支气管灌洗液的GM检测PPT课件

.,支气管肺泡灌洗液的曲霉菌半乳甘露聚糖检测（BALF-GM试验）,感染事业部李徐图.,目录,一、流行病学二、支气管肺泡灌洗液三、血清GM试验四、BALFGM试验五、影响检测结果的因素六、Question,.,肺曲霉菌病,图：曲霉菌和宿主之间的相互作用。ABPA：过敏性支气管肺曲霉菌病。IA：侵袭性曲霉菌病。,.,肺部感染是侵袭性曲霉菌感染的主要部位,SteinbachWJ,etal.JournalofInfection2012;65:453-464,PATHAlliance注册研究（包括美国和加拿大25个中心的前瞻性监测网络）中2004-2008年的960例侵袭性曲霉感染患者,多部位感染患者中81例有肺部感染，故全部人群中肺部感染的发生率为84.4%,肺气管支气管,.,支气管肺泡灌洗液,支气管肺泡灌洗液(BALF)是利用纤维支气管镜，对肺段和亚肺段进行灌洗后，采集肺泡表面衬液。通常由临床呼吸科医师经纤维支气管镜检查时采集。过滤、离心后，上清液做生化和免疫检测，沉淀做细胞检查。,.,曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）,GM试验：是目前检测IA的重要方法。曲霉在组织中侵袭血管内皮细胞、生长时释放入血循环和局部病灶。目前欧洲癌症研究和治疗组织侵袭性真菌感染协作组（EORTCMSG）指南推荐同一标本连续次GM阳性为微生物诊断标准，阳性阈值。文献报道IA宿主血清GM阳性早于出现呼吸道症状天，早于真菌培养阳性。,.,曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）,血清GM应用于IA的诊断仍存在一些问题，首先，GM只有在曲菌侵袭血管内皮细胞，生长时才释放入血液和局部病灶，临床上并不是所有IA伴血管侵犯：另外侵袭性肺曲霉病（invosivepulmonaryaspergillosis，IPA）患者影像学上有halo征仅见患者，而影像学上无halo征的IPA患者，GM敏感度只有。慢性肉芽肿疾病，危重症并发IPA和慢性呼吸道疾病并发IPA也不常见halo征，血清GM检测常为阴性。其次，GM测定值与抗真菌药物预防使用与否，患者免疫抑制的程度和性质，技术参数如监测的次数和参考的标准等因素有关。另有研究显示标本放置时间也可影响检测结果的重复性。GM同组织胞浆菌和新型隐球菌感染易有交叉反应，与内酰胺类抗生素有交叉反应等。临床上在解读血清GM结果上需综合考虑以上因素。,.,药物的影响,.,（1）使用了半合成青霉素，如哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸（2）与其他细菌或真菌成分有交叉反应（3）肠道中定植的曲霉释放GM进入血液（4）食物中存在GM（如大豆），通过受损肠粘膜进入血液（5）接受白蛋白、免疫球蛋白和其他营养液治疗（6）血液透析（7）接受心肺旁路手术（8）自身免疫性肝炎等免疫性疾病（9）新生儿和儿童（FP83%，与双歧杆菌交叉反应）,GM试验假阳性因素,.,GM试验假阴性因素,1）抗真菌药物使用（如两性霉素B、三唑类药物），可抑制菌丝生长从而减少GM分泌。2)病情较轻的患者。3）非粒细胞缺乏的患者。,.,BALF-GM试验,基于血清GM的缺陷，用BALF检测GM的报道也越来越多，Meersseman等研究提示以BALFGM的吸光度指数为阈值，诊断敏感度为，特异度为，而血清GM敏感度为。Park等研究也提示BALFGM敏感度为，血清GM敏感度为。,.,文献来源,BarnesRADirectedtherapyforfungalinfections：focusonaspergillosisJJAntimicrobChemother，（）：武宁，黄怡，李强侵袭性曲霉病诊断新进展J国际呼吸杂志，（）：DePauwB，WalshTJ，DonnellyJP，etalReviseddefinitionsofinvasivefungaldiseasefromtheEuropeanOrganizationforResearchandTreatmentofCancerInvasiveFungalInfectionsCooperativeGroupandtheNationalInstituteofAllergyandInfectiousDiseasesMycosesStudyGroup（EORTCMSG）ConsensusGroupJClinInfectDis，（）：VerweijPE，LatgJP，RijsAJ，etalComparisonofantigendetectionandPCRassayusingbronchoalveolarlavagefluidfordiagnosinginvasivepulmonaryaspergillosisinpatientsreceivingtreatmentforhematologicalmalignanciesJJClinMicrobiol，（）：PfeifferCD，FineJP，SafdarNDiagnosisofinvasiveaspergillosisusingagalactomannanassay：ametaanalysisJClinInfectDis，（）：LeeflangMM，DebetsOssenkoppYJ，VisserCE，etalGalactomannandetectionforinvasiveaspergillosisinimmunocompromizedpatientsJCochraneDatabaseSystRev，：CD孙文逵，张峰，徐小勇，等血清半乳甘露聚糖检测诊断侵袭性曲霉病价值的荟萃分析J，中华结核和呼吸杂志，（）：FranquetT，MllerNL，GimnezA，etalSpectrumofpulmonaryaspergillosis：histologic，clinical，andradiologicfindingsJRadiographics，（）：GreeneRE，SchlammHT，OestmannJW，etalImagingfindingsinacuteinvasivepulmonaryaspergillosis：clinicalsignificanceofthehalosignJClinInfectDis，（）：,.,文献来源,BrunoC，MinnitiS，VassanelliA，etalComparisonofCTfeaturesofAspergillusandbacterialpneumoniainseverelyneutropenicpatientsJJThoracImaging，（）：OrenI，AvidorI，SprecherHLackofintralaboratoryreproducibilityinusingPlateliaAspergillusenzymeimmunoassaytestfordetectionofAspergillusgalactomannanantigenletterJTransplInfectDis，（）：BizziniA，MarchettiO，MeylanPResponseto：lackofintralaboratoryreproducibilityinusingPlateliaAspergillusenzymeimmunoassaytestfordetectionofAspergillusgalactomannanantigenJTransplInfectDis，（）：MeerssemanW，LagrouK，MaertensJ，etalGalactomannaninbronchoalveolarlavagefluid：atoolfordiagnosingaspergillosisinintensivecareunitpatientsJAmJRespirCritCareMed，（）：ParkSY，LeeSO，ChoiSH，etalAspergillusgalactomannanantigenassayinbronchoalveolarlavagefluidfordiagnosisofinvasivepulmonaryaspergillosisJJInfect，（）：AffolterK，TammM，JahnK，etalGalactomannaninBronchoalveolarLavageforDiagnosingInvasiveFungalDiseaseJAmJRespirCritCareMed，（）：,.,BALF-GM试验最佳阈值,国内He等对例COPD患者并发IA的研究认为，BALFGM的吸光度指数诊断肺曲霉病的预测效力最佳，其诊断敏感度、特异度、阳性预计值、阴性预计值分别为，。近期的荟萃分析和meta分析建议BALF理想的阳性阈值定在，Prattes等研究慢性呼吸道疾病并发IPA，当BALFGM为阳性阈值时，敏感度，特异度，阳性预计值，阴性预测值，诊断比值比（diagnosticoddsratio，DOR）为；而BALFGM为阳性阈值时敏感度，特异度，阳性预计值，阴性预计值，DOR为，综上BALFGM时具有较高的敏感度和特异度。,.,文献来源,HeH，DingL，SunB，etalRoleofgalactomannandeterminationsinbronchoalveolarlavagefluidsamplesfromcriticallyillpatientswithchronicobstructivepulmonarydiseaseforthediagnosisofinvasivepulmonaryaspergillosis：aprospectivestudyJCritCare，（）：RZouM，TangL，ZhaoS，etalSystematicreviewandmetaanalysisofdetectinggalactomannaninbronchoalveolarlavagefluidfordiagnosinginvasiveaspergillosisJPLoSONE，（）：e3PrattesJ，FlickH，PrllerF，etalNovelTestsforDiagnosisofInvasiveAspergillosisinPatientswithUnderlyingRespiratoryDiseasesJAmJRespirCritCareMed，（）：,.,影响BALF-GM试验结果,-BALF-取材注意事项,.,原因-分析前,标本原因：一、BALF取材过程要求：1.未使用抗生素、未行抗菌治疗；2.在活检、刷检前进行灌洗；3.纤支镜需嵌入到（怀疑）致病的肺段或亚段支气管。4.灌洗总量50-150ml，每次25-50ml;5.负压小于100mmHg，（负压以调整到在吸引时支气管腔不塌陷为宜）。每次回吸收量应不低于灌入量的5（回收率以30为宜，40-60%最佳）。,.,原因-分析前,二、其它影响因素：1.呼吸道存在定值曲霉菌或青霉菌及BALF混入血液；2.粒细胞缺乏患者或非粒细胞缺乏患者。,.,取材要求,1.取首次灌洗回收液体10ml，无需离心。2.低温保存，及时送至实验室。3.使用无热源真空管（BD红头管）。,.,原因-分析中,.,原因-分析后,武汉康圣达医学检验所,北京