大孔吸附树脂法.ppt

FractionationMerhodsofNaturalDrugs天然药物分离方法（2）大孔树脂吸附法,沈阳药科大学中药学院天然药物教研室王乃利,概述,中药有效成分的不断阐明中药现代化的要求当前用于中药纯化的主要技术：溶剂法：沉淀法：色谱法：大孔吸附树脂、离子交换树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶等超临界流体萃取法：超滤法：结晶法：,一、树脂简介,1、常用树脂的类型凝胶树脂大孔树脂离子交换树脂,2、离子交换树脂,离子交换树脂的种类,种类活性基团1强酸性磺酸基(SO3H)2弱酸性磷酸基(PO3H2)、羧酸基(COOH)3强碱性型：三甲基胺(-N+(CH3)3)型：二甲基乙醇胺(N+(CH3)2C2H4OH4弱碱性伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NHR)、叔氨基(-NR2)5两性强碱弱酸弱碱弱酸,3、大孔吸附树脂,目前国产树脂的主要类型,致孔剂：甲苯、石蜡、溶剂汽油、煤油、碳醇、聚乙烯醇等,国产大孔吸附树脂的主要型号、性能、生产企业,型号性能生产企业D-101非极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D-201弱极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D-301极性天津晶莹提取树脂有限责任公司HPD-100非极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD-300弱极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD-600极性河北沧州宝恩化工有限公司X-5非极性南开大学化工厂AB-8弱极性南开大学化工厂NKA-9极性南开大学化工厂,三菱化学的大孔吸附树脂,聚苯乙烯系列合成树脂：Diaion:HP20,HP21Sepabeads:SP825,SP850Sepabeads:SP70,SP700修饰的聚苯乙烯系列合成树脂:Sepabeads:SP207异丁烯系列合成树脂:Diaion:HP2MG,大孔吸附树脂的主要理化性质,颜色：白色、乳白色至微黄物理化学性质稳定，不溶于任何酸、碱及有机溶剂，加热不溶，可在150以下使用含水量：6080堆积密度：0.60.9,影响树脂性能的主要因素及国产树脂存在的主要问题,交联度比表面积吸附容量粒度分布强度,二、大孔吸附树脂的预处理,1、树脂预处理的方法回流提取法渗漉法水蒸气蒸馏法2、树脂预处理的溶剂乙醇丙酮异丙醇25盐酸25氢氧化钠,3、渗漉法纯化树脂,色谱柱：不锈钢柱；径高比为1:31:7装柱：湿法装柱洗脱溶剂：乙醇25盐酸25NaOH水甲醇25盐酸25NaOH水混合溶剂25盐酸25NaOH水洗脱方法：乙醇法：乙醇浸泡12h2BV洗脱浸泡35h2BV洗脱浸泡35h35BV洗脱浸泡35h35BV洗脱23BV盐酸浸泡24h洗脱水洗脱23BVNaOH浸泡24h洗脱水洗脱,混合溶剂法：混合溶剂浸泡12h2BV洗脱浸泡35h2BV洗脱浸泡35h35BV洗脱23BV盐酸浸泡24h洗脱水洗脱23BVNaOH浸泡24h洗脱水洗脱新方法：乙醇浸泡35h35BV乙醇洗脱23BV盐酸浸泡24h洗脱水洗脱23BVNaOH浸泡24h洗脱水洗脱,三、大孔吸附树脂的再生,再生溶剂的选择乙醇：5095甲醇：50100异丙醇：丙酮：50100碱性乙醇溶液：25盐酸：25NaOH：洗脱方法正洗脱：逆流洗脱：,四、大孔吸附树脂在新药研究中的应用,1、适用的新药类型,中药有效成分的粗分和精制单味中药有效部位的制备中药复方有效部位的制备注意：性质相似成分可混煎后一起制备各味药所含成分性质差别较大的复方应单独提取后，再制备单味药有效成分性质差别较大的应分别制备,2、成分的类型与树脂的选择,脂溶性成分包括甾体类、二萜、三萜、黄酮、木脂素、香豆素、生物碱等：应选择非极性或弱极性的树脂，如D101、AB-8、HPD100等皂苷和生物碱苷类成分：应选择弱极性或极性树脂，如D201、D301、HPD300、HPD600、AB-8、NKA-9等黄酮苷、蒽醌苷、木脂素苷、香豆素苷等：应选择合成原料中加有甲基丙烯酸甲酯或丙烯氰的树脂，如D201、D301、HPD600、NKA-9等环烯醚萜苷类成分：应选择极性树脂，如D301、HPD600、NKA-9等,3、树脂用于新药研究应考察的内容,(1)树脂型号的选择比吸附值考察分离性能考察(2)药材树脂比例的考察(3)色谱柱的径高比考察(4)洗脱溶剂的考察(5)吸附流速和洗脱流速考察(6)收集洗脱液量考察(7)树脂的使用寿命考察(8)工艺放大试验,4、树脂分离条件的正交试验,表头的设计,因素药材树脂色谱柱洗脱流速收集洗脱水平比例径高比BV/h液量11:11:31321:21:52531:31:737,实例一：某中药中苯乙醇苷类成分的分离、精制,该中药所含的成分：苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、多元醇、水溶性生物碱、单糖、双糖、氨基酸等,1、树脂型号的考察,2、树脂用量和吸附次数的考察,3、洗脱液乙醇浓度的考察,乙醇浓度20406080洗脱量9倍5倍4倍3倍检出杂质脂溶性脂溶性成分成分,4、收集洗脱液量的考察,第一次洗脱,第二次洗脱,洗脱溶剂水洗脱40乙醇洗脱收集量45TLC检测未检出糖难检出苯乙醇苷,洗脱溶剂水洗脱40乙醇洗脱收集量34TLC检测未检出糖难检出苯乙醇苷,实例二、某中药中黄酮苷类成分的分离、精制,1、树脂型号的考察,3、洗脱条件的正交试验,5、成品中有机残留物的限量检查,检查方法：气相色谱法检查成分：应根据树脂合成中所接触的有机成分确定检查成分测定方法：顶空进样或溶剂法含量限度：苯：2ppm；其它：20ppm方法学考察：溶剂的气相色谱检测基线噪音和最低检测限的测定对照品的测定供试品的测定,标准的书写格式色谱条件和系统适用性试验对照品溶液的制备供试品溶液的制备测定法起草说明,五、大孔吸附树脂在中药及植物提取物生产中的应用,1、槐花米中黄酮苷类成分的分离、纯化,槐花花穗9.9kg,MeOH提取36L,HP20吸附,MeOH溶解50-10L+100%-10L,LH-20吸附MeOH溶解,CHP20P吸附50%EtOH流份,ODS层析分离45%MeOH洗脱,3,4,5,7-四羟基黄酮-3-葡萄糖酸苷,2、大孔树脂在绞股蓝总皂苷精