滑的按压玻璃片一片清洁。1、血涂片的制备：取下载玻片采血，在载玻片的右端留下1滴(边缘留有1.5cm的间隙)左手拿着载玻片，右手拿着按压玻璃在血滴的前端放置按压玻璃，血滴逐渐沿着按压玻璃散落后，按压玻璃与载玻片所成的角度2、染色：将干的血涂膜放置在水平位置加瑞吉氏复合染液I液数滴，用染液复盖整个血膜静置染液0.51min滴下液量的约2倍的ii液用耳清洗球吹出混合染色5-10min平持玻璃板用流线型水洗干燥镜检查【注意事项】:1 .严格的皮肤消毒。2 .血滴大，血粘度高，按压角度大，速度快血膜厚度薄。3、染料放置时间越长，美兰逐渐氧化为青蓝，染色效果越好。4 .染色液薄，室温低，细胞多染色时间长，相反染色时间短。5 .水洗方法请慢慢洗净带有平坦血涂膜的流线型水，不要丢弃染色液。三、白细胞计数(WBC )【实验目的】:掌握白细胞计数的原理、操作方法和结果报告。【实验原理】:用白细胞稀释液将全血稀释到一定倍数，破坏红细胞，填充到血细胞计数池中，用显微镜计数一定体积的白细胞数，换算后求出每升血液的白细胞数。【实验试剂】:白细胞稀释液【实验器材】: 显微镜、改良neu鲍尔计数板、试管、微吸管、玻璃棒【实验方法】:准备：取1根清洁干燥试管，加入白细胞稀释液0.38ml。采血部位按摩75%乙醇棉球针刺部位皮肤消毒酒精挥发干(否则血流不流) 从指尖腹部内侧快速刺针擦去第一滴血用无菌干燥棉球按压伤口止血用无菌干燥棉球擦去管子前端周边的多馀血后将血液轻轻放到稀释液的底部吸入上清液23次混合在室温下静置直至液体变成褐色的红细胞破坏完全计数计算： WBC=个网格内白细胞数(N)/41020106=N/20109/L【注意事项】:1 .采血部位应选择皮肤完整，无烧伤、冻伤、紫绀、水肿、炎症。2 .针刺迅速，深度应适当(约2-3mm )。 在血液流出之前，请擦去第一滴血。3 .过滤稀释液使用时，应清洁试管、计数板，以免异物误认为白细胞。4 .为保证稀释率，必须正确加入稀释液和血液量。5 .计数池内的细胞分布必须均匀，各方格间白细胞数的差别不得超过平均值的10%。6 .严格把握计数原则，以免人员扩大或缩小计数区域。7 .白细胞数过高时，可以增大稀释倍数，相反白细胞数过低时，可以计算8个大眼内白细胞数，或者增大采血量。四、白细胞分类计数(DC )【实验目的】:掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种白细胞的镜下形态。【实验原理】:涂抹血液，用瑞吉氏染色的显微镜根据白血球的形态特征进行分类计数。 通常，白血球分为100个，计算各个白血球所占的比例。【实验试剂】:瑞吉氏复合染液【实验器材】:显微镜、外周血标本片、香沥青、镜纸、洗涤剂【实验方法】:准备：血涂片的制备和瑞吉氏染色要干燥低倍镜下选择细胞分布均匀且着色良好区域旋转镜按一定规律移动视野，将100个白细胞分类计算各种白细胞的比例依次进行报告【注意事项】:1 .涂膜制备适度厚度，均匀，头体尾部清晰。2 .分类要程序性地连续进行，不要主观地选择视野。3 .分类中发现红细胞时，不能放入100个白细胞中，必须报告100个白细胞在分类中发现了多少红细胞，并明确记载其所属阶段4 .分类中应观察成熟红细胞、血小板的形态染色及其分布情况，注意寄生虫(疟原虫等)的有无及其他异常表现。五、白细胞计数(WBC )及分类计数(DC )【实验目的】:掌握白细胞计数和分类计数的原理、方法和结果报告【实验原理】:白细胞计数原理：用白细胞稀释液将全血稀释到一定倍数，破坏红细胞，填充到血细胞计数池中，用显微镜计数一定体积的白细胞数，换算后求出每升血液的白细胞数。白细胞分类计数原理：以血液为涂膜，在瑞吉氏染色后的显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。 通常，白血球分为100个，计算各个白血球所占的比例。【实验试剂】:白细胞稀释液，瑞吉氏复合染液【实验器材】:显微镜、改良neu鲍尔计数板、试管、微吸管、玻璃棒、载玻片、挤压玻璃板、香沥青、磨纸、洗涤剂【实验方法】:准备：1.取一根清洁干燥试管，加入白细胞稀释液0.38ml。2 .取出清洁干燥的载玻片，边缘光滑的按压玻璃片一片清洁。采血部位按摩75%乙醇棉球刺针部位皮肤消毒酒精挥发干(否则血流不会落下) 从指尖腹部内侧迅速地擦拭刺针擦拭第一滴血正确地吸取20ul的血液用无菌干燥棉球擦拭管的前端周边的馀血后将血液轻轻地放到稀释液的底部吸回上清液2-3次混合用别的采血滴到载玻片的右端立即按压血液膜清洁计数板，盖玻璃充电电池(静置2-3min细胞下沉)低倍镜下计数四角大眼内白血球总数对干透的血液膜进行瑞-吉氏染色油镜下分类计数计算报告。六、红细胞计数(RBC )、Hb测定【实验目的】:掌握红细胞计数、Hb测定原理、操作方法、规范的报告结果【实验原理】:红细胞计数原理：用等渗透稀释液将血液稀释成一滴的倍数，填充到计数池中，用显微镜计数一定体积内的红细胞数，换算求出内升血液中的红细胞数。Hb测定(HiCN法)原理：血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，后者与氰离子结合形成稳定的氰化血红蛋白(HiCN )，HiCN在规定波长(540nm )和液层厚度(1cm )条件下具有一定的毫摩尔消光系数。 用标准的高精度分光光度计直接定量，或用HiCN标准液比色法测定，可以从标本的吸光度求出血红蛋白浓度。【实验试剂】:红细胞稀释液(甲醛柠檬酸盐稀释液)、HiCN变换液【实验器材】: neu鲍尔计数板、显微镜、分光光度计、玻璃试管、微吸管、玻璃棒、【实验方法】:RBC :取下清洗干燥试管加入红细胞稀释液1.99ml加入未梢血10ul稀释液底部吸取上清液34次上下混合洗涤计数板玻璃罩填充液静置23计数(中央大格中的四角和正中的五方的各细胞数)计算RBC=5个中方眼细胞数510200106=5个中方眼细胞数1012/L。Hb测量：1 .直接定量测定法：中号试管一根HiCN转化液5ml未外周血20ul混合静置5721比色、波长540nm，将转化液作为空白对照管其吸光度 a计算( A”367.7)报告2 .标准曲线法：将血红蛋白标准液稀释成不同的3种浓度(150g/L、100g/L、50g/L )，测定各自的吸光度“a”，以“a”为纵轴，以血红蛋白标准液的基准值(g/L )为横轴，制作标准曲线。 根据标准曲线检测样品血红蛋白浓度。【注意事项】:1 .采血要顺利、准确，采血部位不得有烫伤、冻伤、紫绀、浮肿或炎症，不得过度压迫，红细胞数量明显增加者可适当增加稀释倍数。2. HiCN转化液是将茶色的瓶子放入4的冰箱中，不能在白色的瓶子、塑料瓶和强光下贮藏。 不那样的话CN-就会失去，结果很低。3.HiCN转化液有氧化钾剧毒，防止污染。 测定后的比色液不能与酸性溶液混合。 否则，会产生有毒的氰酸气体。4 .使用的分光光度计的波长吸光度需要修正，带宽为1nm以下，比杯子的光径为1.000cm时，测定温度为2025。七、血液检查【实验目的】:掌握血常规连续操作规程，规范报告结果。【实验原理】:参照实验2、3、4、6【实验试剂】:红细胞稀释液、白细胞稀释液、瑞吉氏复合染液、HiCN转化液【实验器材】:改良neu鲍尔计数板、分光光度计、玻璃试管、微吸管、显微镜、玻璃棒。【实验方法】:大、中，取小号试管各一根HiCN转化液5ml、红细胞稀释液2ml、白细胞稀释液0.38ml手指消毒针刺红细胞稀释液中外周血10ul、白细胞稀释液中20ul、hicn转化液中20ul然后马上混合取出干燥玻璃片玻璃片的一端正常值：成人儿童新生儿1.WBC : (4- 10 ) 109/l (5- 12 ) 109/l (15-20 ) 109/l成年男性成年女性儿童2.RBC : (4- 5.5 ) 1012/l (3.5-5 ) 1012/l (6-7) 1012/l3.HB :-165 g/l 110-150 g/l 170-200 g/l4.DC: N:棒状1-5%分叶50-70%L:20-40% M:3-8%e:0.55%、b:01%【注意事项】:采血要顺利、准确，采血部位不得有烫伤、冻伤、紫绀、水肿或炎症，不得过度压迫。2.HiCN转化液有巨大的氧化钾毒，防止污染。 测定后的比色液不能与酸性溶液混合。 否则，会产生有毒的氰酸气体。3 .细胞计数混合不太容易摇晃。4 .瑞氏染色时染液与缓冲液的比率为1:1或1:2。5 .取样顺序：红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血片制作八、血小板数(BPC或PLT )【实验目的】:掌握血小板计数原理、方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】:将血液用稀释液稀释成一定倍数后混合，填充到计数池中，用显微镜计数一定体积的血小板数，换算后求出每升血液的血小板数。【实验试剂】: 10g/L草酸铵液【实验器材】:显微镜、 neu鲍尔计数板的改良【实验方法】:准备：取1根清洁干燥的试管，加入10g/L草酸铵液0.3