尿液红细胞及形态ppt课件

、尿红细胞和形态学检查、血尿概念、镜下血尿：用传统的尿离心沉渣玻璃片，在高倍镜下检查10个视野后，决定每高倍视野红细胞超过35个为镜下血尿。 肉眼血尿：严重者尿呈肉水样或血色，称肉眼血尿。 尿红细胞的检测方法、干化学分析法、显微镜检查法(镜检)自动化尿沉渣分析法、单克隆抗体免疫法、干化学法、原理：尿中红细胞内血红蛋白及其破坏释放的血红蛋白具有过氧化物酶活性，过氧化物和过氧化物钴释放出新的生态氧，后者相关因此，红血球和游离血红蛋白都可以检测出来，也可以作为红血球镜检查的筛选方法。 不足：吩噻嗪类和吩嗪类药物、肌红蛋白、热不稳定酶、氧化剂和细菌过氧化酶、尿pH值高，阴血可假阳性。 尿中维生素c大量存在时，通过竞争性抑制反应，干化学隐血变为假阴性。 显微镜检查法(镜检)、尿沉渣镜检查标准如下：医生提出镜检或患者诉求，体征可能在尿沉渣中出现红、白细胞以外的有形成分，如结晶、异常细胞等引起泌尿系统疾病或肾脏并发症的疾病尿色、浊度、蛋白、亚硝酸盐、红细胞、白细胞中存在任何异常者。 关于干化学筛查后的镜检问题，国内学者有争议，有学者认为镜检是尿沉渣分析的参考标准，其重要意义无法取代任何方法。 只要有条件，镜检所有标本是最好的。 尿红血球镜检查是尿红细胞检查的参考标准。 其不足是部分红细胞长时间滞留于肾脏，因机械作用破碎或在血管内溶血而形成Hb尿，无法检测标准化尿沉渣镜检查的操作比较繁琐(标准化操作步骤：新鲜尿10ml，1500r/min离心5min后残留尿沉渣0.2ml，将尿沉渣作为标准尿沉渣为了得到正确的试验结果，除了培训熟练的技术人员外，还需要对使用的试验器材(标本收集器、离心分离机及计数板)进行标准化。 自动尿沉渣分析装置、UF-100尿沉渣分析装置对尿中有形成分直接进行荧光染色，利用流式细胞仪的原理，利用前向散射光强度(Fsc )、前向散射光脉冲宽度(Fscw )、荧光强度(Fls )、荧光脉冲宽度(Flw )及细胞电阻等参数测定尿中有形成分的大小、长度、染色状况在红细胞检测中，UF-100的一个特点是同时提供尿红细胞均匀型和非均匀型的指标，对鉴别尿红细胞的来源有很大参考价值。 结晶、菌尿(草酸钙结晶和霉菌)引起假阳性，红细胞碎片和阴影红细胞对普通红细胞荧光染色灵敏度降低，荧光强度弱，引起检漏。 单克隆抗体免疫法可以使尿中的红细胞或Hb与试剂中的单克隆抗体结合显色。 其优点是灵敏度高，特异性好。 设红细胞Hb的含量为30pg时，可以检测出尿中含有2个/l红细胞(相当于0.5/hfp )。 其特异性仅与人Hb反应，假阳性率较低。 因为过于敏感，正常人的尿中含有红细胞(03/HFP )时会有反应。 因此，不适合常规尿红细胞检查。 但常规镜检和干化学法结果不能说明，如尿中红细胞溶解和受某种物质干扰的干化学检查阳性，镜检未发现红细胞，单克隆抗体免疫法可为尿中红细胞性质提供鉴别诊断依据。 综合评价、尿红血球镜检查是尿红血球检查的参考标准，但无法检测出溶于尿的红血球。干化学法不仅能检测出Hb，有助于溶血性疾病的诊断，而且能弥补镜检不能检测出破坏的红血球的缺点，也可以作为尿红细胞镜检查的筛选方法。 必须重视尿液分析仪和试剂带的质量以及工作中可能发生的干扰因素。综合评价、单克隆抗体免疫法检测尿红细胞非常敏感、特异性强，但过于敏感，无法解释常规检测中不能使用的镜检和干化学法检测结果时，具有重要的鉴别诊断价值。 尿流式细胞仪检查不仅对尿红细胞的定量分析有意义，而且可以分析尿红细胞的形态，确定血尿来源。 但分析过程容易受酵母菌、精子等某些因素的干扰，仪表发出警报时，应通过镜检确认。 尿红细胞形态学检查主要用于肾性血尿和非肾性血尿的鉴别。 主要方法有普通光镜、相位差显微镜、扫描电子显微镜、血液分析仪、尿有形成分分析仪等。 普通光镜检查通常在高倍镜下(400倍)识别非染色细胞形态的方法缺乏颜色对比度和立体感，要求观察者具有熟练的尿形态学经验。 采用染色法(甲基绿染色、结晶紫黄染色或瑞氏染色)可增加形态鉴别的特征。 相位差显微镜检查，1968年，Kark研究小组开始用相位差显微镜观察尿细胞等形态，1979年澳大利亚肾病学家Birch和Fairly应用于临床。 相差显微镜是红细胞立体感强、目前检测尿红细胞形态的最常用方法。 扫描电镜，1983年Fasseff用扫描电镜观察尿红细胞。 立体感强，可敏感观察红细胞表面微妙变化。 但是价格昂贵，难以在临床上普及。 尿有形成分分析仪，1995年，日本以流式细胞术为原理的尿分析仪SysmexUF-100，可以对尿中成分进行荧光染色识别，肾性红细胞的话，散射光分布在图像的左侧，非肾性红细胞位于图像的右侧，可以有效地区别血尿源。 血液分析仪，测定尿红细胞的平均体积(MCV ) :肾红细胞以小型为主，MCV小于血MCV的MCV72fl； 非肾性红细胞以正常为主，MCV大于血MCV。 但是，请注意，使用MCV可以消除其他粒子的干扰。 观察红细胞体积分布图(RDW ) :具有客观、快速、准确、重现性好的特点。畸形红细胞分类、大红细胞：细胞增大、中心淡、无双盘凹陷感。 小红细胞：细胞小，外膜厚，折射增强。 棘红细胞：细胞质始终向一侧或多侧伸展，突起，如芽。 环红细胞(环红细胞):细胞内的血红蛋白丢失，细胞浆聚集，形成环状的中空环状。 新月形红细胞：红细胞像半月形。 颗粒红细胞：细胞质内有颗粒状间歇沉积，血红蛋白丢失。 萎缩红细胞：常见于高渗尿。 影红细胞：多见于低渗尿。 红细胞碎片、尿异形红细胞的形态形成机制，红细胞通过病理变化的肾小球滤膜，受到压迫损伤红细胞受到不同pH和渗透压持续变化的肾小管滤液的影响：肾性血尿中红细胞本身受到损伤，其形态发生变化，易受肾小管滤液pH和渗透压变化的影响。 非肾性血尿没有红细胞通过肾小球滤过损伤的前提，而且红细胞通过肾小球滤过的时间短，滤液pH和渗透压变化的影响小，红细胞形态正常或均匀轻度变化。判断界限、非肾小球性血尿：均匀红细胞80%、畸形红细胞80%。 红血球呈多形性，如粗棘状、菜花状、假足状、甜甜圈状则极端萎缩、极端膨胀或呈破片状等。 混合性红细胞血尿：畸形红细胞20%、80%，混合性血尿。影响因素碱性(pH9.0)尿中红细胞膜脂质的外层表面增加，出现锯齿状红细胞和棘状红细胞酸性(pH4.0)尿中红细胞膜脂质的内层表面增加，可逆接头红细胞和细胞溶解、破坏渗透压低( 900mmol/L )且pH增加，形成锯齿状、棘状红细胞。标本要求pH和尿渗透压对RBC形态有影响，因此采样时要求受试者在检查前水，使尿在膀胱中停留6小时，严格采取中段早尿，减小pH和尿渗透压对结果的影响，使结果可以进行比较。 取出刻度离心管，加入混合的新鲜尿10ml、400g离心力，离心力5min，离心力停止后，取出离心管，丢弃上层的清夜，残留0.2ml沉渣，轻轻摇动离心管，使尿有形成分充分混合。 取尿沉渣0.02ml，滴入载玻片，用18mm18mm的玻璃罩复盖观察。 临床意义，肾性血尿疾病主要包括膜性肾小球肾炎、IgA肾病、狼疮性肾炎、局限性肾硬化、系统性血管炎、肾淀粉样变等。 非肾性血尿疾病主要有肾结石病、尿道肿瘤、前列腺增生等。尿红细胞形态检查时应注意的问题有： 1、尿中畸形红细胞增多，但形态单一可能引起肾小球性血尿的单纯尿pH、渗透压的变化也可能引起尿红细胞畸形，在这种情况下，尿畸形红细胞为单一形态。 尿红细胞在酸性尿中肿胀呈球状、口形的碱性尿中的血红蛋白溶解损失呈锯齿状、影形的尿红细胞在高渗透环境下细胞浆的粘性增加，适应性降低，在萎缩形的低渗透环境下细胞表面积和体积比上升，过滤阻力降低，稀释的血红蛋白向细胞外漏出，呈环状因此，尿中畸形红细胞增多，但形态单一不能诊断肾小球性血尿的肾小球性血尿的特征是尿中出现多种形态的畸形红细胞，畸形红细胞的数量明显增加。 2、尿畸形红细胞不仅是肾小球性疾病特有的尿畸形红细胞，而且正常人尿中的红细胞是畸形红细胞，但其数量在5106/L以下。 因此，肾小球性血尿诊断的前提条件是尿红细胞数多于8106/L。 另外，尿路感染患者的尿红细胞体积分布曲线也呈肾小球性分布。 3、肾小球性疾病也是非畸形红细胞性血尿严重的肾功能衰竭患者，由于肾小球管内渗透压梯度的丧失和肾小球基底膜的严重破坏，尿红细胞呈正常形态。 4、尿中红细胞数量每倍(400倍)尿中红细胞高度的视野少于3040个，影响尿红细胞形态检查血尿定位诊断的可靠性。 近期本科新开展的项目为24小时尿蛋白定量OGTT试验尿红细胞形态检测血液、尿、痰培养、24小时尿蛋白定量标本采集方法，准确收集24小时尿：如早上7点起床解尿，不可弃。 7点以后的尿全部收集放入干净的容器中，第二天早上7点前，第一次小便放入容器后，加入防腐剂(甲苯)。 门诊病人将尿液全部送到检查室的体液检查窗口。 住院患者将全部尿送往护理站，混合总尿量测定后，取尿10-20ml放入一次性尿杯，在检查室检查，必须在检查单上记录总尿量。 注意：甲苯类有机溶剂不得与塑料产品直接接触。OGTT试验，WHO建议成人75g葡萄糖，孕妇100g，儿童1.75g/kg体重，总量不超过75g葡萄糖，用250ml水溶解，5分钟内口服。 取样：口服糖前，0.5、1、2、3h抽静脉血测定GLU，取尿样检测尿糖。 试验期间不得吸烟、喝茶、吃饭，尿培养标本采集方法，标本采集：使用抗菌药物前或不使用抗菌药物5d后需要采集尿标本的尿在膀胱内停留68小时以上。清洁排尿方法：女性患者用手指分阴唇，用肥皂水或碘伏清洗外阴，然后用清水洗净尿道口周围，擦拭前尿后，用无菌容器取中段尿的男性患者将包皮翻过来洗净，用碘伏或1:1000的螺钉消毒尿道口，排出前段尿后，用无菌容器取中段尿标本运输：标本采集后立即送检，努力在1h内送检科微生物室。痰培养的标本采集、自然咯痰法：要求患者清晨取样，取样前用清水漱口3次，然后强烈吐出气管深部的痰液。 咳痰困难者可用雾化蒸汽吸，利痰液咳嗽。 幼儿用手指轻敲胸骨柄上可诱发咯痰。 注意事项：留痰前不要打开无菌容器。 留痰时不要碰容器内层。 请在留痰后立即送检，并确保1小时内送到检查科的微生物室。 采集血液培养标本，采血时间：患者发热越早越好，抗菌治疗之前，发冷发热或发冷发热的前半段时间越好。 采血部位：多次采血，穿刺不同部位血管排除皮肤菌污染的可能性。 为了避免从血管插管和静脉留置针内采血，插管