微生物学实验指导(8个)

上课时间学时间力课程名称：微生物学(实验部分)讲座学期：2010-2011学年第一学期周藩实践项目和名称时间3实验培养基的制备及杀菌34实验二次镜的使用及常见细菌形态观察35实验3细菌运动观察及革兰染色37实验四酵母、真菌个体和菌落特性38实验5土壤微生物的分离纯化39实验6真菌孢子数的测定311实验7温度对微生物生长的影响313实验8淀粉水解试验3实验培养基的制备及杀菌一、实验目的1.学习和掌握培养基制造的一般方法和步骤掌握蒸压的原理和工作方法。3.学做棉签二、实验原理1.徽章准备的一般原则蒸压原理强调温度，而不是压力三、实验材料和工具药物：牛肉奶油、蛋白胨、琼脂、氯化钠、可溶性淀粉、葡萄糖、土豆、硝酸钾、磷酸二钾、硫酸镁、硫酸铁仪器：试管、三角瓶、铁架、烧杯、量杯、玻璃棒、锅、秤、药勺、PH试卷、棉、牛皮纸、标记笔、纱布、钢丝绳、高压灭菌锅四、实验方法和步骤计量溶解固定容量 ph调整拆分塞绷带灭菌倾斜摆动无菌检查注意事项1。琼脂等药品添加注意事项(牛肉奶油，高氏1号，PDA)2.安装注意事项和演示3.灭菌水加载排气增压压缩降压灭菌检查五、实验演示1.徽章分配方法2.面塞的制作试管坡度待定六、作业和思考实验报告集团：牛肉奶油蛋白胨培养基1500ml 40斜面剩余三角瓶高1徽章1500ml 30倾斜剩余三角瓶PDA徽章2000ml 60斜边剩余三角瓶淀粉水解培养基1000ml 8斜剩余三角瓶同时无菌水“更好”实验二次镜的使用及常见细菌形态观察一、实验目的1.掌握细菌基本形态和特殊结构的观察方法。2.熟悉光镜油镜的使用和维护方法，了解荧光显微镜和暗视场显微镜的结构和使用方法。二、实验原理1.油镜使用原理图1-2显微镜油镜的使用原理由于球和空气的折射率不同(例如玻璃n=1.52，空气n=1.0)，因此天球的比例高，镜头小，因此镜头的比例高，镜头不进入镜头，光线少，图像不清晰。镜子和玻璃折射度相似的焚香节(n=1.515)下降，进入镜子的光线更多，视野的亮度更高，图像更清晰(请参见图1-2)。三、实验材料和工具1.教学电影：各种球菌、真菌、弧菌、胶囊、鞭毛、豆芽用教学电影。2.设备和其他：光学显微镜、幻灯片、镜子纸、香沥青、脱脂剂等。四、实验方法和步骤(a)，细菌的基本形态和特殊结构的观察1.细菌的基本形态(各种球菌、细菌、弧菌等)请注意细菌的染色性、相对大小、形状和排列方式。观察特殊结构(胶囊、豆芽、鞭毛)观察点：注意这些特殊结构的大小、形状和在细菌内部的位置，有助于识别细菌。(b)，使用光学显微镜油镜1.光学显微镜的结构光学显微镜是观察细菌形态最常用的仪器，其结构分为机器部分和光学部分。机器部分有镜座、镜臂、搬运台、镜管、镜头转换器、调光器等。光学部分包括物镜、目镜、反射镜、电容器、光圈等(见图1-1)。图1-1光学显微镜结构显微镜的连接物镜有低倍率镜、高倍率镜、油镜三种，比例依次增加，认识如下。(1)低比例镜像：镜头标志为10或10/0.25，镜头最短，经常刻有黄色环。(2)高倍率镜子：镜头徽标为40或40/0.65，镜头长，经常刻有蓝色环。(3)柳庆：镜片徽标100或100/1.30，最长的镜片，上面经常刻有白色的光环或“oil”字样。(。2.使用方法(1)照明：使用显微镜时，一定要坐着，把显微镜放在胸部适当的位置。(。将低比例镜像旋转到中心，面向下方聚光器，打开光圈，旋转反射镜以聚焦聚光器(如果灯光为照明，则为凹面镜像；如果自然光为照明，则为平面反射镜)。根据观察到的采样，抬起聚光灯并缩放光圈以获得最佳亮度。用低倍率镜子或高倍率镜子观察时，要适当地减少光圈，减少聚光装置。照镜子的时候，光线要强，完全打开光圈，把集中装置升到最高位置。(2)低缩放：将要观测的标本放在装载台上，用弹簧夹和推进器固定，将检查对象部位移到视野正中央，直到无法升高为止。用左眼观察目镜，慢慢调节粗糙的调节器，使托架下降，调整细长的调节器，直到看到模糊的图像为止。(3)使用油镜：低倍率镜找到形状，进行清澈调整后，转动四物镜，将一滴香节滴到玻璃标本上，将油镜转换为中央，慢慢调节粗调节器，将镜片浸入油中，油镜几乎接触幻灯片时停止转动(从旁边看的时候)，观察目镜边缘轻轻转动粗调节器(此时只有透镜上升)镜子检查时，标本要朝一定的方向“弓”移动，直到观察到整个标本为止，防止泄漏。观察时要同时睁开双眼，左眼要观察，右眼要写在图画或记录上。观察到标本后，先取下四物镜片，然后转动粗糙的调节器，卸下载具，取出搬运幻灯片，立即擦拭镜子纸，将镜片的香沥青擦干净。4.注意事项(1)显微镜是精密光学仪器，移动时要用右手紧握镜臂，用左手稳定镜座，平端对胸轻放。(2)将显微镜放在实验台上时，先放好镜座的一端，然后再全部放直，不能让镜座与前面同时接触台面。这样振动太大，镜片和微型调节器的装置容易损坏。(3)要避免强酸、强酸、氯仿、乙醚、酒精等化学药品接触显微镜，避免阳光直射，确保显微镜总是干净，不附着油和灰尘。(4)不要乱动目镜和物镜，当需要拔掉目镜时，必须用布盖住镜筒的上嘴，防止灰尘进入镜筒。更换物镜时，必须分离后倒放在干净的台面上，立即装载在装有木箱物镜的管子上。(5)微调节器是显微镜最细微、最脆弱的部分，不要在一个方向连续旋转几周，要稍微前后旋转。(6)镜片必须清洁，油镜使用后要立即用擦过的纸擦拭香和沥青。如果油镜镜片的油迹没有清除干净，则应将1，1:1醇醚混合液或二甲苯滴在镜片纸上，擦镜片，将镜片上残留的醇醚混合液或二甲苯擦干净。(7)将显微镜擦干净后，取出标本碎片，放下集中装置，将物镜转换成“产品”字形，放入显微镜室。五、作业和思考1.实验报告实验3细菌运动观察及革兰染色一、实验目的1.学习制作水片(水滴法)观察细菌的运动性掌握格兰姆染色步骤。无菌操作技术的初步掌握二、实验原理革兰染色原理三、实验材料和工具E.coli，6个葡萄球菌(培养8-24小时)，幻灯片，封面幻灯片，显示微镜、香沥青、二甲苯、明镜纸擦、灭菌水、接种环、酒精灯、火柴、吸墨纸、革兰氏染色液四、实验方法和步骤1.观察细菌运动水浸器低倍率镜子高倍率镜子油镜清洁还原强调每个步骤的注意问题清理步骤革兰氏染色A.制作涤纶(混合)干固定(过)B.染色结晶紫1分钟水洗里皮1分钟洗涤 95%酒精脱色30秒-1分钟洗沙红灰染色1分钟洗干显微镜检查强调各阶段的注意事项水滴要变小，不能烧得太小，染色是混合膜，细菌量合适，时间合适。关羽关键步骤是脱色五、无菌操作技术的实验演示六、作业和思考1.实验报告2.E.coli，绘制金黄色葡萄球菌革兰染色结果图表实验四酵母、真菌个体和菌落特性一、实验目的学习酵母、真菌形态观察方法了解和掌握酵母、根霉、曲霉、青霉的形态特征二、实验原理(略)三、实验材料和工具酵母(48小时培养)、根霉、曲霉、青霉菌(3-5天培养)各6盘，幻灯片，盖幻灯片、显微镜、无菌水、接种环、酒灯、火柴、苏格兰磁带四、实验方法和步骤观察殖民地特性2.观察个别形状酵母抽提物提取物真菌苏格兰胶带粘贴方法酵母：形态，假菌丝，厚孢子，芽情况根霉：菌丝体无区分、葡萄菌丝、假根、胶囊茎、孢子囊、孢子孢子曲霉：菌丝体有分裂、足细胞、上部囊、分生孢子茎棕榈枝、连锁分生孢子青霉：菌丝体是分离的，没有足细胞，没有顶囊，有分生孢子茎扫帚形分生孢子串行一轮学生，两轮学生，多轮学生对称，不对称五、作业和思考1.实验报告绘制酵母、根霉、曲霉、青霉个体形态图实验5土壤微生物的分离纯化一、实验目的1.学习和掌握从土壤中分离和纯化微生物的方法涂层平板法、反向平板法、标记法2.无菌操作技术集成3.学做平板电脑，培养皿二、实验原理各微生物需要不同的营养条件，使用不同的培养基将土壤中的细菌、放线菌、真菌分离，添加一些物质，形成选择培养基，达到分离目的三、实验材料和工具土壤、灭菌三角瓶、吸管、试管、培养皿、红酒灯、火柴、无菌水、涂布机、培养箱、接种环、徽章、链霉素、10%苯酚、斜坡、电炉四、实验方法和步骤1.土壤准备土样10g90ml无菌水在三角瓶中震动20分钟，分别将10-2 10-3，10-4，10-5的浓度添加到试管中9ml无菌水2.板块溶解培养基约45冷却逆平板PDA链霉素1号10%苯酚3.涂层板分离0.2毫升土壤悬浮平板涂层细菌培养301-2天，放线菌，真菌255-7天4.精制平扫法纯化细菌、放线菌名声拼字游戏文化真菌的点连接纯化信誉积分培养5.宦官五、实验演示1.无菌操作板培养皿包装方法六、作业和思维实验报告实验6真菌孢子数的测定一、实验目的1.明确血细胞计数板计数的原理。2.掌握利用血细胞计数板的微生物计数方法。二、实验原理血细胞计数板的构成原理：血细胞计数板由四个垂直槽组成，中间宽的平台由短槽分成两个，每侧的平台各有一根棒槌，每个电网共分为九个大方块，中间大方块是计数室。123III左上侧右上侧中心左下角右下角计数室的刻度有两种规格：1625或2516。现在一般有2516个，即计数室(大方块)，分为25个中间方块，每个都分为16个小方块。计算5个中间棋盘格的细菌总数，平均每个中间棋盘格的数量，乘以25或16，计算出大棋盘格的细菌总数，然后转换为lml细菌的细菌总数。5个中间方块中的细菌总数是a，细菌稀释倍数是b，25个中间方块中的计数板1mL菌液中的细菌总数=a/525104b=5000ab(个)同样，如果是16个中间棋盘格的计数板，1mL菌液中的细菌总数=a/51610b=32000ab(个)三、实验材料和工具1.菌株真菌2.仪器或其他仪器血细胞计数板、显微镜、复盖幻灯片、无菌毛细管滴管。四、实验阶段L.细菌悬浮制备用无菌生理盐水将真菌孢子制成适当浓度的细菌悬浮液。2.镜子检查室添加样品前，对数字化板的系数室进行镜子检查。有污物要洗干净晾干，才能计数。3.添加样品用复盖幻灯片复盖干净干燥的血细胞计数板，使用灭菌状态的毛细管滴管，从玻璃灯泡边缘滴落小铃铛，让细菌沿着缝隙自动进入毛细渗透室，一般计数室里可以充满细菌。取样时，首先要摇晃菌液。采样时间计数室不应有气泡生成。4.显微镜系数添加样品，停止5min，将血细胞计数板放在显微镜托架上，首先用低倍率镜找到计数室所在的地方，然后用高倍率换成高倍率洗脸。要适当调节显微镜光线的强弱，对照镜子的显微镜，要注意光线不