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文档简介

回路参数等温扩增技术，胡星201505112015.10.20，主要内容，定义原理工作阶段的优缺点和定义，回路参数等温扩增技术(loop-mediatedisotheraLAMPlifation，lamp)将等温(loop-mediatedisotheraLAMPlifation，lamp是用肉眼直接观察白色沉淀或绿色荧光灯的测试结果，适合现场、基地的快速检测的方法。原理，放大启动阶段，FIPF3，(5):具有一个环结构(Fc1端5 端自由)的单个链，BIPB3，(8):具有两个环结构(F1端，3 端)对茎环结构(8)进行FIP退火，取代DNA合成反应的诱导链，生成结构(9)产物；然后，产物(9)的B1端自动用链取代DNA的合成，与产物(10)和茎环结构(8 )(与起始产物(8)序列互补)；BIPB1末端延伸以形成环形结构(F1末端为3 末端为自由)。将BIP退火到茎环结构(8 )中，诱导DNA合成反应，生成结构(9 )的产物；接着，产物(9 )的F1端3 端自动用链诱导合成DNA，生成产物(10 )和茎环结构(8 )，产物(8)开始新的循环扩增。扩展周期阶段，产品(10 )和(10 )分别为(11 )和(11 )；内部引物以(11)和(11)为模板，将DNA的合成诱导成链交替，并继续扩大、环化、再扩张产物的序列，最终产物是一些具有不同茎长的茎环结构的DNA和具有很多环的折叠结构的DNA的混合物。灯实验室日常运行阶段，优缺点，优点：灵敏度高(比传统PCR方法多2 5个阶段)；反应时间短(30 60分钟内完成反应)；临床使用不需要特殊仪器(工具包开发阶段推荐的实时浊度计)。操作很简单(无论是DNA还是RNA，在测试阶段，都要在反应管中混合反应液、酶、模板，在液锅或温控器中63 保温约30 60分钟，用肉眼观察结果)。缺点：灵敏度高，一旦打开盖子，就容易发生气溶胶污染，因此在工具包的研发过程中可以使用实时浊度计，反应后不要打开反应管。引物设计要求比较高，有些疾病的基因可能不适合使用环介导等温扩增法。应用，LAMP技术由于其快速、高效、特定、敏感和经济优势，已应用于病原体、寄生虫、病毒、疾病和转基因
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